李彬 覃光球 張潔宏 何勵(lì) 黃瀟瀟

【摘 要】目的：評(píng)價(jià)乳清蛋白質(zhì)粉的免疫調(diào)節(jié)作用。方法：以3334、1667、834 mg／kg?BW 三個(gè)劑量組的乳清蛋白質(zhì)粉對(duì)小鼠連續(xù)灌胃30天，進(jìn)行抗體生成細(xì)胞、碳廓清、NK細(xì)胞活性等7項(xiàng)免疫指標(biāo)的測(cè)定。結(jié)果：樣品對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)、臟體重比值和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響；樣品能促進(jìn)小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化作用、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和抗體生成細(xì)胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促進(jìn)小鼠的單核-巨噬細(xì)胞的吞噬功能。結(jié)論：乳清蛋白質(zhì)粉具有增強(qiáng)免疫力功能。

【關(guān)鍵詞】乳清蛋白質(zhì)；免疫調(diào)節(jié)

【中圖分類號(hào)】R151.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）03-01106-02

近年來(lái)，牛奶中的特定成分由于具有較直觀的保健效果而逐漸受到人們的重視，甚至被開(kāi)發(fā)成保健食品[1]。乳清蛋白是生產(chǎn)奶酪和凝乳過(guò)程中的副產(chǎn)品，再被認(rèn)清其營(yíng)養(yǎng)和保健作用之前，一度被人們當(dāng)成垃圾產(chǎn)物。牛奶中主要含有兩類蛋白質(zhì)，一類是酪蛋白，另一類是乳清蛋白。乳清蛋白質(zhì)含有一系列具有提高免疫力功效的生物活性物質(zhì)，包括乳鐵傳遞蛋白、?-乳球蛋白、?-乳白蛋白、糖聚肽和免疫球蛋白，等[2]。除此之外，乳清蛋白還具有抗氧化、抗高血壓、抗腫瘤、降血脂、抗病毒、抗細(xì)菌等方面的作用[3]。乳清蛋白已經(jīng)被用于臨床上對(duì)癌癥、艾滋病、乙肝、心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥等疾病的輔助治療試驗(yàn)之中，并收到了一定的療效[3]。本文通過(guò)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、抗體生成細(xì)胞、血清溶血素、碳廓清、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞、NK細(xì)胞活性等7項(xiàng)小鼠免疫指標(biāo)的測(cè)定，研究以乳清濃縮蛋白為主要成分的乳清蛋白質(zhì)粉對(duì)小鼠免疫功能的影響，為評(píng)價(jià)其免疫調(diào)節(jié)作用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

本試驗(yàn)受試物為廣州某公司送檢的乳清蛋白質(zhì)粉，受試物為乳黃色粉末，主要成分為乳清濃縮蛋白。生產(chǎn)批號(hào)為20090301，成人口服推薦劑量為167 mg/Kg?BW。試驗(yàn)前，用純凈水配制成所需濃度溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的清潔級(jí)健康昆明種小鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(桂)2009-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為NO.0001254。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室溫度為22～25℃，相對(duì)濕度為55%～70%。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組和劑量設(shè)置 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物240只，體重18-22 g，分5組，每組48只小鼠。其中，第一組進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞活性測(cè)定，第二組進(jìn)行進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，第三組進(jìn)行臟/體比值、血清溶血素和抗體生成細(xì)胞數(shù)測(cè)定，第四組進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)，第五組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。設(shè)3334、1667、834 mg/Kg?BW（分別相當(dāng)于成人口服推薦用量的20、l0和5倍)三個(gè)劑量組和1個(gè)陰性對(duì)照組，每組12只小鼠。以0.1 ml/10 g?BW的體積給予相應(yīng)劑量組小鼠灌胃，陰性對(duì)照組給予等體積純凈水。每天1次，連續(xù)灌胃30天。

1.3.2實(shí)驗(yàn)方法 采用MTT法檢測(cè)ConA 誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化功能，耳腫脹法檢測(cè)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、Jerne 改良玻片法檢測(cè)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)、血凝法檢測(cè)小鼠血清溶血素水平、半體內(nèi)法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力、內(nèi)眥靜脈注射法檢測(cè)碳廓清能力[4]、乳酸脫氫酶測(cè)定法檢測(cè)NK 細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)主要參照GB15193-2003的相關(guān)試驗(yàn)方法進(jìn)行[5]。

1.4主要儀器設(shè)備和試劑

實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備包括電子分析天平、離心機(jī)、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、半自動(dòng)生化儀、酶標(biāo)儀等。

實(shí)驗(yàn)主要試劑包括綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、Hanks 培養(yǎng)液、RPMI1640 培養(yǎng)液、小牛血清、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白（ConA）、1％ 冰醋酸、1 mol/L HCL、異丙醇、MTT、DNFB、PBS 緩沖液（pH 7.2～7.4）、補(bǔ)體（豚鼠血清）、SA 緩沖液、瓊脂糖、YAC-1 細(xì)胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、0.2 mol/L Tris-HCL 緩沖液、1％ NP40、印度墨汁、雞紅細(xì)胞、Gimsa 染液等。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和組間比較。

2 結(jié)果

2.1 樣品對(duì)小鼠體重和臟器的影響

實(shí)驗(yàn)期間受試動(dòng)物未見(jiàn)中毒癥狀，無(wú)死亡。各劑量組小鼠的體重、增重、胸腺體重比和脾臟體重比與陰性對(duì)照組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），表明該樣品對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)和免疫器官的臟體比值無(wú)明顯影響（表1）。