王紹燕

【摘 要】目的：動(dòng)態(tài)觀察高膽紅素癥新生兒同步換血前中后，T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的變化，為高膽紅素血癥新生兒換療法提供細(xì)胞免疫學(xué)基礎(chǔ)理論。方法：采用間接熒光法和SP法，檢測高膽紅素血癥新生兒換血前、換血中、換血后3個(gè)時(shí)段中T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的表達(dá)水平。結(jié)果：高膽紅素血癥新生兒換血前與換血中、換血后比較，除了換血中CD8外，其它均P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：高膽紅素血癥新生兒換血治療后各種免疫細(xì)胞的變化，證實(shí)了高膽紅素血癥新生兒換血治療是迅速的、科學(xué)的、臨床行之有效的一種治療方法，為高膽紅素血癥新生兒早期換血療法充實(shí)了免疫學(xué)基礎(chǔ)理論。

【關(guān)鍵詞】T細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞；高膽紅素血癥；新生兒；同步

【中圖分類號(hào)】R722 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）03-01103-01

新生兒高膽紅素血癥是由各種原因引起的新生兒期最常見疾病之一，嚴(yán)格威脅新生兒生命健康，約有50%~75%患兒死于急性期，幸存者約有75%~90%留有聽力、視覺、智能發(fā)育等嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥【1】。換血治療是高膽紅素血癥最迅速的方法，目前多采用同步換血治療（即同時(shí)、同步由外周靜脈注血，撓動(dòng)脈或肱動(dòng)脈抽血）【2、3】。本文筆者自2009年1月至2012年12月間在我院新生兒科診斷為病理性高膽紅素血癥新生兒70例進(jìn)行了外周動(dòng)靜脈同步換血療法，同時(shí)在換血治療的前、中、后3個(gè)時(shí)段，分別檢測血清膽紅素變化及血液中免疫細(xì)胞水平的變化，皆在探討換血療法對(duì)高膽紅素血癥新生兒細(xì)胞免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象為2009年1月至2012年1月間在我院兒科診斷為病理性高膽紅素血癥的新生兒70例，其中男性50例，女性20例。胎齡（36+5）W，出生體重（2.886+0.709）kg； 早產(chǎn)118例，足月兒62例。黃疸原因：ABO血型不含溶血病40例，G-6-PD缺乏癥18例，β-地中海盆血1例，感染性黃疸3例，早產(chǎn)兒8例。20例為高膽紅素血癥腦病警告期新生兒。所有患兒均行同步控血治療，住院時(shí)間為5-8d，平均7.2d。高膽紅素血癥新生兒血清均超過342μmol/L，且主要為結(jié)合膽紅素。

所有病例均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)新生兒學(xué)制定的換血標(biāo)準(zhǔn)【4】：（1）產(chǎn)前診斷基本明確而新生兒出生時(shí)，臍帶血紅蛋白低于120g/L，伴水腫、肝脾腫大，心力衰竭者；（2）血清膽紅素超過342μmol/L，且主要為結(jié)合膽紅素者；（3）凡有早期核黃疸癥狀者，不論血清膽紅素濃度高低，都要考慮換血因?yàn)楹它S的發(fā)生與否，除與血清膽紅素有關(guān)外，尚需考慮其他因素；（4）早產(chǎn)兒及前一胎病情嚴(yán)重者，尚需適當(dāng)放寬換血指征。因?yàn)樵绠a(chǎn)兒有較多促進(jìn)核黃疸發(fā)生的因素。前一胎有死胎，全身水腫、嚴(yán)重貧血等病史者，此胎也往往也嚴(yán)重。生后數(shù)天也可考慮換血。

標(biāo)本采集：每一位高膽紅素血癥新生兒在換血前、中、后均抽脂動(dòng)脈肝素抗凝血2ml，以備檢測用。

1.2 方法

①常規(guī)檢查血清膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素在換血前、換血中、換血后3個(gè)時(shí)段變化值；②T細(xì)胞亞群（CD3、CD4、CD8）的測定采用間接免疫熒光技術(shù)，分別檢測CD3、CD4、CD8細(xì)胞百分率。試劑由美國RD有限公司提供，嚴(yán)格按說明操作；③自然殺傷細(xì)胞（NK16、NK57）的測定采用SP法（Biotin-Strdptarin-Peroxdase)，試劑由美國RD有限公司提高，嚴(yán)格按照說明操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

檢驗(yàn)數(shù)據(jù)均以SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 換血前、中后膽紅素變化

70例患兒換血前、中后血清總膽紅素、間接膽紅素顯著下降，換血后總膽紅素、間接膽紅素?fù)Q出率分別為52.66%、52.25%，直接膽紅素?fù)Q血前、中、后無顯著差異，見表1。

2.2 換血前、換血中、換血后3個(gè)時(shí)段T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞表達(dá)水平變化

70例高膽紅素血癥新生兒換血前、中、后T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞比較，P均＜0.01游離膽紅素對(duì)腦細(xì)胞有毒性作用，血與腦游離膽紅素梯度越高，則進(jìn)入腦的量越多，膽紅素腦病的發(fā)生率越高【5】。換血療法可以換出85%~90%的致敏紅細(xì)胞及降低循環(huán)中60%的膽紅素抗體，因此，雙倍量換血能迅速有效地防止膽紅素腦病的發(fā)生【6】本組病人膽紅素的換出率為52.66%，與文獻(xiàn)報(bào)道的50%-60%的膽紅素?fù)Q出率相符合【2.7】。。本組病例中有1例出現(xiàn)膽紅素腦病的癥狀，經(jīng)換血后膽紅素腦病的癥狀消失，但腦干聽覺誘發(fā)電位檢查異常，提示換血能阻止病情的進(jìn)一步發(fā)展，但對(duì)已發(fā)生的腦損傷無逆轉(zhuǎn)作用。因此，必須掌握換血的適應(yīng)癥，對(duì)存在高危因素的患兒應(yīng)盡早行換血術(shù)。同步換血可有效降低血中膽紅素，換出致敏的紅細(xì)胞，減輕溶血，從而避免膽紅素腦病的發(fā)生。

T細(xì)胞是不均一的群體，可根據(jù)表面分子及免疫功能分成不同的亞群。CD3細(xì)胞表達(dá)αβTCR占100%，而CD4、CD8細(xì)胞表達(dá)αβTCR占60%-65%。T細(xì)胞亞群具有識(shí)別抗原、細(xì)胞毒性作用，抑制T細(xì)胞作用。既有免疫調(diào)節(jié)作用，又有效應(yīng)細(xì)胞作用【8】。而自然殺傷細(xì)胞NKCD16、NKCD57也是重要的免疫細(xì)胞，不僅參與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生【9】。這些免疫細(xì)胞在高膽紅素血癥新生兒換血治療前、中、后期3個(gè)時(shí)段的表達(dá)水平，我們進(jìn)行了檢測和相關(guān)性研究。

本資料顯示，高膽紅素血癥新生兒換血前與換血中、換血后各種免疫細(xì)胞比較，P均＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。值得注意的是，高膽紅素血癥新生兒血中高濃度膽紅素可降低人體網(wǎng)關(guān)內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，并抑制細(xì)胞免疫功能【10】。具有毒性作用的間接膽紅素抑制了患兒整體免疫功能。同時(shí)，膽紅素具有細(xì)胞毒性作用，它通過啟動(dòng)活化Fas基因表達(dá)，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞凋亡，使患兒免疫功能降低【11】。高膽紅素血癥新生兒血中膽紅素濃度越高，其毒性對(duì)患兒T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞產(chǎn)生了免疫耐受，表達(dá)水平受到抑制，因此，臨床表現(xiàn)為T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞數(shù)量減少【12】本文證實(shí)了以上相關(guān)理論，同時(shí)也證實(shí)了膽紅素不僅可損害新生兒的顱腦屏障及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，還可致患兒整體的細(xì)胞免疫功能低下，這也是高膽紅素血癥新生兒易并發(fā)感染的理論基礎(chǔ)。

同時(shí)，本資料也進(jìn)一步證實(shí)了同步換血療法是治療高膽紅素血癥新生兒迅速的、科學(xué)的、臨床行之有效的一種方法。從表1、表2 中可以看出，高膽紅素水平由換血前、換血中、換血后、血清膽紅素、間接膽紅素水平由換血前的高濃度水平迅速降低乃至恢復(fù)正常；各種細(xì)胞是由換血前低水平慢慢增高，乃至恢復(fù)正常。這是因?yàn)閾Q血可及時(shí)有效地移去抗體和致敏紅細(xì)胞，減輕溶血，降低患兒血中膽紅素血清濃度、防止核黃疸，及時(shí)糾正貧血，防止新生兒心力衰竭。

由此可見，同步換血療法可有效降低血中膽紅素，換出致敏紅細(xì)胞，從而避免膽紅素腦病的發(fā)生。換血后血?dú)?、電解質(zhì)的內(nèi)環(huán)境的變化均在正常范圍，同時(shí)換血療法可提高高膽紅素血癥新生兒的細(xì)胞免疫功能，并可縮短療程。筆者通過動(dòng)態(tài)觀察高膽紅素血癥新生兒換血治療的各種免疫細(xì)胞的變化，證實(shí)了高膽紅素癥新生兒換血治療是迅速的、科學(xué)的、行之有效的一種方法。本研究為高膽紅素血癥新生兒換血療法充實(shí)了免疫學(xué)基礎(chǔ)理論。

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