王 童，劉娜娜，劉媛媛，王艷敏

(北京碧生源藥業(yè)有限公司，北京102433)

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HPLC法測定番瀉葉中番瀉苷A、番瀉苷B含量

王 童，劉娜娜，劉媛媛，王艷敏

(北京碧生源藥業(yè)有限公司，北京102433)

目的：對番瀉葉中番瀉苷A、番瀉苷B的含量測定方法進行方法學(xué)確認。方法：流動相為乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0)(1→10) (35∶65)；檢測波長為340nm；流速：1.0mL·min-1；進樣體積為10μL。結(jié)果：番瀉苷A的線性方程為Y=956.03X-2.4468，R=1.0000；番瀉苷B的線性方程為Y=932.98X-3.232，R=1.0000；番瀉苷A、番瀉苷B的回收率分別為99.52%、101.32%，RSD%分別為0.98%、1.75%。結(jié)論：中國藥典收載的番瀉葉的含量測定方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于該品的質(zhì)量控制。

HPLC；番瀉葉；含量

番瀉葉為豆科植物狹葉番瀉(CassiaangustifoliaVahl)或尖葉番瀉(CassiaacutifoliaDelile)的干燥小葉，是國家食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定可用于保健食品的物質(zhì)，近年來應(yīng)用越來越廣泛。該品含有番瀉苷A及番瀉苷B，并含蔥酮衍生物：蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸等，具有瀉熱導(dǎo)滯的功效。此品收載于《中國藥典》2010年版一部，本文對其含量測定方法進行方法學(xué)確認。

1 儀器與試藥

1.1 儀器設(shè)備

儀器：Agilent 1260 HPLC；色譜柱： Agilent ZORBAX SB-C184.6mm×250mm, 5-micron，S.N.:USCL036342。

1.2 試藥與試劑

中藥材番瀉葉由北京盛世龍藥業(yè)有限公司提供；番瀉苷A(110824-201301，94.7% )、番瀉苷B(110825-201301，94.9%)對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供。乙腈為色譜純；冰醋酸、醋酸鈉、四庚基溴化銨、碳酸氫鈉均為分析純。

2 試驗方法

2.1 對照品溶液制備

取番瀉苷A對照品、番瀉苷B對照品適量，減壓干燥12h，置棕色量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液制成每1mL含番瀉苷A 50μg、番瀉苷B 0.1mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液制備

取本品細粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.1%碳酸氫鈉溶液50mL，稱定重量，超聲處理15min(30～40℃)，放冷，再稱定重量，用0.1%碳酸氫鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

C18柱；流動相為乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0)(1→10)(35∶65)混合溶液1 000mL中，加入四庚基溴化銨2.45g；檢測波長為340nm；柱溫為40℃；進樣量為10mL·min-1；理論塔板數(shù)按番瀉苷B峰計算應(yīng)不低于6 500。

3 結(jié)果

3.1 色譜行為

在上述色譜條件下，番瀉苷A、番瀉苷B能達到良好的分離，番瀉苷B的保留時間約為7.5min，番瀉苷A的保留時間約為14.0min，兩峰分離度良好，在番瀉苷B色譜峰前有一小雜質(zhì)峰，兩者分離度為5.2，分離度符合檢測要求。

圖1 番瀉葉中番瀉苷A、番瀉苷B分離效果

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 稱取番瀉苷A 7.09mg(實際稱取7.49mg，純度為94.7%)與番瀉苷B 12.00mg(實際稱取12.64mg，純度為94.9%)對照品分別至50mL棕色量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。分別吸取1mL、2mL、3mL、4mL、7mL、10mL于10mL棕色量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述6個濃度的溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 番瀉苷A回歸方程為Y=956.03X-2.4468， R=1.0000，表明番瀉苷A對照品進樣量在0.1418～1.4180μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。番瀉苷B回歸方程為Y=932.98X-3.232，R=1.0000，表明番瀉苷B對照品進樣量在0.2400～2.4000μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 回收率試驗

取番瀉葉細粉，稱取0.25g，精密稱定，平行操作6份，置于6個棕色具塞錐形瓶中，分別精密加入以0.1%碳酸氫鈉為溶劑配制的含番瀉苷A 29.96μg·mL-1與番瀉苷B 50.56μg·mL-1對照品的混合對照品溶液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理15min(30～40℃)，放冷，再稱定重量，用0.1%碳酸氫鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別吸取上述6個濃度的溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。經(jīng)統(tǒng)計，番瀉苷A、番瀉苷B的回收率分別為99.52%、101.32%，RSD%分別為0.98%、1.75%，表明回收率良好。

3.4 精密度試驗

照前述含量測定方法，平行配制6份樣品，分別測定每份樣品的含量。經(jīng)統(tǒng)計，番瀉苷A的RSD為0.11%，番瀉苷B的RSD為0.07%,表明該方法精密度良好。

4 討論

流動相配制過程中，四庚基溴化銨為離子對色譜試劑，不溶于水，所以在配制5mmol·L-1四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0)(1→10)時，表現(xiàn)為渾濁狀態(tài)，但加入乙腈后，四庚基溴化銨迅速溶解，混合溶液變得澄清。

本實驗用同一種方法同時測定兩種物質(zhì)，番瀉苷A和番瀉苷B的線性良好；番瀉苷A、B的回收率均達到99.5%以上，操作簡單、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于實驗室質(zhì)量控制。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[M].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版杜，2010:326.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-04-22

王童(1979-)，男，北京碧生源藥業(yè)有限公司執(zhí)業(yè)藥師、中藥師，研究方向為藥品研發(fā)。

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1673-2197(2014)15-0032-01