胡宇，蔣燕，何敏靜，陳寶葵（佛山市順德區(qū)中心血站，廣東佛山 528300）

目前，我國血液病毒篩查項目中傳染性標(biāo)志物的主要檢測方法是酶聯(lián)免疫檢測。血清學(xué)轉(zhuǎn)換窗口期的漏檢是當(dāng)前檢測策略下風(fēng)險產(chǎn)生的主要原因。其次還有病毒變異導(dǎo)致的檢測試劑不識別以及低病毒載量的慢性攜帶狀態(tài)所造成的漏檢等。核酸檢測被視為降低血清學(xué)窗口期漏檢風(fēng)險及低病毒載量檢出的最佳解決方法。

隨著核酸檢測技術(shù)在中國的發(fā)展，為進(jìn)一步保障臨床輸血安全，提高血液質(zhì)量，部分血站同時采用NAT技術(shù)與酶聯(lián)免疫技術(shù)對血液病毒進(jìn)行篩查。為全面合理評估血清學(xué)檢測和核酸檢測在降低輸血相關(guān)感染風(fēng)險中的相關(guān)性，我們擬通過對本站酶聯(lián)免疫檢測HBsAg與抗-HCV陽性反應(yīng)血清標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，探討兩次酶聯(lián)免疫檢測方法與NAT技術(shù)對HBV、HCV檢測的關(guān)聯(lián)?，F(xiàn)將檢測情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 本站2013年1至6月HBsAg、抗-HCV檢測陽性的部分無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本。

1.1.2 儀器 金立LD5-10B離心機(jī)，XANTUS全自動加樣器，F(xiàn)AME24/20全自動酶標(biāo)儀?；鞓悠脚_：Hamitlton Microlab STAR.IVD。提取平臺：COBAS AmpliPrep Lnstrument。擴(kuò)增平臺：COBAS TaqMan Analyzer。

1.1.3 耗材與試劑 ELISA試劑盒HBsAg（國產(chǎn)A、進(jìn)口A），抗-HCV（國產(chǎn)B、進(jìn)口B）；NAT檢測試劑盒Roche MPX V2.0。

1.2 方法

按照酶免檢測試劑說明書采用ELISA方法對22707例無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)酶聯(lián)免疫血液篩查HBsAg、抗-HCV。收集52例HBsAg血清學(xué)篩查陽性的標(biāo)本和49例抗-HCV血清學(xué)篩查陽性的標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測。

分別將HBsAg陽性、抗-HCV陽性標(biāo)本分為3組：HBsAg國產(chǎn)、進(jìn)口酶免檢測同時陽性標(biāo)本31例，單一進(jìn)口酶免試劑陽性標(biāo)本15例，單一國產(chǎn)酶免試劑陽性標(biāo)本6例?？?HCV國產(chǎn)、進(jìn)口酶免檢測同時陽性標(biāo)本25例，單一進(jìn)口酶免試劑陽性標(biāo)本15例，單一國產(chǎn)酶免試劑陽性標(biāo)本9例。將上述標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用樣本率比較的χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酶免檢測結(jié)果

單一國產(chǎn)和進(jìn)口試劑 HBsAg ELISA初篩陽性率分別為0.07%（17/22707）和0.06%（14/22707），國產(chǎn)、進(jìn)口雙試劑HBsAg ELISA陽性率為0.38%（86/22707）。單一國產(chǎn)和進(jìn)口試劑抗-HCV ELISA初篩陽性率分別為0.07%（15/22707）和0.10%（23/22707），國產(chǎn)、進(jìn)口雙試劑抗-HCV ELISA雙陽性率為0.18%（40/22707）。結(jié)果見表1。

表1 無償獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV ELISA篩查情況比較（n＝22707）

HBsAg國產(chǎn)和進(jìn)口試劑ELISA檢測陽性率無顯著性差異（χ2＝0.269，P＞0.05），抗-HCV國產(chǎn)和進(jìn)口試劑ELISA檢測陽性率無顯著性差異（χ2＝1.686，P＞0.05）。

2.2 核酸檢測結(jié)果

52份HBsAg ELISA陽性樣本HBV核酸檢測結(jié)果，49份抗-HCV ELISA陽性樣本HCV核酸檢測結(jié)果見表2。

表2 HBsAg、抗-HCV ELISA陽性樣本HBV、HCV核酸檢測結(jié)果

HBsAg國產(chǎn)和進(jìn)口試劑ELISA檢測陽性率無顯著性差異（χ2＝0.269，P＞0.05），抗-HCV國產(chǎn)和進(jìn)口試劑ELISA檢測陽性率無顯著性差異（χ2＝1.686，P＞0.05）。

3 討論

我們分別采用國產(chǎn)和進(jìn)口酶免試劑，對22707份無償獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行了HBsAg和抗-HCV平行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)進(jìn)口與國產(chǎn)HBsAg、抗-HCV ELISA試劑陽性率未存在顯著性差異。而酶聯(lián)免疫檢測假陽性的原因有：①操作方面，加樣時酶標(biāo)板污染。②試劑方面，試劑的抗原制備不純會造成假陽性，國產(chǎn)試劑的假陽性高于進(jìn)口試劑，兩種以上不同試劑同時檢測為陽性時其真陽性可能性大。③樣本方面，樣本溶血以及自身抗體和交叉反應(yīng)物質(zhì)對檢測結(jié)果也具有干擾作用［1］。因此，應(yīng)選擇靈敏度強、特異性高的檢測方法，并建立專門的試劑質(zhì)量評估方案，使用評估合格的試劑和檢測標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)隨科學(xué)技術(shù)的發(fā)展將成熟的檢測技術(shù)盡快應(yīng)用于血液病毒感染檢測。

本試驗中，HBsAg國產(chǎn)、進(jìn)口雙試劑陽性反應(yīng)血清31例中，27例HBV核酸檢測為陽性，檢出率為87.1%，提示國產(chǎn)進(jìn)口雙試劑陽性時，酶聯(lián)免疫方法的檢測結(jié)果與核酸檢測結(jié)果符合率較高。HBsAg單一國產(chǎn)試劑陽性反應(yīng)血清6例中，HBV核酸檢測陽性1例，檢出率為16.67%；HBsAg單一進(jìn)口試劑陽性反應(yīng)血清8例中，HBV核酸檢測陽性15例，檢出率為53.33%。抗-HCV國產(chǎn)、進(jìn)口雙試劑陽性反應(yīng)血清25例中，14例HCV核酸檢測為陽性，檢出率為56%，提示國產(chǎn)進(jìn)口雙試劑陽性時，酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果與核酸檢測結(jié)果符合率較高。抗-HCV單一國產(chǎn)試劑陽性反應(yīng)血清9例，HCV核酸檢測陽性1例，檢出率為11.11%；抗-HCV單一進(jìn)口酶免試劑陽性反應(yīng)血清15例，HCV核酸檢測陽性2例，檢出率為13.33%。

從理論上講，血清中即使只存在1個病毒核酸分子，通過PCR擴(kuò)增后都能檢測出來，但在實際工作中，血清中病毒核酸含量、PCR試劑的檢測靈敏度、樣本和擴(kuò)增體系中可能存在某些抑制病毒核酸擴(kuò)增的因素等都會影響NAT檢測結(jié)果。

核酸檢測不能替代常規(guī)的血清學(xué)檢測，兩者在降低輸血相關(guān)病毒感染風(fēng)險中的作用也并不只是簡單的互補。本試驗中的HBsAg、抗-HCV血清學(xué)雙試劑陽性標(biāo)本因未作進(jìn)一步確認(rèn)試驗，不能排除假陽性的存在；同樣，若標(biāo)本中病毒載量極低，也不能排除核酸檢測假陰性的可能。必要的獻(xiàn)血者追蹤和更進(jìn)一步的實驗室確證手段及檢測策略應(yīng)有助于血清學(xué)檢測和核酸檢測不一致結(jié)果的解釋和分析［2－3］。

NAT檢測對提高血液安全有幫助，雖然從經(jīng)濟(jì)學(xué)角度考慮，出現(xiàn)大量標(biāo)本混檢的形式［4－5］，但對于受血者來說，一旦輸入感染病毒的血液，被感染的概率就是100%。因此，大多數(shù)國家從人權(quán)角度考慮仍然主張在經(jīng)濟(jì)允許的條件下開展NAT血液檢測［6］。血液病毒篩查的血清學(xué)方法與核酸檢測方法應(yīng)是互補的，我國應(yīng)建立適合我國國情的血液病毒篩查模式，最大限度地降低輸血殘余風(fēng)險，保證血液安全。

［1］袁曉華，文國新.血液病毒篩查中血清學(xué)和核酸檢測方法應(yīng)用評估 ［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，32（8）：1201-1205.

［2］Hollinger EB，Dodd RY.Hepatitis B virus traceback and lookback：factors to consider［J］.Transfusion，2009，49（1）：176-184.

［3］Allainl JP，Candotti D.Diagnostic algorithm for HBV safe transfusion ［J］.Blood Transfusion，2009，7（3）：174-182.

［4］歐陽玲，黃建國，謝秀華，等.核酸檢測技術(shù)在深圳地區(qū)獻(xiàn)血者血液病毒篩查中的應(yīng)用 ［J］.國際醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2010，31（7）：764-768.

［5］Yugi H，Mizui M，Tanaka J.Hepatitis B virus（HBV）screening strategy to ensure the safety of blood for transfusion through a combination of immunological testing and nucleic acid amplificaltion testing Japanese experience ［J］.J Clin Virol，2006，36（Suppll）：56-64.

［6］Weber B，Muhlbacher A，Melchior W.Detection of an acuteasymptomatic HBsAg negative hepatitis B virus infection in blood donor by HBV DNA testing ［J］.J Clin Virol，2005，32：67-70.

［編輯］ 何勇