張淑瑛，盧小東，王玉月

（1．江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2．常州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003）

（1，3）-β-D葡聚糖和曲霉菌半乳甘露聚糖抗原聯(lián)合檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染的診斷價(jià)值

張淑瑛1，2，盧小東1*，王玉月2

（1．江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2．常州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003）

目的：評(píng)價(jià)（1，3）-β-D葡聚糖［（1，3）-β-D-glucan assay，G test］和曲霉菌半乳甘露聚糖（Aspergillus galactomannan，GM test）抗原聯(lián)合檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染（invasive fungal infection，IFI）的臨床診斷價(jià)值。方法：根據(jù)歐洲癌癥研究治療組織和真菌病研究組（EORTC／MSG）的診斷標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合我國(guó)血液病和惡性腫瘤患者IFI的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則，將臨床72例高度懷疑IFI的患者分為臨床診斷組32例，非感染組40例，采集外周血進(jìn)行G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)檢測(cè)。結(jié)果：G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、Youden指數(shù)分別為68．75%、80．0%、73．33%、76．19%、0．487 5和62．50%、82．5%、74．07%、73．33%、0．45；G／GM試驗(yàn)敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、Youden指數(shù)分別為90．63%、72．5%、72．5%、90．63%、0．631 3。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單獨(dú)檢測(cè)時(shí)兩試驗(yàn)敏感性、特異性均無(wú)顯著性差異，而聯(lián)合檢測(cè)可提高敏感性。結(jié)論：G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)對(duì)IFI有一定診斷價(jià)值，而聯(lián)合檢測(cè)大大提高了敏感性，對(duì)IFI的診斷更有價(jià)值。

（1，3）-β-D葡聚糖；半乳甘露聚糖；侵襲性真菌感染

侵襲性真菌感染（invasive fungal infection，IFI）又稱(chēng)系統(tǒng)性真菌感染，是指真菌侵入人體，在組織、器官或血液中生長(zhǎng)、繁殖，并導(dǎo)致組織損傷及炎癥反應(yīng)的疾病。近年來(lái)，隨著廣譜抗生素、抗腫瘤藥物及免疫抑制劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，介入治療、器官移植、骨髓移植及導(dǎo)管插管等技術(shù)的普遍開(kāi)展，以及艾滋病的流行，院內(nèi)深部真菌感染患者明顯增多［1］。由于IFI診斷困難，缺乏早期診斷手段，其發(fā)病率和病死率逐年上升［2－3］。本文通過(guò)（1，3）-β-D葡聚糖（G試驗(yàn)）和曲霉菌半乳甘露聚糖（GM試驗(yàn)）聯(lián)合檢測(cè)評(píng)價(jià)兩者對(duì)IFI診斷的價(jià)值。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本來(lái)源

收集2013年3月至12月常州市第一人民醫(yī)院72例疑似IFI患者的外周血標(biāo)本，男47例，女25例，年齡24～93歲。根據(jù)歐洲癌癥研究治療組織和真菌病研究組（EORTC／MSG）的診斷標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合我國(guó)血液病和惡性腫瘤患者IFI的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則（第3次修訂）［4］，將72例患者分成臨床診斷組32例，非感染組40例，暫無(wú)確診組。G試驗(yàn)使用無(wú)熱原肝素鋰抗凝血漿，GM使用促凝血清。

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 G試驗(yàn) 采用北京金山川科技發(fā)展有限公司的真菌（1，3）-β-D葡聚糖檢測(cè)試劑盒，采用MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)采集的抗凝血漿進(jìn)行3 000 r／min離心1 min，取0．1 mL待測(cè)血漿加入裝有0．9 mL樣品處理液中，70℃孵育10 min，取出后立即放入冷卻槽中冷卻5 min，取0．2 mL加入酶反應(yīng)主劑中，混勻后轉(zhuǎn)移至無(wú)熱源平底試管中上機(jī)檢測(cè)，反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)計(jì)算待測(cè)血漿中（1，3）-β-D葡聚糖的含量。

1．2．2 GM試驗(yàn) 采用天津貽諾琦生物工程有限公司的曲霉菌半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒（ELISA）檢測(cè)，先將預(yù)處理過(guò)的待檢血清樣本與半乳甘露聚糖抗體混合并溫育后，加入包被有半乳甘露聚糖的酶標(biāo)板內(nèi)，經(jīng)溫育和洗滌后，加入酶標(biāo)抗體，再次經(jīng)過(guò)溫育和洗滌后加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出待測(cè)樣本中半乳甘露聚糖的含量。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件，兩試驗(yàn)敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

72位患者中臨床診斷32例，排除診斷40例，尚無(wú)確診病例。臨床診斷組為真陽(yáng)性組，非感染組為真陰性組，以檢測(cè)試劑盒提供的參考范圍為依據(jù)，（1，3）-β-D葡聚糖的質(zhì)量濃度≥60 pg／mL為陽(yáng)性，半乳甘露聚糖質(zhì)量濃度≥0．95μg／L為陽(yáng)性，G試驗(yàn)或GM試驗(yàn)中的任何一項(xiàng)為陽(yáng)性或者兩者都為陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性，結(jié)果見(jiàn)表1。

分別分析G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)、G／GM試驗(yàn)的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）、陰性預(yù)測(cè)值（NPV）、Youden指數(shù)，見(jiàn)表2。G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)的敏感性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0．277，P＝0．60），兩試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的敏感性高于G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)的單獨(dú)檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝4．730，P＝0．03；χ2＝7．053，P＝0．01）。G／GM試驗(yàn)與G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)的特異性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0．621，P＝0．431；χ2＝1．147，P＝0．284）。G／GM試驗(yàn)與G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)的PPV（χ2＝0．006，P＝0．938；χ2＝0．020，P＝0．887）和NPV（χ2＝2．613，P＝0．106；χ2＝3．565，P＝0．059）比較，差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

近年來(lái)，IFI患者越來(lái)越常見(jiàn)，我院以呼吸科、ICU、血液科、老干部病房為主。由于IFI的傳統(tǒng)培養(yǎng)方法時(shí)間較長(zhǎng)陽(yáng)性率低，作為金標(biāo)準(zhǔn)的組織病理和深部組織培養(yǎng)具有創(chuàng)傷性，從而限制了臨床的早期診斷，因此，外周血（1，3）-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖的檢測(cè)受到了廣泛關(guān)注，目前，這兩種抗原檢測(cè)已成為真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。

（1，3）-β-D葡聚糖廣泛分布于多種真菌細(xì)胞壁中，為真菌的特有成分，占真菌胞壁成分50%以上。當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織，經(jīng)吞噬細(xì)胞吞噬、消化后，（1，3）-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放，使得血液或其他體液中（1，3）-β-D葡聚糖含量增高［5］，通過(guò)G試驗(yàn)檢測(cè)（1，3）-β-D葡聚糖的含量能夠及時(shí)反映真菌感染情況。本研究中，G試驗(yàn)的敏感性、特異性、PPV、NPV、Youden指數(shù)分別為68．75%、80．0%、73．33%、76．19%、0．487 5，結(jié)果顯示此試驗(yàn)敏感性不高，特異性較好，假陽(yáng)性率較低，但它只能提示有無(wú)真菌侵襲性感染，并不能確定為何種真菌感染，這是此方法的缺陷。此外，G試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果容易受某些干擾因素影響，比如應(yīng)用纖維素膜進(jìn)行血液透析、使用某些含有葡聚糖的抗腫瘤類(lèi)藥物、磺胺類(lèi)藥物以及某些細(xì)菌敗血病。

曲霉菌半乳甘露聚糖是曲霉菌多糖細(xì)胞壁的一種成分，在侵襲性感染過(guò)程中釋放入血，可通過(guò)檢測(cè)外周血中半乳甘露聚糖的含量判斷是否有IFI。本次實(shí)驗(yàn)中，GM試驗(yàn)敏感性與FDA公布的結(jié)果有一定差距，可能與檢測(cè)試劑不同及樣本量較少有關(guān)。本次研究中GM試驗(yàn)采用的是ELISA競(jìng)爭(zhēng)法，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)［6－7］中報(bào)道的GM試驗(yàn)大多采用的是ELISA雙抗體夾心法。目前認(rèn)為影響GM試驗(yàn)結(jié)果最常見(jiàn)的因素為β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物的使用［8］，特別是哌拉西林／他唑巴坦，因此在檢測(cè)曲霉菌半乳甘露聚糖時(shí)，應(yīng)避免給患者使用此類(lèi)藥物。

兩試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)提高了敏感性，有助于真菌感染的診斷，為臨床提供了抗真菌搶先治療的依據(jù)［9］。本研究表明，血清半乳甘露聚糖和血漿（1，3）-β-D葡聚糖檢測(cè)均可用于診斷IFI，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)IFI的診斷價(jià)值更大。但是，與單獨(dú)檢測(cè)相比，G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)特異性、PPV、NPV差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與本實(shí)驗(yàn)病例數(shù)較少有關(guān)。

因?yàn)楦蓴_物質(zhì)的存在，GM試驗(yàn)和G試驗(yàn)均存在假陽(yáng)性結(jié)果，可以通過(guò)多次檢測(cè)來(lái)降低假陽(yáng)性率［10］。因此，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)陽(yáng)性的病例仍需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷是否存在IFI?？傊?，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)因其具有無(wú)創(chuàng)傷、有效、快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，二者的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)臨床診斷IFI有很大的幫助。

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R446．5

B

1671－7783（2014）06－0495－02

10．13312／j．issn．1671-7783．y140125

*：通訊作者，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：xdglu＠ujs．edu．cn

2014－05－13 ［編輯］ 何承志