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        血必凈對脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠的保護作用

        2014-04-13 05:37:42張之齡童小文徐兵朱健
        中國臨床保健雜志 2014年4期
        關(guān)鍵詞:亞組膿毒癥肺泡

        張之齡,童小文,徐兵,朱健

        (上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院急診科,上海200011)

        血必凈是在古方血府逐瘀湯基礎(chǔ)上精煉出的復(fù)方中藥靜脈制劑,由中藥赤芍、川芎、丹參、紅花、當(dāng)歸的提取物組成,具有良好的活血化瘀、疏通絡(luò)脈、潰散毒邪的作用。本研究通過大鼠靜脈注射脂多糖(LPS)致膿毒癥肺損傷模型。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物 2.5~3.5月齡健康雄性Wistar大鼠45只,體質(zhì)量250~280 g/只,由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供[生產(chǎn)許可證號:SCXK(滬)2008-0016]。

        1.2 主要試劑與儀器 脂多糖(Escherichia coliO127:B8,L3129,Sigma,美國);大鼠 TNF-α ELISA檢測試劑盒(R&D,美國,上海玉博公司分裝);血必凈注射液(規(guī)格10 mL/支,天津紅日藥業(yè)有限公司);生物光學(xué)顯微鏡(Nikon,日本);全自動血氣分析儀(Raduometer ABL800,丹麥)。

        1.3 模型制備與標(biāo)本收集 以10%水合氯醛5 mL/kg腹腔注射將大鼠麻醉后固定,經(jīng)大鼠股靜脈按5 mg/kg注射 LPS。45只 SPF級雄性成年Wistar大鼠隨機分為三組:健康對照組(n=15),脂多糖組(LPS組,n=15),血必凈組(XBJ組,n=15)。血必凈組在造模前半小時靜脈內(nèi)給予血必凈4 mL/kg,健康對照組和LPS組則給予等容積0.9%氯化鈉注射溶液。在造模后6 h、12 h、24 h各組隨機處死大鼠5只,分別作為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亞組,留取大鼠肺組織、抗凝動脈血及血清待測。

        1.4 檢測指標(biāo)及方法

        1.4.1 動脈氧分壓測定 腹主動脈取血0.5 mL,血氣分析儀測定各時間點的血氧分壓(PaO2)。

        1.4.2 肺組織濕/干重比(W/D)測定 大鼠右肺上葉組織,濾紙吸干表面水分,置于一干燥潔凈的玻璃試管中,經(jīng)電子天平精確稱重后,置于70℃恒溫烤箱內(nèi),烘干72 h后再稱重,計算前后兩者的比值為肺濕/干重(W/D)比。

        1.4.3 肺組織病理觀察及ALI病理評分 留取右肺下葉,4%多聚甲醛溶液固定24 h,石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察肺組織病理形態(tài)變化。按照Mikawa的方法[1]進行肺組織病理半定量評分。評分標(biāo)準(zhǔn):對①肺泡充血,②出血,③肺泡腔或血管壁中性粒細胞浸潤或聚集,④肺泡壁增厚和(或)透明膜形成四項指標(biāo),分別依病變輕重評0~4分(0分指無病變或非常輕微病變,1分指輕度病變,2分指中度病變,3分指重度病變,4分指極重度病變),總分16分;四項評定分?jǐn)?shù)總和為肺損傷的總評分。

        1.4.4 血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測 心臟采血1 mL,靜置30 min后再以3500 r/min離心15 min,取上清液置于-20℃ 冰箱保存,酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定血清TNF-α濃度。

        1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件包分析,多組均數(shù)采用單因素方差分析(ONE-WAY ANOVA),組間兩兩比較采用SNK法。

        2 結(jié)果

        2.1 動脈血氣分析結(jié)果 LPS組大鼠PaO2較對照組相應(yīng)時點顯著下降(P<0.05),于6 h時間點有所下降,12 h下降明顯,24 h呈現(xiàn)嚴(yán)重的缺氧狀態(tài),PaO2跌至(58.0 ±3.16)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)。XBJ組動脈PaO2各時間點較LPS組明顯升高(P<0.05),見表1。

        表1 各組動脈血氧分壓PaO2結(jié)果的比較(±s,mm Hg)

        表1 各組動脈血氧分壓PaO2結(jié)果的比較(±s,mm Hg)

        注:與對照組同時間點比較,aP<0.05;與LPS組同時間點比較,bP<0.05

        組別 鼠數(shù)(只)Ⅰ亞組(6 h)Ⅱ亞組(12 h)Ⅲ亞組(24 h)5 94.0 ±1.87 93.6 ±3.71 94.4 ±1.14 LPS 組 5 73.2 ±2.38a61.2 ±3.49a58.0 ±3.16a XBJ組 5 84.0 ±2.28ab76.0 ±1.58ab72.6 ±2.07對照組ab

        2.2 肺組織W/D比值測定 與對照組相比,LPS組大鼠W/D隨著時間點的延長而上升,24 h達NS組同時間點的1.73倍,XBJ組W/D亦隨著時間點的延長而上升,但明顯低于LPS組同時間點,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

        表2 肺組織濕/干重比值的比較(±s)

        表2 肺組織濕/干重比值的比較(±s)

        注:與對照組同時間點比較,aP<0.05;與LPS組同時間點比較,bP<0.05

        組別 鼠數(shù)(只)Ⅰ亞組(6 h)Ⅱ亞組(12 h)Ⅲ亞組(24 h)5 4.12 ±0.08 4.25 ±0.17 4.32 ±0.21 LPS 組 5 5.64 ±0.75a6.21 ±0.90a7.46 ±0.82a XBJ組 5 4.62 ±0.24ab4.98 ±0.16ab6.03 ±0.42對照組ab

        2.3 肺組織病理形態(tài)學(xué)變化及ALI病理評分 光鏡下,健康對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整,肺泡隔無水腫、無炎癥,肺泡腔清晰。且各時間點無明顯差異;LPS組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)基本消失,肺泡隔增寬,部分肺泡內(nèi)見滲出、水腫、出血,肺間質(zhì)見大量炎癥細胞浸潤。且隨時間點增長而明顯。XBJ組大鼠肺組織肺泡隔略有增寬,部分肺泡內(nèi)見滲出、水腫、出血,肺間質(zhì)見少量炎癥細胞浸潤。三組大鼠ALI病理評分結(jié)果見表3。

        2.4 血清TNF-α測定結(jié)果 致炎后6 h,LPS組血清中TNF-α的濃度大幅上升(P<0.05),6 h后回落,12~24 h時與對照組相應(yīng)時點差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);XBJ組致炎后6 h的TNF-α的濃度也大幅上升,但明顯低于LPS組(P<0.05),6 h后與對照組相應(yīng)時點比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表4。

        表3 各組大鼠病理半定量評分的比較(±s)

        表3 各組大鼠病理半定量評分的比較(±s)

        組別 鼠數(shù)(只)Ⅰ亞組(6 h)Ⅱ亞組(12 h)Ⅲ亞組(24 h)5 1.0 ±0.7 1.2 ±0.8 1.4 ±0.9 LPS 組 5 11.2 ±1.1a 13.0 ±0.7a 13.4 ±0.9a XBJ組 5 9.2 ±1.1ab 10.4 ±1.1ab 10.8 ±1.1對照組ab

        表4 各組大鼠血清中TNF-α的濃度(±s,pg/mL)

        表4 各組大鼠血清中TNF-α的濃度(±s,pg/mL)

        注:與對照組同時間點比較,aP<0.05;與LPS組同時間點比較,bP<0.05

        組別 鼠數(shù)(只)Ⅰ亞組(6 h)Ⅱ亞組(12 h)Ⅲ亞組(24 h)22.6 ±6.8 17.2 ±7.2 5 15.3 ±6.4 17.3 ±7.5 18.5 ±8.5 LPS 組 5 56.6 ±8.9a 27.3 ±10.6 21.2 ±5.9 XBJ組 5 35.2 ±10.8ab對照組

        3 討論

        經(jīng)過長期大量的基礎(chǔ)和臨床驗證,血必凈注射液能拮抗內(nèi)毒素[2]及 IL-1、IL-6[3]的釋放,保護血管內(nèi)皮細胞[4],增強單核細胞人類白細胞抗原(HLADR)表達,促進免疫功能恢復(fù)[5],清除氧自由基,改善組織灌注及微循環(huán),從而能夠控制全身炎癥反應(yīng),可明顯減輕膿毒癥大鼠腎組織炎細胞浸潤、腎小球淤血和腎小管上皮細胞損傷,防止腎血管微血栓形成,并可阻止損傷范圍進一步擴大。降低BUN和Cr水平,顯示出對腎功能明顯的保護作用,因此其對組織器官保護作用越來越受到人們的重視[6]。

        本研究結(jié)果顯示:①血必凈預(yù)處理可以提高大鼠LPS致炎后6 h、12 h和24 h的PaO2;②血必凈預(yù)處理可以降低大鼠LPS致炎后6 h、12 h和24 h的W/D比值;③血必凈預(yù)處理可以降低致炎后6 h、12 h和24 h的肺組織病理半定量評分比值;④肺組織病理切片顯示,血必凈預(yù)處理可以減輕肺組織結(jié)構(gòu)毀損以及中性粒細胞或淋巴細胞浸潤程度;⑤ELISA結(jié)果顯示,LPS致炎后6 h,大鼠血清中TNF-α的濃度即達到峰值,血必凈預(yù)處理可使血清中TNF-α濃度峰值下降。實驗結(jié)果提示:血必凈預(yù)處理能顯著抑制大鼠在ALI初期TNF-α的釋放。

        膿毒癥病情是較為復(fù)雜的,有多種病因,人體有不同的癥狀和體征[7-9]。有人報道凝血異常在疾病的最初階段起了重要的作用,可以引起肺內(nèi)血管損傷及微血栓的形成[10-12]。血必凈具有活血化瘀作用,參與抗凝的過程;血必凈中川芎、丹參、紅花有抑制內(nèi)毒素血癥大鼠微血栓形成的作用,通過其抗凝活性來減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷。

        總之,實驗結(jié)果表明,血必凈預(yù)處理可減少血清中TNF-α的釋放,抑制肺組織內(nèi)炎癥細胞浸潤,使LPS誘導(dǎo)的膿毒癥肺損傷大鼠動脈血氣、肺W/D比值及肺組織病理半定量評分得到一定程度的改善,表現(xiàn)為對肺組織有一定的保護作用。

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