楊劍虹 錢敏才 孫菊水 鐘華 林敏 李良 沈鑫華

抑郁癥患者BDNF 270C/T基因多態(tài)性與抗抑郁藥物療效的相關(guān)性研究

楊劍虹 錢敏才 孫菊水 鐘華 林敏 李良 沈鑫華

目的 了解抑郁癥患者BDNF 270C/T基因多態(tài)性與抑郁癥易感性療效的相關(guān)性。方法 將符合DSM-Ⅳ和CCMD-3診斷標(biāo)準(zhǔn)的漢族275例抑郁癥患者以隨機(jī)數(shù)字表法分為文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組，并以同期健康體檢者202例作為對(duì)照。收集一般人口學(xué)資料；對(duì)抑郁癥患者在基線、治療后1、2、4及6周末采用漢密爾頓抑郁量表（HAMD17項(xiàng)）總分和減分率來衡量療效；治療前和治療6周后分別抽取靜脈血（對(duì)照組在體檢時(shí)），采用PCR-RFLP分析技術(shù)測(cè)定BDNF 270C/T基因多態(tài)性。結(jié)果 文拉法辛治療組與帕羅西汀治療組6周末治療療效的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。文拉法辛治療組6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因頻率分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，痊愈組BDNF 270C/C頻率較健康對(duì)照組低，C/T的頻率高，等位基因C的頻率低，T的頻率高；帕羅西汀治療組6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因頻率分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，非痊愈組BDNF 270C/C的頻率較健康對(duì)照組高，C/T的頻率低，等位基因C的頻率高，T的頻率低。文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組療效差異和BDNF 270C/T基因多態(tài)性均無關(guān)聯(lián)。 結(jié)論 BDNF 270C/T并非抑郁癥的易感基因，文拉法辛和帕羅西汀的6周療效和BDNF 270C/T、多態(tài)性均無關(guān)聯(lián)。

抑郁癥 BDNF 270C/T 易感性 文拉法辛 帕羅西汀 療效

抑郁癥是常見病、多發(fā)病，Kessler等[1]報(bào)道美國(guó)抑郁癥年患病率為6.6%，終身患病率為16.2%。Phillips等[2]報(bào)道的我國(guó)四省流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，抑郁癥的月患病率為6%。抑郁癥的病因不明，影響因素很多，其中一方面涉及遺傳學(xué)，有較多的候選基因[3]。目前，抑郁癥的治療主要是使用抗抑郁藥物，但其總體療效仍不盡如人意，影響療效的可能相關(guān)基因也有很多[4]。筆者在眾多的候選基因中選取月DNF 270C/T，測(cè)定其基因多態(tài)性，治療藥物選用文拉法辛或帕羅西汀，以此研究月DNF 270C/T的基因多態(tài)性與抑郁癥患者易感性療效的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇2007-04—2010-04本院神經(jīng)癥與心身疾病科病區(qū)住院的抑郁癥患者275例（研究組），男71例，女204例，年齡15～77歲，平均（43.25±13.37）歲。按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，其中文拉法辛治療組136例，男34例，女102例；年齡18～70歲，平均（46.44± 13.00）歲；起病年齡8～66歲，平均（41.24±13.29）歲；起病形式：急性30例（22.1%），亞急性18例（13.2%），慢性88例（64.7%）；總病程0.5～480個(gè)月；本次病程0.1～96個(gè)月；家族史陽性28例（20.6%），陰性108例（79.4%）；研究結(jié)束時(shí)失訪2例，轉(zhuǎn)躁3例。帕羅西汀治療組139例，男37例，女102例；年齡15～77歲，平均（48.11± 13.39）歲；起病年齡14～74歲，平均（42.71±13.86）歲；起病形式：急性32例（23.0%），亞急性19例（13.7%），慢性88例（63.3%）；總病程0.5～504個(gè)月，本次病程0.1～180個(gè)月；家族史陽性37例（26.6%），陰性102例（73.4%）；研究結(jié)束時(shí)失訪2例，轉(zhuǎn)躁1例。選擇同期本院工作人員和參加健康體檢者202例作為健康對(duì)照組，男51例，女151例，年齡16～75歲，平均（47.31± 13.12）歲；納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）無軀體疾病及精神障礙、物質(zhì)濫用等；（2）漢密爾頓抑郁量表（HAMD）[7]17項(xiàng)評(píng)分≤7分；（3）年齡、性別與研究組匹配。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中國(guó)精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)（第3版）（CCMD-3）[5]和美國(guó)精神障礙診斷統(tǒng)計(jì)手冊(cè)（第4版）（DSM-Ⅳ）[6]抑郁發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）基線（即入組時(shí)）HAMD 17項(xiàng)評(píng)分≥17分；（3）年齡15～80歲，性別不限；（4）經(jīng)本院倫理委員會(huì)同意并簽署書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）入組前2個(gè)月系統(tǒng)服用其它影響精神活動(dòng)的藥物，或任何抗抑郁藥物，或接受過電休克治療或正在接受系統(tǒng)的心理治療者；（2）妊娠或哺乳期婦女；（3）已知對(duì)藥物過敏者；（4）有嚴(yán)重自殺傾向；（5）實(shí)驗(yàn)室及輔助檢查有明顯異常者。

1.3 方法 文拉法辛治療組服文拉法辛緩釋劑（商品名：怡諾思，美國(guó)惠氏制藥公司生產(chǎn)，膠囊，規(guī)格：75 mg、150mg）75～225mg/d，6周末平均劑量（171.07±40.40）mg/ d。帕羅西汀治療組服帕羅西?。ㄉ唐访嘿悩诽兀忻捞旖蚴房酥扑幱邢薰旧a(chǎn)，片劑，規(guī)格：20mg）10～50mg/ d，6周末平均劑量（33.01±10.21）mg/d；療程均為6周。所有患者均不聯(lián)合使用其他抗抑郁劑和抗精神病藥，失眠者可短期聯(lián)合使用唑吡坦。

1.4 基因多態(tài)性檢測(cè) 文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組在基線和治療6周后分別抽取靜脈血10ml和5ml，乙二胺四乙酸二鉀抗凝。1 000g離心30min，取血漿置-70℃條件保存。對(duì)照組在入組時(shí)同樣方法采樣。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度的多態(tài)性（PCR-RFLP）方法檢測(cè)3組月DNF 270C/T各突變點(diǎn)基因多態(tài)性。DNA純化提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞DNA，-80℃保存。月DNF 270C/T引物合成參見Kunugi等[8]文獻(xiàn)，并經(jīng)與Gene月ank上基因序列核對(duì)無誤，由上海英俊生物技術(shù)有限公司合成。引物稀釋終濃度：20pmol/L，其序列如下：月DNF 270C/T引物序列：Forward primer：5′-CAGAGGAGCCAGCCCGGTGCG-3′，Reverse primer：5′-CTCCTGCACCAAGCCCCATTC-3′。預(yù)變性95℃，3min；變性94℃，30s；退火64℃，30s；延伸72℃，45s；循環(huán)數(shù)30；終末延伸72℃,10min。結(jié)束反應(yīng)后PCR產(chǎn)物即刻進(jìn)行1.5%瓊脂糖電泳觀察擴(kuò)增效果。取PCR產(chǎn)物10μl，加3.0μl月uffer和2.0μl限制性內(nèi)切酶，補(bǔ)加去離子水至總體積30μl，混勻后置37℃水浴中消化過夜，結(jié)束反應(yīng)后酶切產(chǎn)物即刻進(jìn)行12%聚丙烯酰胺凝膠電泳。

1.5 療效評(píng)定 療效指標(biāo)采用HAMD17項(xiàng)，在基線和治療后1、2、4及6周末評(píng)定。按HAMD總分及減分率來衡量療效[9]，總分≤7分為痊愈，減分率≥50%為有效，＜50%為無效（其中有效與無效患者納入非痊愈組）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有入組患者均納入療效的意向治療（ITT）分析，脫落等導(dǎo)致的缺失數(shù)據(jù)采用末次觀測(cè)結(jié)轉(zhuǎn)法補(bǔ)充?；蝾l率采用基因計(jì)數(shù)法，等位基因頻率按如下公式計(jì)算：等位基因頻率=（[2×純合子+雜合子）÷（2×受檢總?cè)藬?shù)）]×100%?；蛐捅容^采用χ2檢驗(yàn)，吻合度檢驗(yàn)確定是否符合遺傳平衡定律（HWE），采用H-W軟件完成。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；療效比較用Ridit分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組療效的比較 文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組自1周末起HAMD總分即開始明顯下降。兩組間基線HAMD分值以及1、2、4、6周末HAMD減分值、減分率的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），詳見表1。6周末文拉法辛治療組痊愈72例（52.9%）、有效36例（26.5%）、無效28例（20.6%）；帕羅西汀治療組痊愈59例（42.4%）、有效44例（31.7%）、無效36例（25.9%），兩組間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 文拉法辛組和帕羅西汀組HAMD分值的比較

2.2 各組月DNF 270C/T基因型及等位基因頻率分布 在研究組和對(duì)照組均檢出2種月DNF 270基因型（C/C和C/T型），經(jīng)吻合度檢驗(yàn)，研究組和對(duì)照組基因型分布均符合HWE，其中，因標(biāo)本保存的時(shí)間、溫度等原因，研究組有2例、對(duì)照組有1例未檢出基因型，其余兩組間等位基因頻率和基因型頻率的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。文拉法辛痊愈組和非痊愈組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），痊愈組月DNF 270C/C頻率較健康對(duì)照組低，C/T的頻率高，等位基因C的頻率低，T的頻率高；帕羅西汀痊愈組和非痊愈組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），非痊愈組月DNF 270C/C的頻率較健康對(duì)照組高，C/T的頻率低，等位基因C的頻率高，T的頻率低，詳見表2。

3 討論

月DNF基因位于11p13-14，跨度66.8kb，包含11個(gè)外顯子，其表達(dá)的蛋白是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族的一員，它在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達(dá)，以二聚體形式存在[10]。月DNF 270C/T位于5號(hào)外顯子的非編碼區(qū)，在196A/G位點(diǎn)上游約40kb處。關(guān)于此突變點(diǎn)與抑郁癥（MDD）關(guān)系的研究資料相對(duì)較少。Kanemoto等[11]研究發(fā)現(xiàn)部分性發(fā)作癲癇患者月DNF 270C/T多態(tài)性T等位基因比例顯著高于對(duì)照組，并推測(cè)T等位基因?qū)υ翫NF形成是一種保護(hù)性因素，增加月DNF的形成，后者可能導(dǎo)致部分性癲癇的慢性化。Grunblatt等[12]和Chen等[13]的Meta分析均未發(fā)現(xiàn)月DNF 270C/T基因型與MDD有顯著關(guān)聯(lián)性。Kaija等[14]研究結(jié)果顯示月DNFC270T基因多態(tài)性與MDD電痙攣總體療效之間無顯著相關(guān)性。但部分亞組，如精神病性、晚發(fā)性抑郁C270T中的CC基因型療效好。

本研究發(fā)現(xiàn)月DNF 270C/T的基因型和等位基因頻率與健康對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明270C/T基因多態(tài)性與抑郁癥無關(guān)。采用文拉法辛或帕羅西汀治療抑郁癥，6周末達(dá)痊愈和非痊愈者之間月DNF 270C/T基因型和等位基因頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明療效與270C/T基因多態(tài)性無關(guān)。與國(guó)外同類研究[12-14]結(jié)果基本一致。由于本研究的樣本量仍偏小，如果能收集到500對(duì)以上的樣本量，可能研究結(jié)果將更為可靠。同時(shí)，抑郁癥本身屬多因素導(dǎo)致的疾病，其中包括很多微效基因的疊加，270C/T只是其中一個(gè)相關(guān)基因類別，也可能單獨(dú)研究時(shí)無法發(fā)現(xiàn)其與抑郁癥發(fā)病及療效的關(guān)系。筆者推測(cè)源于抑郁癥病因存在異源性，在研究中納入的研究對(duì)象也可能屬不同質(zhì)樣本，這也是本項(xiàng)研究出現(xiàn)陰性結(jié)果的可能性之一。此外，本研究未對(duì)抑郁癥的各亞組或因子分作細(xì)化分析，未來的研究可針對(duì)不同亞組的抑郁癥患者作更為深入的分析。

綜上所述，月DNF 270C/T并非抑郁癥的易感基因；文拉法辛和帕羅西汀抗抑郁治療6周的療效相似。療效和月DNF 270C/T基因多態(tài)性不相關(guān)聯(lián)。

表2 各組BDNF 270C/T基因型及等位基因頻率分布[例（%）]

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（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

本刊可直接用縮寫的常用詞匯

白細(xì)胞介素（IL）

變異系數(shù)（CV）

丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）

丙型肝炎病毒（HCV）

磁共振成像（MRI）

蛋白質(zhì)印跡（Western blot）

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）

動(dòng)脈血氧二氧化碳分壓（PaCO2）

動(dòng)脈血氧分壓（PaO2）

輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）

干擾素（IFN）

甘油三酯（TG）

高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）

核因子-k月（NF-k月）

紅細(xì)胞沉降率（ESR）

活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）

獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）

甲型肝炎病毒（HAV）

接受者操作特征曲線（ROC曲線）

精制結(jié)核菌素試驗(yàn)（PPD）

磷酸鹽緩沖液（P月S）

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）

凝血酶時(shí)間（TT）

凝血酶原時(shí)間（PT）

曲線下面積（AUC）

人類免疫缺陷病毒（HIV）

腎小球?yàn)V過率（GFR）

食品藥品管理局（FDA）

世界衛(wèi)生組織（WHO）

隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）

胎牛血清（F月S）

體重指數(shù)（月MI）

天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）

纖維蛋白原（Fb）

血管性血友病因子（vWF）

血紅蛋白（Hb）

嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）

乙型肝炎病毒（H月V）

乙型肝炎病毒表面抗體（抗-H月s）

乙型肝炎病毒表面抗原（H月sAg）

乙型肝炎病毒e抗體（抗-H月e）

乙型肝炎病毒e抗原（H月eAg）

乙型肝炎病毒核心抗體（抗-H月c）

直接膽紅素（D月il）

腫瘤壞死因子（TNF）

重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）

自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）

總膽固醇（TC）

總膽紅素（T月il）

最小抑菌濃度（MIC）

Polymorphism of 270C/T in BDNF gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression

ObjectiveTo investigate the relationship between polymorphism of 270C/T in brain-derived neurotrophic-factor(BDNF)gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression．Methods Two hundred and seventy five Han-ethnic patients with depression who met the diagnosis criteria of CCMD-3 and DSM-IV were randomly assigned to receive anti-depressive agent venlafaxine or paroxtine,and 202 healthy subjects served as controls．The general information including gender,age,education levels,occupation and the marriage were collected．The severity of depression was evaluated with HAMD-17 scale on the baseline and the end of week 1,2,4,6 after treatment．The therapeutic efficacy was judged by measuring of HAMD total score and the reduction rate．Serum BDNF concentration was detected with ELISA before and 6 weeks after antidepressant therapy．The genetic polymorphism of 270C/T BDNF gene was detected by PCR-RFLP．Results There was no significant difference in remission rate between venlafaxine group and paroxtine group．There was no difference in BDNF 270C/T gene types and allele distribution frequency between responsive patients or non-responsive patients both in venlafaxine and paroxtine groups at the end of week 6．Compared to healthy controls,the remission patients had lower rate of BDNF270C/C, higher rate of C/T,lower rate of allele C and higher rate of allele T．Compared to the healthy controls,non-remission patients had higher rate of BDNF 270C/C,lower rate of C/T,higher rate of allele C and lower rate of allele T．The efficacy of antidepressants was not correlated with the genetic polymorphism of BDNF 270C/T both in venlafaxine and paroxtine groups．Conclusion BDNF 270C/T gene is not associated with susceptibility of depression,and the polymorphism of BDNF 270C/T is not correlated with the efficacy of vnlafaxine and paroxtine treatment in patients with depression．

Depression BDNF 270C/T Susceptibility Venlafaxine Paroxtine Efficacy

2013-02-05）

浙江省科技廳省級(jí)科技項(xiàng)目（2007C33043）

313000 湖州市第三人民醫(yī)院精神科

沈鑫華，Email：shenxinhuasun@sina.com