胡思思 葛明華 凌志強(qiáng) 陸曉筱 鄭傳銘 陳超 譚卓

C-MYC在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及意義

胡思思 葛明華 凌志強(qiáng) 陸曉筱 鄭傳銘 陳超 譚卓

目的 研究原癌基因C-MYC在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中的表達(dá)及意義。方法應(yīng)用免疫組化法對(duì)54例SACC和20例正常涎腺組織石蠟標(biāo)本中C-MYC表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)并比較。結(jié)果20例正常涎腺組織中C-MYC均呈陰性表達(dá)，54例SACC標(biāo)本中C-MYC陽(yáng)性表達(dá)43例，陽(yáng)性率為79.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。有神經(jīng)浸潤(rùn)、T4期C-MYC陽(yáng)性率較無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)、T1～3期高（P＜0.05），C-MYC的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤部位、組織學(xué)類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論原癌基因C-MYC在SACC中高表達(dá)，與T分期及神經(jīng)侵犯有關(guān)，有望成為SACC進(jìn)展及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志之一。

腺樣囊性癌 涎腺腫瘤 C-MYC基因 免疫組化

涎腺腺樣囊性癌（SACC）約占口腔、頜面部總惡性腫瘤的1%，占所有涎腺總惡性腫瘤的21.9%[1]，可以發(fā)生在任何涎腺，其中50%～60%發(fā)生在小涎腺。SACC生長(zhǎng)緩慢，易發(fā)生局部浸潤(rùn)、神經(jīng)浸潤(rùn)、原位復(fù)發(fā)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。C-MYC原癌基因位于8q24染色體，與N-MYC、L-MYC共同歸屬于MYC家族[2]。C-MYC蛋白是一種涉及細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、增殖以及凋亡的轉(zhuǎn)錄因子，并且參與調(diào)節(jié)人類15%的基因[3]。C-MYC原癌基因擴(kuò)增與腫瘤形成及轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切，目前已發(fā)現(xiàn)C-MYC在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)和（或）擴(kuò)增，如肝癌、乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌等[4-7]。有研究發(fā)現(xiàn)MYC基因僅在9%SACC樣本中擴(kuò)增[8]。本研究選取SACC的手術(shù)標(biāo)本54例，采用免疫組化法觀察組織中C-MYC的表達(dá)情況，從而研究C-MYC在SACC的表達(dá)水平和臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取浙江省腫瘤醫(yī)院2000-10—2009-05收治經(jīng)病理診斷確認(rèn)的SACC患者54例，男23例，女31例，年齡27～76歲，平均（49.0±0.5）歲，其中＜46歲26例，≥46歲28例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)（2010年）[9]，T1～3期23例，T4期31例，有神經(jīng)侵犯30例，無(wú)神經(jīng)侵犯24例。根據(jù)組織學(xué)類型分型，實(shí)性型18例，篩孔型24例，導(dǎo)管型12例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移8例（經(jīng)影像學(xué)及病理確診均為肺轉(zhuǎn)移），無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移46例。選取同期浙江省腫瘤醫(yī)院20例經(jīng)病理確認(rèn)的正常涎腺組織，男7例，女13例，年齡23～72歲，平均（51.0±0.3）歲。

1.2 方法 將標(biāo)本用甲醛固定、石蠟包埋、切片等一系列處理后進(jìn)行SP免疫組化染色，包括切片脫蠟，滴加封閉液，依次加一抗（兔抗人C-MYC多克隆抗體，1∶250）、二抗（生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG），進(jìn)行DNB顯色、蘇木素復(fù)染等。將切片置于400倍顯微鏡下觀察并拍照，每張切片隨即選取10個(gè)清晰、不重復(fù)的部位，進(jìn)行圖像分析，若細(xì)胞內(nèi)（細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)）出現(xiàn)棕黃色顆粒，則評(píng)定為陽(yáng)性細(xì)胞，總評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)考慮陽(yáng)性細(xì)胞百分比和顯色程度：分別將陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜5%、5%～24%、25%～49%、50%～74%、≥75%定為0、1、2、3、4分；按著色深淺分別將無(wú)著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色定為0、1、2、3分。將兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加后進(jìn)行綜合評(píng)分，0～2分、3～4分、5～6分、7分分別為陰性（-）、弱陽(yáng)性（+）、陽(yáng)性（++）、強(qiáng)陽(yáng)性（+++）[10]。為了簡(jiǎn)化統(tǒng)計(jì)，將陰性、弱陽(yáng)性均歸為陰性（-），將陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性均定為陽(yáng)性（+）。所有切片由2位以上病理科醫(yī)師復(fù)核。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。C-MYC的表達(dá)與年齡的關(guān)系采用Pearsonχ2檢驗(yàn)，C-MYC的表達(dá)與組織學(xué)類型的關(guān)系采用對(duì)數(shù)似然比法，C-MYC的表達(dá)與性別、腫瘤部位、T分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵犯以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用Fisher確切概率法。

2 結(jié)果

2.1 C-MYC在SACC中的表達(dá) C-MYC在20例正常涎腺組織中均呈陰性表達(dá)，在54例SACC組織中，陽(yáng)性表達(dá)43例，陽(yáng)性率79.6%（圖1），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 C-MYC表達(dá)與SACC生物學(xué)特征的關(guān)系 經(jīng)病理及影像學(xué)確診，8例遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者均為肺轉(zhuǎn)移。在30例有神經(jīng)浸潤(rùn)的患者中，陽(yáng)性表達(dá)30例；在24例無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)的患者中，陽(yáng)性表達(dá)13例；在T1～3期的23例SACC患者中，C-MYC陽(yáng)性表達(dá)14例，T4期的31例患者中，C-MYC陽(yáng)性表達(dá)29例。有神經(jīng)浸潤(rùn)、T4期CMYC陽(yáng)性率較無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)、T1～3高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），C-MYC的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤部位、組織學(xué)類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），詳見(jiàn)表1。

圖1 SACC中C-MYC免疫組織化學(xué)結(jié)果（A：導(dǎo)管型；B：篩孔型；C：實(shí)性型；SP染色，×400）

3 討論

C-MYC原癌基因激活方式主要包括基因擴(kuò)增和染色體易位重排，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。在關(guān)于前列腺癌的研究中，人們發(fā)現(xiàn)8號(hào)染色體的突變，包括8q24擴(kuò)增（涵蓋C-MYC癌基因），與前列腺癌進(jìn)展有關(guān)。Hawksworth等[7]檢測(cè)經(jīng)過(guò)顯微切割的前列腺癌細(xì)胞和配對(duì)的癌旁組織C-MYC mRNA水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌中C-MYC的高表達(dá)是具有生物學(xué)相關(guān)性的，所以C-MYC有望成為前列腺癌生物標(biāo)記物。研究還發(fā)現(xiàn)，C-MYC在胰腺癌[11]、神經(jīng)外胚瘤[12]中發(fā)現(xiàn)C-MYC高表達(dá)和（或）擴(kuò)增。Chen等[5]證明C-MYC蛋白是一種乳腺癌易感基因BRCA1的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)因子。像體內(nèi)很多蛋白一樣，C-MYC蛋白在調(diào)節(jié)蛋白的同時(shí)也受到其他蛋白的調(diào)節(jié)，如去泛素（DUBs）[13]。

C-MYC原癌基因具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力，這也是CMYC原癌基因發(fā)揮致癌作用的機(jī)制之一。Kaposi-Novak等[4]發(fā)現(xiàn)C-MYC原癌基因的活化與肝退變結(jié)節(jié)進(jìn)展為肝細(xì)胞癌有關(guān)。腺樣囊性癌（ACC）高級(jí)別轉(zhuǎn)化（以往稱為去分化）是指低級(jí)別ACC向高級(jí)別或未分化癌進(jìn)展轉(zhuǎn)變的一種現(xiàn)象[14]。有研究證明，C-MYC原癌基因與ACC高級(jí)別轉(zhuǎn)化有關(guān)[15]。Costa等[15]選取了5例高級(jí)別轉(zhuǎn)化ACC患者，采用比較基因組雜交的方法以確定高級(jí)別轉(zhuǎn)化腺樣囊性癌的表觀遺傳改變，發(fā)現(xiàn)染色體增多大部分出現(xiàn)在高級(jí)別轉(zhuǎn)化區(qū)域，而染色體缺失只出現(xiàn)在一般區(qū)域。有染色體增加的區(qū)域主要包括 8q24、17q11.2-q12、17q23和15q11-13；有染色體丟失的區(qū)域主要包括9q34、4p16、1p36.1和11q22；熒光原位雜交分析顯示C-MYC增加。該研究證明ACC高級(jí)別轉(zhuǎn)化過(guò)程進(jìn)程中C-MYC基因擴(kuò)增。

在54例SACC中，C-MYC原癌基因陽(yáng)性表達(dá)43例，陽(yáng)性率為79.6%，明顯高于正常涎腺組織。本次研究進(jìn)行的C-MYC的表達(dá)與54例SACC臨床病理因素分析表明，有神經(jīng)浸潤(rùn)、T4期C-MYC陽(yáng)性率較無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)、T1～3高（P＜0.05），C-MYC與T分期及神經(jīng)侵犯相關(guān)。涎腺惡性腫瘤的T分期主要依據(jù)腫瘤大小及有無(wú)腺體外侵犯，已有研究證明MYC基因擴(kuò)增與乳腺癌侵襲性相關(guān)[16]，另一項(xiàng)研究表明C-MYC原癌基因的表達(dá)與胰腺癌神經(jīng)侵犯有關(guān)[17]，因此在SACC中，C-MYC高表達(dá)有利于腫瘤浸潤(rùn)神經(jīng)，并且向高級(jí)別腫瘤進(jìn)展。同時(shí)本研究統(tǒng)計(jì)分析顯示C-MYC與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，考慮樣本量太少，尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。SACC較為經(jīng)典的生物標(biāo)記物包括p53和細(xì)胞周期蛋白D1[18]，C-MYC是否能成為SACC的新的生物標(biāo)記物尚需進(jìn)一步研究。

表1 C-MYC表達(dá)與54例SACC臨床病理因素的相關(guān)性[例（%）]

[1]Godge P,Sharma S,Yadav M.Adenoid cystic carcinoma of the parotid gland[J].Contemp Clin Dent,2012,3(2)：223-226.

[2]Pouryazdanparast P,Brenner A,Haghighat Z,et al.The role of 8q24 copy number gains and c-MYC expression in amelanotic cutaneous melanoma[J].Mod Pathol,2012,25(9)：1221-1226.

[3]Dang C V,O'Donnell K A,Zeller K I,et al.The c-Myc target gene network[J].Semin Cancer Biol,2006,16(4)：253-264.

[4]Kaposi-Novak P,Libbrecht L,Woo H G,et al.Central role of c-Myc during malignant conversion in human hepatocarcinogenesis[J].Cancer Res,2009,69(7)：2775-2782.

[5]Chen Y,Xu J,Borowicz S,et al.c-Myc activates BRCA1 gene expression through distal promoter elements in breast cancer cells[J].BMC Cancer,2011,11：246-259.

[6]Rughooputh S,Manraj S,Eddoo R,et al.Expression of the c-myc oncogene and the presence of HPV 18：possible surrogate markers for cervical cancer[J].Br J Biomed Sci,2009,66(2)：74-78.

[7]Hawksworth D,Ravindranath L,Chen Y,et al.Overexpression of C-MYC oncogene in prostate cancer predicts biochemical recurrence[J].Prostate Cancer Prostatic Dis,2010,13(4)：311-315.

[8]Sequeiros-Santiago G,Garcia-Carracedo D,Fresno M F,et al. Oncogene amplification pattern in adenoid cystic carcinoma of the salivary glands[J].Oncol Rep,2009,21(5)：1215-1222.

[9]Sobin L H,Gospodarowicz M K,Wittekind C.International Union Against Cancer(UICC)：TNM Classification of Malignant Tumours [M].7th.New York：Wiley-Liss,2010：117-126.

[10] 葛明華,凌志強(qiáng),譚卓,等.表皮生長(zhǎng)因子受體在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及其在腫瘤侵襲中的作用[J].中華腫瘤雜志,2012,34(4)：278-280.

[11]Thakur A,Bollig A,Wu J,et al.Gene expression profiles in primary pancreatic tumors and metastatic lesions of Ela-c-myc transgenic mice[J].Mol Cancer,2008,7：11-27.

[12]Momota H,Shih A H,Edgar M A,et al.c-Myc and beta-catenin cooperate with loss of p53 to generate multiple members of the primitive neuroectodermal tumor family in mice[J].Oncogene, 2008,27(32)：4392-4401.

[13]Sacco J J,Coulson J M,Clague M J,et al.Emerging roles of deubiquitinases in cancer-associated pathways[J].IUBMB Life, 2010,62(2)：140-157.

[14]Costa A F,Altemani A,Hermsen M.Current concepts on dedifferentiation/high-grade transformation in salivary gland tumors [J].Patholog Res Int,2011,2011：325965.

[15]Seethala R R,Cieply K,Barnes E L,et al.Progressive genetic alterations of adenoid cystic carcinoma with high-grade transformation[J].Arch Pathol Lab Med,2011,135(1)：123-130.

[16]Singhi A D,Cimino-Mathews A,Jenkins R B,et al.MYC gene amplification is often acquired in lethal distant breast cancer metastases of unamplified primary tumors[J].Mod Pathol,2012, 25(3)：378-387.

[17]He C,Jiang H,Geng S,et al.Expression of c-Myc and Fas correlates with perineural invasion of pancreatic cancer[J].Int J Clin Exp Pathol,2012,5(4)：339-346.

[18]Wegner A,Wasniewska E,Jarmolowska-Jurczyszyn D,et al. The role of immunohistochemical staining(protein p53,cyclin D1)in the prognosis of adenoid cystic carcinoma salivary gland tumors[J].Otolaryngol Pol,2007,61(4)：423-427.

Expression of C-MYC in salivary adenoid cystic carcinoma and its clinicopathological significance

Objective To investigate the expression of C-MYC in salivary adenoid cystic carcinoma(SACC)and clinicopathological significance.MethodsImmunohistochemisty was used to determine tissue expression of C-MYC in 54 patients with salivary adenoid cystic carcinoma from Zhejiang Provincial Cancer Hospital and 20 samples of normal gland tissue.The clinicopathological significance of C-MYC expression was analyzed.ResultsC-MYC was positively expressed in 43 of 54 SACC tissues and none of 20 normal salivary gland tissues with the positive rate was 79.6%and 0.0%,respectively(P＜0.05).Furthermore,C-MYC expression was higher in stage T4and perineural invasion patients than those with state T1～3 and no perineural invasion patients(P＜0.05).C-MYC expression was not correlated with age,gender,tumor location,lymph node metastasis,distant metastasis and histological type(P＞0.05).ConclusionThe expression of proto-oncogene C-MYC was correlated with T staging and perineural invasion in SACC,incicating that it may be uses as a biological marker for SACC progress and prognosis.

Carcinoma Adenoid cystic salivary gland neoplasms C-MYC Immunohistochemistry

2013-10-15）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺(tái)重點(diǎn)資助計(jì)劃（2012ZDA005）；浙江省衛(wèi)生高層次創(chuàng)新人才培養(yǎng)工程基金資助[浙衛(wèi)發(fā)2008（134）]

325035 溫州醫(yī)科大學(xué)（胡思思、葛明華、陸曉筱）；浙江省腫瘤醫(yī)院、浙江省腫瘤研究所（凌志強(qiáng)），頭頸腫瘤外科（鄭傳銘、陳超、譚卓）

葛明華，E-mail:gemingh@163.com