李 麗， 羅澤萍， 周煥第， 楊秀芬

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室， 廣西 南寧 530001）

瑤藥地菍不同提取部位的降血糖活性研究

李 麗， 羅澤萍， 周煥第， 楊秀芬*

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室， 廣西 南寧 530001）

目的 觀察瑤藥地菍不同提取部位的降血糖活性。 方法 地菍用 95%乙醇提取， 再依次用石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇萃取制備不同提取部位，分別采用四氧嘧啶、鏈脲佐菌素致小鼠糖尿病模型、腎上腺素及高濃度葡萄糖致小鼠高血糖模型，觀察地菍的降血糖活性。結(jié)果 地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述模型小鼠的空腹血糖。結(jié)論 瑤藥地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位為其主要降糖活性部位，尤以乙酸乙酯部位療效較佳。

地菍；活性部位；降血糖

地菍是廣西瑤族民間藥材，為野牡丹科植物地菍Melastoma dodecandrum Lour.的 干 燥 全 草， 在 瑤 語 中 被 稱為 “ 莫翁樣” ， 主 要 治療 “ 消 渴 ” 、 “ 虛 勞 ” 等 病證［1-2］。地菍中所含的主要成分有黃酮類、 多糖類、 酚類等［3］。 本課題組首次對地菍開展了一系列抗糖尿病藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)地菍的水提取物可降低高血糖模型小鼠的血糖［4-5］， 具有降血脂作用［6］； 地菍的乙醇提取物可顯著提高正常小鼠的葡萄糖耐量， 但對其空腹血糖無影響［7］。 為探尋地菍降血糖作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)采用系統(tǒng)溶劑法分離地菍的不同提取部位，觀察各部位對多種高血糖動物模型的降血糖作用，篩選其降血糖有效部位，為進(jìn)一步研究與開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康昆明種小白鼠， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 雌雄各半，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SYXK桂 2010-0001。

1.2 藥物與試劑 地菍購自廣西南寧市小瑤王藥店， 經(jīng)本校中藥鑒定教研室田輝教授鑒定為野牡丹科植物地菍Melastoma dodecandrum Lour.的 干 燥 全 草。 取 地 菍 藥 材 適量， 切碎， 加 95%乙醇浸泡過夜， 加熱回流提取 3 次， 每次1 h， 過濾， 合并濾液， 減壓濃縮得總浸膏。 總浸膏與硅膠 （1 ∶2） 拌樣， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇加熱回流萃取，分別濃縮成浸膏，得石油醚部位 （得膏率約0.53%）、 乙酸乙酯部位 （得膏率 1.51%） 和正丁醇部位（得膏率 3.64%）， 備用。 鹽酸二甲雙胍片， 北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn)， 批號 20100414。 四氧嘧啶 （ Alloxan）， 美國 Sigma公司產(chǎn)品， 批號 BCBB7829。 鏈脲佐菌素 （ Streptozotocin， STZ） ， 美國 Sigma公司產(chǎn)品， 批號 031M1287V。 鹽酸腎上腺素注射液，天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號 1009221； 口服葡萄糖， 廣西梧州制藥 （集團(tuán)） 股份有限公司生產(chǎn)， 批號 111005。 葡萄糖氧化酶法測定試劑盒，四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)， 批號 1203021。

1.3 主要儀器 TU-1901 雙光束紫外可見光分光光 度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）； 臺式離心機(jī) （16K，珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司）； 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠）。

2 方法

2.1 對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響 小鼠禁食不禁水24 h 后， 尾靜脈注射新鮮配制的四氧嘧啶溶液（60 mg/kg）， 72 h 后對小鼠 （禁食不禁水 8 h） 眼眶后靜脈叢采血，分離血清，按試劑盒說明測血糖值，以空腹血糖≥11.0 mmol/L的 小 鼠 作 為糖尿病模型小鼠， 納 入 實(shí)驗(yàn)。 糖尿病小鼠隨機(jī)分為 8 組， 每組 12 只， 另取 12 只正常小鼠作為正常對照組，按設(shè)計劑量 （地菍各提取部位以生藥量計）灌胃給藥，正常對照組和模型對照組給予等容量生理鹽水 （20mL/kg）， 每日灌胃 1 次， 連續(xù)10 d。末次給藥后 1 h （禁食不禁水 8 h）， 小鼠眼眶后靜脈叢取血，按試劑盒說明測定血糖值。

2.2 對鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影響 小鼠腹腔注射新鮮配制的鏈脲佐菌素溶液 （150 mg/kg）， 72 h 后對小鼠 （禁食不禁水 8 h） 眼眶后靜脈叢采血， 分離血清， 按試劑盒說明測血糖值， 以空腹血糖≥8.0 mmol/L的小鼠作為糖尿病模型小鼠，納入實(shí)驗(yàn)。動物分組、給藥及檢測方法同 “2.1” 項(xiàng)。

2.3 對鹽酸腎上腺素致小鼠高血糖的影響 合格小鼠隨機(jī)分成 9 組， 每組 10 只。 按設(shè)計劑量 （地菍各提取部位以生藥量計）灌胃給藥，正常對照組和模型對照組給予等容量生理鹽水 （20mL/kg）， 每日灌胃 1 次， 連續(xù)10 d。 末次給藥后1 h （禁食不禁水 8 h）， 除正常對照組給予等容量生理鹽水外， 其余各組均腹腔注射鹽酸腎上腺素注射液 （0.5 mg/kg） 復(fù)制小鼠急性高血糖模型， 分別于注射腎上腺素前 （0 h 血糖） 和注射腎上腺素 0.5 h 后取血測定血糖值。

2.4 對高濃度葡萄糖致小鼠高血糖的影響 小鼠分組與給藥方法同 “2.3” 項(xiàng)。 末次給藥后 1 h （禁食不禁水 8 h），除正常對照組給予等容量生理鹽水外，其余各組均灌胃葡萄糖溶液 （2.5 g/kg） 復(fù)制小鼠高血糖模型， 分別于灌糖前 （即 0 h 血糖）， 灌糖后 0.5 h、 1 h 和 2 h， 取血測定血糖值。

3 結(jié)果

3.1 對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響 結(jié)果如表 1 所示，與正常對照組比較，四氧嘧啶造模后，各組小鼠血糖值明顯升高 （P＜0.01） 。 給藥 10 d 后， 與 模 型 對 照 組 比較， 地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異 （P＞0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位給藥組小鼠血糖值顯著降低 （P＜0.05 或 P＜0.01） ， 且給予乙酸乙酯部位的小鼠生長狀況好于正丁醇部位給藥組小鼠。

表1 地菍不同提取部位對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響 （）

表1 地菍不同提取部位對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響 （）

注： 與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01； 與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01 （下同）

給藥前 給藥后E組別 劑量/（g·kg-1）給藥后動物數(shù)/只血糖值/（mmol·L-1）正常對照組- 12 5.54 ±0.79 4.75 ±0.77模型對照組 - 10 16.67 ±3.84△△ 16.27 ±1.79△△鹽酸二甲雙胍組 0.75 12 16.78 ±3.20△△ 12.37 ±1.66**石油醚部位組 60 12 16.64 ±4.35△△ 15.27 ±4.29 40 11 16.84 ±5.64△△ 15.85 ±3.28乙酸乙酯部位組 60 11 16.68 ±2.92△△ 13.34 ±3.03**40 12 16.77 ±4.19△△ 13.38 ±2.95*正丁醇部位組 60 11 16.57 ±4.52△△ 13.46 ±3.93*40 11 16.78 ±4.09△△ 13.41 ±3.46*

3.2 對鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影響 結(jié)果如表 2所示，與正常對照組比較，鏈脲佐菌素造模后，各組小鼠血糖值顯著升高 （P＜0.01）。 給藥 10 d 后， 與模型對照組比較，地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異（P＞0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位給藥組小鼠血糖值降低非常顯著 （P＜0.01）。

表2 地菍不同提取部位對鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影響 （）

表2 地菍不同提取部位對鏈脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影響 （）

血糖值 /（mmol·L-1）給藥前 給藥后正常對照組組別 劑量/（g·kg-1）給藥后動物數(shù)/只- 12 5.98 ±0.56 4.42 ±1.88模型對照組 - 11 11.92 ±3.54△△ 17.57 ±7.71△△格列苯脲組 0.4 11 11.98 ±3.10△△ 8.49 ±6.82**石油醚部位組 60 10 11.96 ±3.25△△ 16.52 ±7.20 40 10 12.04 ±4.01△△ 16.79 ±8.01乙酸乙酯部位組 60 12 12.01 ±3.92△△ 10.09 ±5.91**40 11 11.97 ±3.15△△ 8.18 ±5.71**正丁醇部位組 60 11 11.89 ±3.02△△ 8.33 ±6.69**40 10 11.98 ±3.19△△ 8.62 ±5.94**

3.3 對鹽酸腎上腺素致小鼠高血糖的影響 結(jié)果如表 3 所示， 與正常對照組比較， 腹腔注射鹽酸腎上腺素 0.5 h 后各組小鼠血糖顯著升高 （P＜0.01）。 與模型對照組比較，地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異 （P＞ 0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位則顯著抑制鹽酸腎上腺素引起的小鼠急性血糖升高 （P＜0.05 或 P＜0.01）。

表3 地菍不同提取部位對鹽酸腎上腺素致小鼠高血糖的影響 （， n=10）

表3 地菍不同提取部位對鹽酸腎上腺素致小鼠高血糖的影響 （， n=10）

0 h 0.5 h正常對照組組別 劑量/（g·kg-1）血糖值 /（mmol·L-1）- 3.54 ±1.19 3.48 ±0.94模型對照組 - 3.92 ±3.43 11.27 ±2.84△△鹽酸二甲雙胍組 0.75 4.64 ±3.15 8.66 ±2.49△△*石油醚部位組 60 3.31 ±4.02 10.10 ±2.66△△40 3.31 ±0.87 10.33 ±2.31△△乙酸乙酯部位組 60 3.82 ±3.12 8.58 ±2.42△△*40 2.86 ±3.00 7.48 ±2.13△**正丁醇部位組 60 3.65 ±2.51 8.81 ±2.70△△*40 2.59 ±1.06 8.17 ±2.52△△*

3.4 對高濃度葡萄糖致小鼠高血糖的影響 結(jié)果如表 4 所示，與正常對照組比較，模型組小鼠灌胃給予葡萄糖后血糖逐漸升高， 到 0.5 h 達(dá)到最高峰 （P＜0.01）。 與模型對照組比較， 灌胃給予葡萄糖后 0.5 h， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位高劑量有顯著的降糖作用 （P＜0.05）。 1h 后，地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位的降糖作用顯著 （P＜0.05 或 P＜0.01）。 2 h 后， 地菍乙酸乙酯部位仍有顯著的降糖作用 （P＜0.05）。 地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值與模型組無顯著差異 （P＞0.05）。

表4 地菍不同提取部位對高濃度葡萄糖致小鼠高血糖的影響 （， n=10）

表4 地菍不同提取部位對高濃度葡萄糖致小鼠高血糖的影響 （， n=10）

血糖值 /（mmol·L-1）0 h 0.5 h 1 h 2 h正常對照組組別 劑量/（g·kg-1）2.89 ±1.01 2.67 ±0.94 2.74 ±0.85 2.94 ±1.14模型對照組 2.76 ±5.92 16.10 ±3.26△△ 15.88 ±2.35△△ 13.67 ±2.51△△鹽酸二甲雙胍組 0.75 2.80 ±5.68 12.87 ±3.31△△** 12.11 ±2.47△△** 11.02 ±2.88△△*石油醚部位組 60 2.58 ±6.65 14.80 ±3.11△△ 13.33 ±1.48△△ 12.01 ±2.82△△40 2.80 ±6.65 14.90 ±3.48△△ 13.07 ±2.63△△ 12.48 ±2.20△△乙酸乙酯部位組 60 2.63 ±6.08 13.93 ±2.57△△* 12.19 ±3.95△△* 11.29 ±1.66△△*40 2.75 ±6.15 14.01 ±3.12△△* 12.37 ±3.32△△* 11.59 ±1.88△△*正丁醇部位組 60 2.86 ±6.12 14.21 ±2.60△△* 10.69 ±3.36△△** 11.71 ±3.09△△40 2.74 ±6.45 14.84 ±2.50△△ 12.50 ±3.51△△* 12.34 ±3.58 -△△

4 討論

四氧嘧啶和鏈脲佐菌素是胰島β細(xì)胞毒劑，常作為建立糖尿病動物模型的造模用藥，兩者可選擇性地使多種動物的胰島細(xì)胞很快呈現(xiàn)不可逆的損壞或壞死，影響胰島素的分泌， 最終導(dǎo)致血糖過高和糖尿病的發(fā)生［8］。 腎上腺素具有α和β受體激動作用，能促進(jìn)肝臟及肌肉糖原分解，肌肉中糖酵解生成的乳酸增多，經(jīng)三羧酸循環(huán)糖異生增快，從而使血糖升高， 造成急性高血糖［9］。 為深入研究地菍降血糖活性組份，本實(shí)驗(yàn)以不同極性溶劑依次對地菍乙醇提取物進(jìn)行萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。分別建立四氧嘧啶、鏈脲佐菌素致小鼠糖尿病模型，腎上腺素、高濃度葡萄糖致小鼠急性高血糖模型，對地菍各提取部位進(jìn)行降血糖活性篩選。研究結(jié)果表明，瑤藥地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述糖尿病或高血糖模型小鼠的血糖，顯示出較強(qiáng)的降糖活性，且乙酸乙酯部位給藥組小鼠生長狀況尤為良好，而石油醚部位對血糖無顯著影響。提示乙酸乙酯部位和正丁醇部位為其主要降糖活性部位，尤以乙酸乙酯部位療效較佳，可能與地菍的降血糖藥效物質(zhì)基礎(chǔ)有關(guān)，值得深入地研究。

［ 1 ］ 國家中醫(yī)藥管理局 《中華本草》 編委會.中華本草［M］.上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1999： 628-629.

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［6］ 李 麗，羅澤萍，周煥第，等.地菍提取物降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究［ J］ .時珍國醫(yī)國藥， 2012， 23（11） ： 2783-2784.

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1065-04

066,ebook=187

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.042

2013-06-14

廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 （2013GXNSFAA019134）； 廣西高等學(xué)?？蒲许?xiàng)目 （201203YB107）

李 麗 （1973—） ， 女， 碩士， 副教授， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 中草藥藥效及生化藥理。 Tel： （ 0771 ） 2279423， E-mail：lilygxnn@163.com

*通信作者： 楊秀芬 （1969—）， 男， 博士， 教授， 碩士生導(dǎo)師， 研究方向： 內(nèi)分泌、 代謝藥理及心血管藥理。 Tel： （0771） 2279423，E-mail： xiufenyang@163.com