郝秀華，姬海婷，楊孝來，陳玉玲，劉昕※

(1．吉林大學(xué)藥學(xué)院，長春130021；2．甘肅省人民醫(yī)院藥劑科，蘭州730000)

人參皂苷Rd(Ginsenoside Rd)是從人參和三七中提取出來的三萜皂苷類單體，是二者的主要活性成分之一[1]，對心腦血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等具有獨特的保護作用[2]。但由于其在水中溶解度小、生物利用度低，一定程度上影響了人參皂苷Rd在臨床上的應(yīng)用[3]。羥丙基-β-環(huán)糊精是水溶性環(huán)糊精衍生物，具有水溶性好、安全無毒等優(yōu)點[4]，本實驗將人參皂苷Rd與羥丙基-β-環(huán)糊精包合可提高藥物在水中溶解度，對人參皂苷Rd新劑型的研制和臨床上應(yīng)用具有重要參考價值。

1 儀器與材料

人參皂苷Rd(廣東泰禾醫(yī)藥科技公司)，羥丙基-β-環(huán)糊精(山東新大精細化工有限公司)，乙腈、甲醇(色譜純，江蘇漢邦科技有限公司)，其余試劑為分析純。

LC-20AT高效液相色譜儀、SPD-20A型紫外檢測器(日本島津公司)，BT125D電子天平(德國賽得利斯公司)，DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)，R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)，Christ ALPHA 1-4 LSC冷凍干燥機(北京格瑞德曼儀器設(shè)備有限公司)，VERTEX 80v傅里葉變換紅外光譜儀(德國布魯克公司)，DSC-60型差示分析儀(日本Shimadzu公司)，倒置相差顯微鏡(CK2型，日本Olympus公司)。

2 實驗方法

2.1人參皂苷Rd含量測定

2.1.1色譜條件色譜柱：Agilent TC C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈-水(V∶V=40∶60)；流速：0.8mL/min；進樣量：10μL；柱溫：30℃；檢測波長：203nm。

2.1.2標準曲線的繪制精密稱取人參皂苷Rd 14.5mg，置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，配制成濃度為580μg/mL的溶液，作為儲備液備用。精密移取上述儲備液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，置于25mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，依次進樣10μL，重復(fù)進樣3次，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程A=3856.9C+5397.9，r=0.9999，說明人參皂苷Rd在4.64μg/mL～92.8μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3精密度試驗精密移取儲備液適量，甲醇稀釋成濃度為46.4μg/mL的溶液，連續(xù)進樣6次，得日內(nèi)精密度，RSD為0.48%；連續(xù)測定6d，得日間精密度，RSD為0.93%，說明該方法精密度良好。

2.1.4包合物中人參皂苷Rd的含量測定精密稱取包合物16.0mg，置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，搖勻，進樣10μL，重復(fù)進樣3次，代入標準曲線，計算得出包合物中人參皂苷Rd的含量。

2.1.5人參皂苷Rd包合前后溶解度的測定取過量的人參皂苷Rd原料藥和包合物，加蒸餾水，分別配成25℃和37℃下的過飽和溶液，恒溫攪拌2h，取上清液過濾，濾液用甲醇稀釋適當倍數(shù)后進樣10μL，記錄峰面積，代入標準曲線求出溶解度。

2.2包合物的制備

取2.0g羥丙基-β-環(huán)糊精，置于三頸瓶中，加入10mL水溶解，60℃水浴，通入N2保護，按照摩爾比為1∶1稱取人參皂苷Rd，用無水乙醇溶解，不斷攪拌的條件下逐滴滴入到羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液中，反應(yīng)5h，冷卻至室溫繼續(xù)攪拌3h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸去溶劑，過濾，用蒸餾水洗滌濾餅，所得濾液冷凍干燥得白色粉末，即為人參皂苷Rd-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物。

2.3包合物的表征方法

2.3.1差示掃描量熱法(DSC)[5]測試條件：分別取人參皂苷Rd、羥丙基-β-環(huán)糊精、人參皂苷Rd與羥丙基-β-環(huán)糊精的物理混合物(以下簡稱物理混合物)以及包合物1mg～3mg，N2保護，鋁質(zhì)坩堝，溫度范圍30℃～300℃，升溫速率為10℃/min。

2.3.2紅外光譜法(FIR)[6]測試條件：分別取人參皂苷Rd、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物以及包合物適量，與KBr壓片，相同條件下進行紅外檢測，掃描范圍為4000cm-1～500cm-1。

2.3.3顯微鏡法[7]測試條件：分別取人參皂苷Rd、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物以及包合物適量，均勻分散在載玻片上，置于顯微鏡下觀察。

3 結(jié)果與討論

3.1包合物中人參皂苷Rd的含量

包合物中人參皂苷Rd的含量=測得的人參皂苷Rd的量/包合物質(zhì)量×100%，根據(jù)測定結(jié)果計算得到包合物中人參皂苷Rd的含量為7.53%。

3.2人參皂苷Rd包合前后的溶解度

按照“2.1.5”項下方法測定人參皂苷Rd在25℃的溶解度為0.165mg/mL，37℃的溶解度為0.292mg/mL，而包合物25℃的溶解度為4.01mg/mL，增大了24.3倍，37℃的溶解度為63.97mg/mL，增大了219倍，增溶效果較好。

3.3包合物的表征結(jié)果分析

3.3.1差示掃描量熱法圖1的4條曲線依次為人參皂苷Rd-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物和人參皂苷Rd的DSC譜圖。在物理混合物的譜圖(圖1c)中，人參皂苷Rd在250℃左右的放熱峰依然存在，而在包合物的譜圖(圖1a)中該放熱峰已經(jīng)消失，這是因為人參皂苷Rd已經(jīng)嵌入羥丙基-β-環(huán)糊精的疏水空腔中，主藥峰被掩蓋，說明包合物已經(jīng)形成。

3.3.2紅外光譜法圖2的4條曲線依次為羥丙基-β-環(huán)糊精、包合物、人參皂苷Rd和物理混合物的紅外譜圖。在人參皂苷Rd的紅外譜圖(圖2c)中，3404cm-1附近為-OH的伸縮振動峰，2943.2cm-1附近和2896.7cm-1附近分別為-CH3和-CH2的伸縮振動峰，1198cm-1附近為C-O的伸縮振動峰；在物理混合物的紅外譜圖(圖2d)中，-CH2的伸縮振動峰仍然存在，而在包合物的紅外譜圖中，該峰已經(jīng)消失；物理混合物的紅外譜圖可以看成是羥丙基-β-環(huán)糊精和人參皂苷Rd紅外譜圖的疊加，而包合物的紅外譜圖和羥丙基-β-環(huán)糊精的紅外譜圖非常接近，說明包合物已經(jīng)形成。

3.3.3顯微鏡法包合物的形成使得晶格排列發(fā)生變化，可通過顯微鏡觀察其形態(tài)的變化[8]。圖3為人參皂苷Rd、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物、包合物在顯微鏡下觀察到的形貌特征。從圖中可以看出，羥丙基-β-環(huán)糊精為球形結(jié)構(gòu)，物理混合物呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，是人參皂苷Rd和羥丙基-β-環(huán)糊精吸附在一起的結(jié)果，而人參皂苷Rd-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物呈現(xiàn)不同于以上3種物質(zhì)的形態(tài)特征，說明形成了新的物相，包合物已經(jīng)形成。

圖3人參皂苷Rd、羥丙基-β-環(huán)糊精、物理混合物、包合物的顯微鏡特征

Fig.3MicroscopiccharacteristicsofHP-β-CD,ginsenosideRd,physicalmixtureandinclusioncomplex

4 結(jié)論

(1)采用溶劑-攪拌法[9]制備人參皂苷Rd-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，由于人參皂苷Rd水溶性差，選用無水乙醇作為溶媒將其溶解，再與羥丙基-β-環(huán)糊精包合。對得到的包合物溶液進行冷凍干燥，與真空干燥相比，冷凍干燥得到的包合物外觀疏松，包合物得率高，且水溶性更好[10]。采用DSC、FIR和顯微鏡法對包合物進行表征，結(jié)果均表明包合物已經(jīng)形成。

(2)人參皂苷Rd在水中溶解度小，與羥丙基-β-環(huán)糊精包合后，25℃溶解度從原來的0.165mg/mL增大到4.01mg/mL，增加了24.3倍，37℃溶解度從原來的0.292mg/mL增大到63.97mg/mL，增加了219倍，大大增加了人參皂苷Rd在水中的溶解度，有利于人參皂苷Rd制成口服和注射等劑型，對其在臨床上的應(yīng)用具有重要意義。

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