樊紅波，王玉，劉昕，孫士淋，張廣遠(yuǎn)，管清香

(吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春130021)

葛根為臨床常用中藥，具有解肌退熱、升陽(yáng)透疹、生津止瀉的功效，葛根黃酮為其主要有效成分，臨床上主要用于治療心血管疾病[1]，但其難溶于水，口服吸收程度較差，生物利用度小，體內(nèi)消除快且不易蓄積[2]。因此，提高葛根黃酮溶解度及生物利用度成為其制劑研究中的主要問(wèn)題。研究表明，自微乳化給藥系統(tǒng)(Self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)可提高水難溶性藥物生物利用度[3]，但自乳化制劑都是液體形式，通常是封裝在軟膠囊或硬膠囊中，易造成囊壁軟化。本試驗(yàn)將自微乳技術(shù)與固體分散技術(shù)結(jié)合，制備葛根黃酮自微乳化滴丸，擬在提高葛根黃酮的口服生物利用度的同時(shí)，避免自微乳制成膠囊時(shí)囊壁軟化導(dǎo)致的藥物漏泄[4]，簡(jiǎn)化其制備工藝，提高生產(chǎn)率，降低成本，有利于勞動(dòng)保護(hù)[5]。

1 儀器與試藥

AB204-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；THZ-82水浴恒溫振蕩器(金壇市精達(dá)儀器制造廠)；DW-1型滴丸機(jī)(江蘇泰州市制藥機(jī)械二廠)；RCZ-8A智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠)。

Crodamol GTCC(Croda公司)，Maisine 35-1(法國(guó)Gattefosse公司)，Cremophor RH 40(德國(guó)BASF公司)，葛根黃酮(純度66.7%，西安賽邦醫(yī)藥科技有限公司)，葛根素標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)，甲基硅油、液體石蠟均為化學(xué)純，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取葛根素儲(chǔ)備液適量，用蒸餾水稀釋適當(dāng)倍數(shù)配制成濃度分別為2.036μg/mL、4.072μg/mL、6.108μg/mL、8.144μg/mL、10.180μg/mL、12.220μg/mL的系列葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別在250nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，用吸光度(Y)對(duì)濃度(X)作線性回歸，得回歸方程為：Y=0.0672X+0.004 76(R2=0.9998)。

2.2葛根黃酮自微乳的制備

取處方量Crodamol GTCC、Maisine 35-1﹑Cremophor RH 40和1，2-丙二醇，混勻，加入處方量葛根黃酮，超聲溶解，攪拌均勻，得葛根黃酮自微乳。

2.3葛根黃酮自微乳化滴丸的制備

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定SMEDDS與滴丸基質(zhì)比例、溫度和滴距對(duì)自乳化滴丸有較大的影響，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，采用L9(34)正交法優(yōu)選滴丸制備工藝，因素水平見(jiàn)表1。以滴丸硬度、圓整度、丸重差異為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示。

表1L9(34)實(shí)驗(yàn)因素水平表

Table 1Factors and levels of L9(34) orthogonal test

表2L9(34)應(yīng)變量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

Table 2Evaluation criterion of depend variables for L9(34) orthogonal test

2.4體外釋放度研究

對(duì)比葛根黃酮自微乳化滴丸與市售愈風(fēng)寧心滴丸體外釋放行為。取2種滴丸各6粒，以(37±0.5)℃脫氣蒸餾水900mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75r/min，分別于2min、5min、10min、20min、40min、60min取樣5mL，補(bǔ)充同體積同溫度的蒸餾水，樣品經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后，稀釋后測(cè)定含量。

3 結(jié)果與討論

3.1精密度實(shí)驗(yàn)

取葛根素儲(chǔ)備液適量，用蒸餾水稀釋配制低濃度(2.036μg/mL)、中濃度(6.108μg/mL)、高濃度(12.220μg/mL)葛根素溶液，測(cè)定日內(nèi)及日間精密度。結(jié)果表明，本方法精密度的RSD均小于2%，該方法精密度良好。

3.2回收率實(shí)驗(yàn)

按處方稱取一定比例的空白輔料，分別加入不同體積葛根素儲(chǔ)備液，配制低濃度(2.036μg/mL)、中濃度(6.108μg/mL)、高濃度(12.220μg/mL)樣品溶液，0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液測(cè)定吸收度。結(jié)果表明，平均回收率大于95%，RSD小于2%，該方法回收率良好。

3.3葛根黃酮自微乳化滴丸工藝優(yōu)選

預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，冷凝劑溫度小于2℃時(shí)，滴丸不圓整、丸重差異大；冷凝劑溫度大于10℃時(shí)，滴丸形狀變扁、丸重差異大。本試驗(yàn)分別用甲基硅油和液體石蠟作冷凝劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲基硅油做冷凝基質(zhì)得到的滴丸丸形圓整度、硬度、表面光滑度等均較液體石蠟好。在混合自微乳與滴丸基質(zhì)時(shí)發(fā)現(xiàn)，自微乳比例較高時(shí)，滴丸硬度差，容易黏連；基質(zhì)比例高，硬度好，圓整度好，但載藥量小，服用量大，且成本高?？紤]到載藥量，確定自微乳與滴丸基質(zhì)的質(zhì)量混合范圍在1∶3.5～1∶4.5、固定滴速50滴/min、冷凝劑溫度2℃～10℃制備滴丸。

由極差分析結(jié)果，影響滴丸成型工藝的因素依次排列為B>C>A，其中A因素的水平1、水平2與水平3之間相差不大。為提高載藥量，A因素選擇A1；B因素水平2明顯優(yōu)于水平1和水平3，確定采用B2；C因素水平2明顯優(yōu)于水平1和水平3，確定采用C2。故確定各因素采用A1B2C2，即SMEDDS與基質(zhì)比例為1∶3.5、物料溫度80℃、滴距為10cm(表3)。

表3L9(34)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果

Table 3L9(34) Experiment s and results

3.4葛根黃酮自微乳化滴丸體外釋放度

制成自微乳的藥物滴丸釋放速率明顯高于僅制成滴丸的藥物，自微乳化滴丸10min的溶出度可達(dá)105.10%，而愈風(fēng)寧心滴丸10min的釋放度僅達(dá)到82.03%(圖1)。自微乳滴丸釋放速率明顯高于僅制成滴丸的藥物，可能是因自微乳加入溶液形成載藥小乳滴，增加了藥物表面積和溶解度，提高了溶出度。

由此可見(jiàn)，自微乳技術(shù)與固體分散體技術(shù)結(jié)合可更好地提高葛根黃酮的體外溶出速率和葛根黃酮口服生物利用度。葛根黃酮自微乳化滴丸大鼠體內(nèi)研究將另文報(bào)道。

[1]陳江林,江麗霞,曾靖.葛根異黃酮對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠血液生化指標(biāo)及抗氧化的影響[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2014,21(1):6-8.

[2]徐軼爾,李秋紅,楊菲菲,等.中藥葛根的藥理藥效研究[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(11):993-994.

[3]Larsen AT,Ohlsson AG,Polentarutti B,et al.Oral bioavailability of cinnarizine in dogs：Relation to SNEDDS droplet size，drug solubility and in vitro precipitation[J].European Journal of Pharmaceutical Sciences,2013,48:335-339.

[4]Mei XH,Etzler FM,Wang ZR,et al.Use of texture analyzer to study hydrophilic solvent effects on the mechanical properties of hard gelatin capsules[J].International Journal of Pharmaceutics,2006,324:128-135.

[5]周雅琴,陳燕軍,馮青然.中藥滴丸劑的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2006,31(2):101-105.