王茸 王麗萍

計(jì)算機(jī)技術(shù)的不斷發(fā)展和廣泛應(yīng)用，提高了血培養(yǎng)水平的陽性率和檢出效率。BACTEC9050全自動血培養(yǎng)儀具有培養(yǎng)和監(jiān)測的雙重性，排除了人為的干預(yù)，還減少了污染的機(jī)會，隨時可以發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果，為菌血癥、敗血癥患者的診斷和治療提供了可靠的科學(xué)依據(jù)[1]，有利于快速檢出血中病原菌[2]。

1 材料與方法

1.1 一般資料 865份標(biāo)本均為靜脈血5～10ml，均為無菌采集于2010年1月-2012年12月來解放軍第四六三醫(yī)院就診的患者，所有標(biāo)本均注入BACTEC9050相應(yīng)配套需氧及厭氧瓶后送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2 儀器與試劑 使用的儀器為BACTEC9050和珠海迪爾生物有限公司生產(chǎn)的微生物鑒定系統(tǒng)，使用的試劑為標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922、ATCC25923 、ATCC27853、ATCC29212、ATCC90028。

1.3 方法

1.3.1 培養(yǎng)監(jiān)測方法 細(xì)菌培養(yǎng)監(jiān)測嚴(yán)格遵照BACTEC9050的操作程序進(jìn)行。

1.3.2 陽性陰性鑒定方法 細(xì)菌鑒定按照傳統(tǒng)的操作規(guī)程實(shí)施，對一些細(xì)菌可以采用手工方法。陽性的標(biāo)本從儀器中取出后立即轉(zhuǎn)種血瓊脂和巧克力瓊脂平板，在35.0℃的條件下培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜，并革蘭染色涂片鏡檢，分離出細(xì)菌立即鑒定。當(dāng)儀器指示陽性，通過培養(yǎng)沒有細(xì)菌生長同時革蘭染色涂片沒有發(fā)現(xiàn)微生物的情況，則判定為假陽性。陰性的判定方法和條件為：在培養(yǎng)瓶中監(jiān)測5d，在第5天盲種血平板孵育過夜和涂片鏡檢兩項(xiàng)結(jié)果都是陰性。假陰性的判定方法和條件為：第5天盲種血平板孵育過夜以及涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長，鑒定后發(fā)出陽性報(bào)告，這一類為儀器漏檢的陽性標(biāo)本。

2 結(jié)果

2.1 陽性率 本研究共檢測865份標(biāo)本，共分離出103株菌，陽性率為11.9%。

2.2 陽性檢出時間 本研究陽性檢出時間為2～144小時，最短者為大腸埃希菌，最長者為非發(fā)酵菌，其中83株（70.87%）為24小時內(nèi)檢出，32株（31.06%）為24～48小時檢出，6株（5.82%）為48小時以后檢出。

2.3 檢出微生物的種類 葡萄球菌38株（36.89%），腸桿菌科細(xì)菌45株（43.69%），鏈球菌屬10株（9.71%），非發(fā)酵菌5株（4.85%），真菌 3株（2.91%），微球菌 2株（1.94%）。

2.4 假陰性率 在865份標(biāo)本檢測為陰性者中，盲傳后分離出白色念株菌1株，近平滑念株菌1株，假陽性率為0.23%。

2.5 假陽性率 865份標(biāo)本中共有762份檢測為陰性，這其中有8份樣本機(jī)器顯示陽性但轉(zhuǎn)種后都沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長，假陽性率為0.92%。

3 討論

敗血癥是非常嚴(yán)重的全身性感染，病死率極高，但有時并無特殊的臨床表現(xiàn)，故血液細(xì)菌培養(yǎng)陽性對敗血癥和菌血癥患者非常重要[3]。

從以上內(nèi)容可以看出，血培養(yǎng)以革蘭陽性菌為主，占51.45%，陰性菌占48.55%，革蘭陽性菌多為葡萄球菌，在葡萄球菌中又多為凝固酶陰性的葡萄球菌。肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌是革蘭陰性桿菌的主要菌種。同時，真菌檢出率出現(xiàn)上升的勢頭，血培養(yǎng)陽性的人群多為住院患者，且多為免疫功能低下和外科大手術(shù)的患者。國內(nèi)的相關(guān)研究結(jié)果顯示，BACTEC9050血培養(yǎng)儀具有檢出率高和檢出時間快[4-5]以及操作簡便和出錯率低的優(yōu)點(diǎn)。判斷血液培養(yǎng)方法優(yōu)劣的重要指標(biāo)還包括假陰性率和假陽性率。本研究的陰性血培養(yǎng)標(biāo)本中，經(jīng)盲分離出了2株真菌，提示BACTEC9050儀器的真菌培養(yǎng)存在一定不足。在懷疑真菌感染情況下應(yīng)適當(dāng)增加培養(yǎng)時間。在本研究中，還出現(xiàn)了8份假陽性結(jié)果，對患者具有較大危害，一是在真菌感染的情況下，真菌對糖的代謝能力比普通細(xì)菌要低,因此導(dǎo)致代謝過程中產(chǎn)生CO2的能力較低，進(jìn)而產(chǎn)生了假陰性結(jié)果；二是在非發(fā)酵菌感染的情況下，只能氧化葡萄糖產(chǎn)酸而不能發(fā)酵葡萄糖，導(dǎo)致產(chǎn)酸產(chǎn)氣量較發(fā)酵菌低和CO2產(chǎn)量很低，最終導(dǎo)致了假陰性。三是可能與培養(yǎng)瓶放入儀器前置室溫或普通孵育箱中過久有關(guān)[6]。雖然BACTEC9050儀器較傳統(tǒng)的血培養(yǎng)優(yōu)越，但在監(jiān)測系統(tǒng)上仍需要進(jìn)一步完善。

[1]喬寧,喻華.BacT/Aler240全自動血培養(yǎng)儀臨床應(yīng)用評[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2009,6(1):61-62.

[2]Mermel LA,Maki DG.Detection of bacteremia in adults:consequences of culturing an inadequate volume of blood[J].Ann Intern Med,1993,119:270-272.

[3]張鳳華,王大利.雙向瓶1589份血培養(yǎng)結(jié)果分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2004,16(1):48

[4]濮躍晨,魯懷偉,李華,等.全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)檢測730份需氧血培養(yǎng)結(jié)果分析[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2000,15(3):168.

[5]張景艷,鄭宏圖,鐘學(xué)良.BD BACTEC 9050全自動血培養(yǎng)儀臨床分析及評價(jià)[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(11):150-151.

[6]陶傳敏,溫曉波,鄺玉,等.BacT/AIert240全自動血培養(yǎng)儀的臨床應(yīng)用及評價(jià)[J].西部醫(yī)學(xué),2002,17(3):366-368.