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(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院病理科，山東 青島 266071)

肺癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，小細(xì)胞肺癌(SCLC)約占原發(fā)性肺癌的15%～20%,是肺癌中分化最低、惡性度最高的一種。大多數(shù)病人確診時已發(fā)生轉(zhuǎn)移，失去手術(shù)機(jī)會。因此，治療小細(xì)胞肺癌的主要方法是放化療。多藥耐藥(MDR)是小細(xì)胞肺癌治療失敗的主要原因，嚴(yán)重影響病人的預(yù)后。本文采用免疫組織化學(xué)方法檢測40例小細(xì)胞肺癌組織孕烷X受體(PXR)及P糖蛋白(P-gp)的表達(dá)，探討其表達(dá)與MDR及預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

2010年1月—2013年2月，收集我院行手術(shù)切除或活檢的小細(xì)胞肺癌標(biāo)本40例，均未進(jìn)行放化療。男27例，年齡82～49歲，中位年齡64歲；女13例，年齡77～48歲，中位年齡62歲。小細(xì)胞肺癌分期參照美國退伍軍人醫(yī)院肺癌研究小組所制定的SCLC分期系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)[1]，被納入的病例局限期13例，廣泛期27例；有吸煙史者25例，無吸煙史者15例。所有納入病例均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。

1.2 試劑及方法

鼠抗人P-gp單克隆抗體ZM-0189購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗人NR1I2抗體PXR購于美國ABGENT公司；PBS緩沖液、山羊血清封閉液、山羊抗鼠-抗兔生物二抗及DAB顯色試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；PULS+防脫載玻片購于南通天盛實(shí)驗(yàn)器材有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

全部標(biāo)本以40 g/L甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚切片。采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(SP法)制片，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑說明書進(jìn)行。以尸檢的正常人肝臟作為PXR的陽性對照，用已知的P-gp陽性切片作為P-gp的陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定

PXR以胞核及核周出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。P-gp以胞漿及胞膜著色為陽性。按陽性細(xì)胞著色面積及染色程度進(jìn)行評分：①按陽性細(xì)胞著色面積所占的百分比評分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。②按著色程度評分：不著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。將著色程度評分與著色面積評分相乘作為結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，其中0～3分為陰性，≥4分為陽性[2]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

全部數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件分析處理。計數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)， PXR與P-gp之間的關(guān)系采用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 PXR、P-gp表達(dá)與SCLC臨床病理特征關(guān)系

PXR、P-gp在SCLC組織中的表達(dá)與病人年齡、性別及腫瘤臨床分期無關(guān)(P>0.05)，而與吸煙史有關(guān)(χ2=8.47、5.09,P<0.05)。見表1。

2.2 SCLC組織PXR與P-gp蛋白表達(dá)相關(guān)性

PXR與P-gp蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)(χ2=9.60，P<0.05)。

表1 PXR與P-gp蛋白表達(dá)與小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

小細(xì)胞肺癌占全部肺癌的15%～20%，起源于伴有神經(jīng)內(nèi)分泌特征的內(nèi)胚層干細(xì)胞，是一種高度惡性腫瘤，生長迅速，通常在診斷時已發(fā)生轉(zhuǎn)移，手術(shù)效果不理想，5年存活率低。小細(xì)胞肺癌對化療極其敏感，目前對小細(xì)胞肺癌治療采用以放化療為主的綜合治療。小細(xì)胞肺癌治療失敗的主要原因是腫瘤MDR的產(chǎn)生，使癌組織局部進(jìn)展和復(fù)發(fā)，阻礙小細(xì)胞肺癌的治療。如何提早發(fā)現(xiàn)腫瘤耐藥進(jìn)而改變治療方案顯得極為重要，USHIJIMA等[4]通過檢測支氣管鏡活檢標(biāo)本P-gp的表達(dá)預(yù)測小細(xì)胞肺癌對順鉑的敏感性，其隨訪資料顯示，P-gp是小細(xì)胞肺癌對化療藥物耐受性的一種良好預(yù)測因子。P-gp(ABCB1/MDR1)是由MDR1基因編碼的第一個被發(fā)現(xiàn)的ABC家族蛋白，P-gp的主要生物學(xué)作用是外排化療藥物及環(huán)境中的有毒物質(zhì)[5]。在諸多的MDR的機(jī)制中，P-gp的表達(dá)是產(chǎn)生MDR的主要原因，這一觀點(diǎn)已成為眾多學(xué)者的共識。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，P-gp的表達(dá)與小細(xì)胞肺癌病人的年齡、性別及腫瘤臨床分期無關(guān)，而有吸煙史者比無吸煙史者陽性率更高，可能是因?yàn)橄銦熤械哪承┗瘜W(xué)物質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生MDR所致。研究顯示，P-gp是腫瘤中第一個已知的耐藥膜蛋白，目前研究結(jié)果表明，沒有任何專一藥物代謝酶或磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體可以單獨(dú)調(diào)節(jié)P-gp的表達(dá)，P-gp的表達(dá)是一個復(fù)雜的過程[6]。但是關(guān)于調(diào)節(jié)P-gp表達(dá)原因的探究從未間斷過，如P-gp基因的上游調(diào)節(jié)關(guān)鍵因子PXR。

PXR是配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子核受體家族成員之一，因調(diào)節(jié)內(nèi)源性孕固醇而命名。DR-4元件位于ABCB1基因上游的增強(qiáng)區(qū)，是PXR結(jié)合位點(diǎn)。而ABCB1基因可以編碼P-gp蛋白的轉(zhuǎn)錄，即PXR可調(diào)節(jié)P-gp的產(chǎn)生。PXR在多種腫瘤組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平和腫瘤組織的耐藥性呈正相關(guān)[7]。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PXR比P-gp能更敏感地反映機(jī)體耐藥情況，PXR的表達(dá)與小細(xì)胞肺癌病人性別、年齡及腫瘤臨床分期無關(guān)，但兩者表達(dá)水平呈正相關(guān)，證明P-gp蛋白的表達(dá)可能與PXR的表達(dá)相關(guān)，受PXR的調(diào)節(jié)。研究顯示，PXR在癌細(xì)胞中表達(dá)可由化療藥物或其他內(nèi)源性、外源性化合物激活，并直接介導(dǎo)癌細(xì)胞對化療藥物的耐藥性；PXR可調(diào)節(jié)包括ABC藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在內(nèi)的幾種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如MDR相關(guān)蛋白、乳癌耐藥蛋白、P-gp等使癌細(xì)胞獲得MDR[8]。因此，檢測小細(xì)胞肺癌組織PXR或聯(lián)合檢測PXR與P-gp比單純檢測P-gp能更早反映小細(xì)胞肺癌的MDR性。本研究結(jié)果顯示，小細(xì)胞肺癌病人PXR表達(dá)水平較P-gp高，可以比P-gp更早反映腫瘤耐藥,PXR可以作為檢測小細(xì)胞肺癌組織MDR的指標(biāo)。

有研究證實(shí)，利福平、硝苯地平、米非司酮等可促進(jìn)人原代肝細(xì)胞系及結(jié)腸癌細(xì)胞系等的PXR及P-gp表達(dá)[9]。在PXR較高水平表達(dá)的腫瘤病人中使用任何可激活PXR的藥物都可能會導(dǎo)致較差的治療效果，臨床可以首先檢測PXR確定病人是否耐藥，從而早期選擇個性化的化療方案。

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