龍姍姍，喻 華

流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)是一類革蘭陰性小桿菌，是臨床上社區(qū)獲得性感染的常見病原菌，以上呼吸道感染和肺炎發(fā)病為主，并可侵入血液導(dǎo)致多種感染性疾病。進一步了解流感嗜血桿菌對常用抗生素的耐藥性，為流感嗜血桿菌感染的臨床治療提供實驗室依據(jù)，本文總結(jié)了四川省人民醫(yī)院臨床微生物室2010年1月－2012年12月間分離出的201 株流感嗜血桿菌的耐藥特點和分布規(guī)律，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 菌株來源于2010年1月－2012年12月本院臨床標(biāo)本中分離的非重復(fù)流感嗜血桿菌。

1.2 方法(1)細菌鑒定:挑取純培養(yǎng)或優(yōu)勢生長的可疑菌落接種5%羊血瓊脂平板及MH 瓊脂平板進行衛(wèi)星試驗，再采用VITEK2-compact 系統(tǒng)NHI 試卡或API 系統(tǒng)進行最終鑒定。(2)培養(yǎng)基:巧克力基礎(chǔ)培養(yǎng)基、羊血瓊脂平板為鄭州安圖有限公司產(chǎn)品，β-內(nèi)酰胺酶紙片(頭孢硝噻吩)、API 鑒定試條、VITEK2-compact 鑒定試卡均購于法國生物梅里埃公司。(3)藥敏測定:采用梅里埃公司ATB HAEMO 5 藥敏條進行藥敏測定?？股匕ò逼S西林、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢噻肟、氧氟沙星、四環(huán)素、利福平、復(fù)方新諾明、阿莫西林/克拉維酸、氯霉素。(4)β-內(nèi)酰胺酶試驗:采用頭孢硝噻吩紙片定性試驗。用1 滴無菌水將頭孢硝噻吩紙片潤濕，將受試菌直接涂于潤濕的紙片上，觀察其顏色變化，產(chǎn)生紅色者為產(chǎn)酶陽性。質(zhì)量控制:按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)2012 要求進行質(zhì)量控制。質(zhì)控菌株流感嗜血桿菌ATCC 49247。

1.3 統(tǒng)計方法 藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)按照CLSI 2012 標(biāo)準(zhǔn)。所得結(jié)果用WHONET 5.6 軟件進行分析。

2 結(jié)果

2.1 流感嗜血桿菌來源及分布情況 標(biāo)本中分離出流感嗜血桿菌201 株，其中來自痰液標(biāo)本193 株，占96.0%，支氣管灌洗液6 株，占2.9%，血液2 株，占1.1%，其主要以呼吸道感染為主;科室分布以呼吸科(104 株，占51.7%)、外科(31株，占15.4%)、ICU(27 株，占13.4%)為主，成人患病率較兒童高，見表1。

表1 201 株流感嗜血桿菌科室分布

2.2 流感嗜血桿菌對各種抗菌藥物的耐藥性 3年間對201株流感嗜血桿菌進行了10 種抗生素敏感性檢測，流感嗜血桿菌對利福平敏感率最低，僅45.5%，其次為氨芐西林73.4%，對氯霉素、復(fù)方新諾明敏感率分別為87.5%、87.1%，而對阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢克洛、四環(huán)素敏感率較高，均在90%以上，見表2。氨芐西林與復(fù)方新諾明耐藥率3年來逐年上升，分別達19.5%～30.1%，2.6%～12.6%，而對阿莫西林/克拉維酸的耐藥率僅為2.5%～3.4%，說明β－內(nèi)酰胺酶抑制劑仍是目前治療流感嗜血桿菌感染的有效抗生素，見表3。成人分離株對氨芐西林及利福平敏感性(76.5%，51.9%)明顯高于兒童分離株(64.4%，41.2%)，但對四環(huán)素，兒童分離株的敏感性(91.3%)高于成人分離株(82.1%)，見表4。

表2 201 株流感嗜血桿菌對抗菌藥物的耐藥率與敏感率

2.3 β-內(nèi)酰胺酶檢出率 臨床分離的201 株流感嗜血桿菌經(jīng)β-內(nèi)酰胺酶試驗，產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的有53 株，產(chǎn)酶檢出率為26.4%。其中14 株分離自兒童，產(chǎn)酶率為31.8%(14/44)，39株分離自成人，產(chǎn)酶率為24.8%(39/157)，兒童組β-內(nèi)酰胺酶檢出率明顯高于成人組。

表3 201 株流感嗜血桿菌藥敏結(jié)果(%)

表4 201 株流感嗜血桿成人分離株與兒童分離株藥敏結(jié)果(%)

3 討論

流感嗜血桿菌是引起醫(yī)院感染的重要條件致病菌之一，寄居于人上呼吸道黏膜，常引起呼吸道感染、肺炎、鼻炎、咽炎、亞急性心內(nèi)膜炎等嚴(yán)重疾病。從2010年1月－2012年12月本院臨床標(biāo)本中分離出的201 株流感嗜血桿菌來看，其中來自痰液標(biāo)本193 株，占96.0%，支氣管灌洗液6 株，占2.9%，血液2 株，占1.1%，其主要以呼吸道感染為主;科室分布以呼吸科(104 株，占51.7%)、外科(31 株，占15.4%)、ICU(27 株，占13.4%)為主，可能與這3 個科室收治患者住院時間長、侵襲性操作多、患者抵抗力低下，長期使用多種抗菌藥物有關(guān)。臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)病區(qū)患者進行隔離防范，以控制本菌引起感染［1］。

本資料中發(fā)現(xiàn)，流感嗜血桿菌對抗生素耐藥率增長較快，而且范圍也有擴大。在我國，氨芐青霉素因其價格低，副作用小，常作為一線抗生素應(yīng)用于臨床，用量大，用藥時間長，因此對該藥的耐藥率增長較快，為19.5%～30.1%，在中國不同城市或地區(qū)耐藥率也在4%～33%不等［2］。而阿莫西林加酶抑制劑耐藥率較氨芐西林明顯降低，僅為2.5%～3.4%，說明流感嗜血桿菌對氨芐青霉素耐藥多由β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，主要是以質(zhì)粒介導(dǎo)的TEM-1 型［3］酶引起的，且耐藥性的增長是伴隨β-內(nèi)酰胺酶陽性率的增高同時發(fā)生的。國外曾報道流感嗜血桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率在5%～55%［4］，我國為2.6%～45%［3，5］，本資料中201 株流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率為25.9%，與國內(nèi)外報道基本一致［1］，但較我院2006～2007年［6］檢測結(jié)果相比，β-內(nèi)酰胺酶率有上升趨勢。值得注意的是，兒童組β-內(nèi)酰胺酶檢出率和氨芐西林耐藥率明顯高于成人組，分別高達31.8%和33.5%。因此，青霉素類藥物治療流感嗜血桿菌感染，尤其是兒童感染時，應(yīng)有藥敏結(jié)果的支持［7］。頭孢克洛、頭孢噻肟及氧氟沙星較2006～2007年［6］相比，對流感嗜血桿菌仍保持很高的活性，敏感率均接近100%，故2、3 代頭孢菌屬藥物及喹諾酮類藥物仍為臨床治療的首選藥。而磺胺類藥物耐藥率也出現(xiàn)逐年遞增趨勢，耐藥率為2.6%～12.6%，可能由于流感嗜血桿菌過度產(chǎn)生雙氫葉酸還原酶所致［8］。

抗生素的廣泛使用是細菌耐藥性形成的重要原因，因此合理使用抗生素是延緩細菌耐藥性產(chǎn)生的重要措施。

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