(1.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院新生兒科,湖南衡陽(yáng)421001;2.南華大學(xué)醫(yī)務(wù)所)

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是指各種圍生期窒息引起的部分或完全缺氧、腦血流減少或暫停所致的新生兒腦損傷,可產(chǎn)生永久性功能障礙,是新生兒死亡和神經(jīng)系統(tǒng)致殘的重要原因。目前認(rèn)為HIE是多因素介導(dǎo)和參與的過(guò)程。近年研究發(fā)現(xiàn),炎性細(xì)胞因子在HIE發(fā)生發(fā)展中起重要作用[1]。Th17細(xì)胞是除Th1、Th2細(xì)胞外的第3種CD4+T細(xì)胞亞群,能夠分泌白細(xì)胞介素-17(interleukin-17,IL-17),IL-17可促進(jìn)多種炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生及炎癥細(xì)胞在炎癥部位聚集[2],而白細(xì)胞介素-23(interleukin-23,IL-23)為T(mén)h17細(xì)胞發(fā)育分化的主要促動(dòng)因子,目前研究已證實(shí)IL-23/IL-17炎癥軸在眾多炎癥或自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用[3]。但I(xiàn)L-23、IL-17與HIE的關(guān)系尚不清楚。因此,本研究通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定HIE患兒和健康新生兒血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)、腫瘤壞死因子 α(TNF-α)、IL-1β 水平,旨在探討IL-23/IL-17炎癥軸在HIE發(fā)病機(jī)制中的作用及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2013年6月在本科住院的HIE足月患兒98例,全部病例均符合HIE診斷和臨床分度標(biāo)準(zhǔn)[4]。98例患兒中男55例,女43例,胎齡38.97±1.26周,出生體質(zhì)量3.85±0.41 kg;HIE輕度40例,中度32例,重度26例。另選同期本院出生的30名健康足月新生兒作為正常對(duì)照組,其中男17例,女13例;胎齡38.62±1.17周;出生體質(zhì)量3.69±0.38 kg。兩組新生兒母親孕期均健康,無(wú)妊娠合并癥,且均知情同意。兩組新生兒性別、胎齡、出生體質(zhì)量以及分娩方式等比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集

出生后3天,全部新生兒取外周靜脈血3 mL,在室溫下,以3 000 rpm離心10 min,離心半徑為15 cm,收集上層血清,置于-20℃冰箱保存,以備統(tǒng)一檢測(cè)。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清IL-23、IL-17水平

通過(guò)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清IL-23和IL-17水平,試劑盒購(gòu)于深圳晶美生物工程公司,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)由專(zhuān)人統(tǒng)一操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,兩組比較用t檢驗(yàn),多組比較采用單因素方差分析及q檢驗(yàn),P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 HIE組與對(duì)照組IL-23、IL-17水平比較

從表1可見(jiàn),HIE組血清IL-23、IL-17水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01),提示IL-23、IL-17可能參與HIE發(fā)病過(guò)程。

表1 兩組血清IL-23和IL-17水平比較(ng/L)

2.2 不同程度HIE組IL-23、IL-17水平比較

從表2可見(jiàn),與正常對(duì)照組比較,輕、中、重度HIE組血清IL-23、IL-17水平明顯升高(P＜0.05或0.01);與輕度HIE組比較,中、重度HIE組血清IL-23、IL-17水平顯著增加(P＜0.05或0.01)。此外,重度HIE組 IL-23、IL-17水平較中度 HIE組增高(P＜0.01),提示血清IL-23、IL-17水平與HIE臨床分度密切相關(guān)。

表2 不同程度HIE患兒血清IL-23、IL-17水平的比較(ng/L)

3 討 論

腦缺氧缺血是與急性炎癥反應(yīng)相關(guān)的病理過(guò)程,缺氧缺血后大腦通過(guò)多種神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)調(diào)節(jié)免疫功能,免疫系統(tǒng)也通過(guò)一些特殊的物質(zhì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。免疫系統(tǒng)相關(guān)的分子,尤其是多種細(xì)胞因子參與HIE的發(fā)病機(jī)制。人類(lèi)IL-17是一種由155個(gè)氨基酸組成的同型二聚體,其基因定位于染色體2q31。它是一種促炎癥細(xì)胞因子,主要由Th17細(xì)胞產(chǎn)生,其它細(xì)胞如自然殺傷細(xì)胞、中性粒細(xì)胞也可分泌,通過(guò)核因子-κB(NF-κB)途徑能誘導(dǎo)活化T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生多種促炎遞質(zhì),包括白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α及趨化因子,并募集炎癥細(xì)胞至炎癥部位,從而誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)[5]。Nakae等[6]在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠中發(fā)現(xiàn),IL-17基因敲除可明顯抑制炎癥反應(yīng),進(jìn)而減輕病變。

本研究發(fā)現(xiàn),HIE組血清IL-17水平顯著高于正常對(duì)照組,且病情越重,IL-17水平越高,提示腦損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞破壞溢出,腦水腫、腦缺氧缺血以及血腦屏障破壞等因素促進(jìn)Th17細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位,并釋放IL-17,進(jìn)一步促進(jìn)腦損傷。且HIE病情越重,IL-17產(chǎn)生越多,腦損傷越廣泛,說(shuō)明IL-17在一定程度上反映了HIE患兒腦損傷的程度,對(duì)病情的監(jiān)測(cè)具有重要參考價(jià)值。

IL-23是在2000年被發(fā)現(xiàn)的一種促炎性細(xì)胞因子,屬于IL-12超家族,是由P19和P40亞單位以共價(jià)二硫鍵結(jié)合組成的異二聚體分子,IL-23與IL-12均含有P40亞單位,但P19為 IL-23所特有,單獨(dú)存在時(shí)沒(méi)有活性[7]。IL-23主要表達(dá)于樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。雖然IL-23具有多種生物學(xué)作用,但其最重要的功能在于促進(jìn)Th17細(xì)胞分泌IL-17。已有研究證實(shí),IL-23基因缺失小鼠的體液免疫嚴(yán)重受損,刺激Th17細(xì)胞分泌IL-17的能力顯著降低,并且IL-23缺失小鼠與IL-17缺失小鼠具有相似的表型,表明IL-23通過(guò)IL-17發(fā)揮促炎作用[8]。本研究結(jié)果表明,HIE組血清IL-23水平明顯高于正常對(duì)照組,并且隨著病情加重,血清IL-23水平逐漸升高,以重度HIE組最高,提示IL-23在HIE的發(fā)病機(jī)制中起重要作用,并且與病情程度密切相關(guān)。

綜上所述,本研究結(jié)果提示IL-23、IL-17可能是HIE發(fā)病機(jī)制中的重要細(xì)胞因子,測(cè)定這些細(xì)胞因子水平對(duì)HIE臨床分度的判斷具有重要意義,IL-23/IL-17炎癥軸未來(lái)有可能成為免疫治療HIE的新靶點(diǎn)。

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