黃 佳 胡麗華 華海飛 潘 露 林 峰

·技術(shù)與方法·

浙北地區(qū)過(guò)敏性疾病患者過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析

黃 佳 胡麗華 華海飛 潘 露 林 峰

目的: 明確浙北地區(qū)過(guò)敏性疾病患者的過(guò)敏原種類。方法: 采用免疫印跡法，對(duì)該地區(qū)1809例過(guò)敏性疾病患者的血清進(jìn)行吸入性過(guò)敏原和食入性過(guò)敏原檢測(cè)。結(jié)果: 浙北地區(qū)吸入性過(guò)敏原和食入性過(guò)敏原陽(yáng)性率分別為87.7%和46.2%。結(jié)論: 浙北地區(qū)以吸入性過(guò)敏原為主。

過(guò)敏性疾病； 過(guò)敏原； 免疫印跡法

為了解浙北地區(qū)過(guò)敏性疾病過(guò)敏原情況，對(duì)1809例于2010年8月至2012年11月來(lái)我院就診的過(guò)敏性疾病患者進(jìn)行過(guò)敏原分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 1809例過(guò)敏性疾病患者，其中女1127例(62.3%)，男682例(37.7%)，年齡1～83歲，平均33.24歲。疾病包括蕁麻疹、濕疹、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、哮喘。所有病例均經(jīng)臨床確診。除外因壓力、日光、寒冷、運(yùn)動(dòng)等物理因素和藥物所致的蕁麻疹，無(wú)全身系統(tǒng)性疾病的損害，如結(jié)締組織病、病毒感染、細(xì)菌感染等，排除妊娠及哺乳期婦女。所有患者血液標(biāo)本采集前均停用長(zhǎng)效抗組胺藥1周以上，短效抗組胺藥3天以上，糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑1個(gè)月以上。

1.2 方法 對(duì)所有的過(guò)敏性疾病患者靜脈采血5 mL，離心后取血清進(jìn)行免疫印跡法檢測(cè)，試劑采用MEDIWISS Analytic GmbH公司生產(chǎn)的AllergyScreen過(guò)敏原診斷試劑。吸入性過(guò)敏原包括塵螨(粉塵螨、戶塵螨)、草組合(矮豚草、蒿草)、貓狗毛皮屑、蟑螂、霉菌組合(點(diǎn)青霉、交鏈孢霉、煙曲霉、分枝孢霉)、樹(shù)組合(柏樹(shù)、榆樹(shù)、梧桐、柳樹(shù)、三角葉楊)、葎草。食入性過(guò)敏原包括雞蛋、牛奶、魚(yú)蝦蟹、牛羊肉、堅(jiān)果(腰果、花生、黃豆)、芒果、小麥。

1.3 操作步驟 嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。(1)將試劑恢復(fù)到室溫(20～22℃)，用經(jīng)蒸餾水以1∶25稀釋的洗脫液濕潤(rùn)硝酸纖維素膜；(2)棄去洗脫液，在檢測(cè)板上加入250μL的血清標(biāo)本，在混勻器上室溫孵育45 min；(3)沖洗后加入250μL抗抗體，在混勻器上室溫孵育45 min；(4)沖洗后加250μL鏈霉親和素標(biāo)記物，在混勻器上室溫孵育20min；(5)沖洗后加入250μL底物，在混勻器上室溫孵育20 min，發(fā)生顏色反應(yīng)；(6)流水沖洗終止底物酶反應(yīng)。

1.4 結(jié)果觀察 對(duì)于每種過(guò)敏原，試劑條上顏色的深淺同患者血清中的特異性IgE抗體含量成正比。完全干燥后將試劑條插入Rapidreader閱讀儀上讀取結(jié)果，連接計(jì)算機(jī)即可進(jìn)行量化分析。

1.5 結(jié)果判斷 陽(yáng)性對(duì)照(質(zhì)控線)均為紫色，呈陽(yáng)性反應(yīng)。檢測(cè)結(jié)果分成0～6級(jí):(1)把過(guò)敏原特異性IgE＜0.35 IU/m L，定為陰性反應(yīng)，為0級(jí)；(2)＞0.35 IU/mL定為陽(yáng)性反應(yīng)，其中0.35～0.69 IU/mL為1級(jí)(低)；0.70～3.49 IU/mL為2級(jí)(增加)；(3)＞3.5 IU/ mL，定為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；3.50～17.49 IU/mL為3級(jí)(顯著增加)；(4)17.50～49.90 IU/m L為4級(jí)(高)；(5) 50～100 IU/mL為5級(jí)(較高)；(6)＞100 IU/mL為6級(jí)(極高)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間差異采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 過(guò)敏原檢測(cè)情況 見(jiàn)表1。1809例過(guò)敏性疾病患者中過(guò)敏原陽(yáng)性者881例，占48.7%，其中吸入性過(guò)敏原陽(yáng)性474例，占26.2%，食入性過(guò)敏原陽(yáng)性108例，占6.0%，兩組均陽(yáng)性299例，占16.5%。吸入組過(guò)敏原陽(yáng)性率高于食入組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 1809例過(guò)敏原檢測(cè)情況

2.2 吸入性和食入性過(guò)敏原檢測(cè)陽(yáng)性情況 見(jiàn)表2和表3。在吸入性過(guò)敏原中，塵螨(粉塵螨、戶塵螨)的陽(yáng)性率最高，占31.2%，其余依次為蟑螂、草組合(矮豚草、蒿草)、樹(shù)組合(柏樹(shù)、榆樹(shù)、梧桐、柳樹(shù)、三角葉楊)、葎草、霉菌組合(點(diǎn)青霉、交鏈孢霉、煙曲霉、分枝孢霉)和貓狗毛皮屑，陽(yáng)性率依次為13.1%、12.9%、9.7%、9.1%、6.7%和4.5%。在食入性過(guò)敏原中，以牛奶、小麥、堅(jiān)果(腰果、花生、黃豆)、芒果為主，陽(yáng)性率分別為9.9%、9.6%、9.2%、8.7%，魚(yú)蝦蟹、雞蛋(雞蛋白、雞蛋黃)和牛羊肉的陽(yáng)性率比較低，分別為3.9%、2.6%和1.3%。

2.3 同一患者可多種過(guò)敏原同時(shí)陽(yáng)性 過(guò)敏性疾病可能是由1種過(guò)敏原引起，也可以是由2種或2種以上過(guò)敏原引起。同一患者同時(shí)多種過(guò)敏原陽(yáng)性情況見(jiàn)表4。881例陽(yáng)性患者中，對(duì)2種及以上過(guò)敏原有陽(yáng)性反應(yīng)有472例，占53.6%。

表2 吸入性過(guò)敏原檢測(cè)情況

表3 食入性過(guò)敏原檢測(cè)情況

2.4 不同季節(jié)過(guò)敏原情況 各季節(jié)吸入性過(guò)敏原的陽(yáng)性率有區(qū)別，見(jiàn)表5。塵螨、草組合、貓狗毛皮屑、蟑螂和霉菌組合在夏秋季陽(yáng)性率比春冬兩季高，樹(shù)組合和葎草陽(yáng)性率則在春夏兩季較高。

表4 同一患者同時(shí)多種過(guò)敏原陽(yáng)性情況

表5 不同季節(jié)吸入性過(guò)敏原的情況

3 討論

過(guò)敏性疾病病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制中包括變態(tài)反應(yīng)和非變態(tài)反應(yīng)。IgE水平和細(xì)胞因子的變化一直是研究中的重點(diǎn)。通過(guò)特異性的IgE抗體檢測(cè)可幫助尋找過(guò)敏原。IgE抗體是親細(xì)胞性抗體，當(dāng)機(jī)體遇到同一抗原時(shí)，則在肥大細(xì)胞表面發(fā)生抗原－抗體反應(yīng)，引起肥大細(xì)胞等脫顆粒反應(yīng)，釋放化學(xué)介質(zhì)，導(dǎo)致各種相應(yīng)臨床表現(xiàn)。

資料顯示，浙北地區(qū)1809例過(guò)敏性疾病患者中過(guò)敏原陽(yáng)性者881例，占48.7%。過(guò)敏原陽(yáng)性者以吸入性過(guò)敏原為主，其中排前3位的是塵螨(31.2%)、蟑螂(13.1%)、草組合(12.9%)，與國(guó)內(nèi)報(bào)道基本相符。1浙北地區(qū)氣溫適中、雨水充沛、空氣濕潤(rùn)，非常適合塵螨的滋生和蟑螂的繁殖。食入性過(guò)敏原以牛奶、小麥、堅(jiān)果為主。小麥的陽(yáng)性率高于其他地區(qū)，與國(guó)內(nèi)報(bào)道不一致，2這可能與浙北地區(qū)是浙江小麥的主產(chǎn)區(qū)有關(guān)，對(duì)小麥的接觸機(jī)會(huì)比其他地區(qū)多。

資料顯示，同一患者可同時(shí)多種過(guò)敏原呈陽(yáng)性，對(duì)3種及以下過(guò)敏原呈陽(yáng)性反應(yīng)的占75.1%，與當(dāng)前國(guó)內(nèi)報(bào)道基本相符，3提示大多數(shù)患者對(duì)多種過(guò)敏原呈陽(yáng)性反應(yīng)?？赡苁怯捎诖嬖谕瑫r(shí)致敏，或者反應(yīng)過(guò)程中許多炎癥因子及相關(guān)分子表達(dá)上調(diào)，患者處于高敏狀態(tài)，增加了新過(guò)敏原致敏的可能性；也可能是由于交叉過(guò)敏的存在，所以當(dāng)一種過(guò)敏原致敏后，再接觸含有相同致敏蛋白質(zhì)序列的物質(zhì)也容易發(fā)生過(guò)敏。因此，患者可同時(shí)對(duì)多種變應(yīng)原過(guò)敏，這種現(xiàn)象也提示單一變應(yīng)原脫敏治療效果不佳的原因。4

資料顯示，吸入性植物過(guò)敏原中，草組合的陽(yáng)性率在夏秋季較高，5樹(shù)組合、葎草的陽(yáng)性率在春夏季較高，這與其各自的花期有關(guān)。草組合中的矮豚草花期在7～9月底、蒿草的花期在春末夏初。樹(shù)組合中的各樹(shù)木花期在3～7月，葎草的花期在6～10月。這時(shí)期花粉隨風(fēng)飄在空氣中，極易誘導(dǎo)過(guò)敏者產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。

AllergyScreen過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)其局限性仍不可避免，不能憑任何一個(gè)試驗(yàn)結(jié)果作出最終臨床診斷。陽(yáng)性結(jié)果并不能完全說(shuō)明患者對(duì)該物質(zhì)過(guò)敏，因?yàn)榇罅恐参锘騽?dòng)物類過(guò)敏原中含有低聚糖側(cè)鏈的糖蛋白類，由于它們結(jié)構(gòu)的相似性，可引起很強(qiáng)的交叉反應(yīng)。如草類與小麥、花生、瓜類等有交叉反應(yīng)，樺樹(shù)與榛子、蘋果、胡蘿卜等有交叉反應(yīng)。同樣，本試劑盒中只有幾十種過(guò)敏原，全部陰性也不能排除對(duì)不包括在這試驗(yàn)內(nèi)的其他過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)積極尋找其他過(guò)敏原。因此，應(yīng)由有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生根據(jù)病史和檢測(cè)特異過(guò)敏原的試驗(yàn)來(lái)結(jié)合分析病情。

引起過(guò)敏性疾病的過(guò)敏原種類繁多，常因環(huán)境、地理位置、生活習(xí)慣不同而有所差異，故對(duì)其防治應(yīng)考慮差異性。對(duì)于螨蟲(chóng)過(guò)敏患者要保持室內(nèi)通風(fēng)干燥，經(jīng)常清潔除塵，勤洗勤曬衣被、床單，定期清洗消毒空調(diào)過(guò)濾網(wǎng)，對(duì)于因塵螨過(guò)敏而導(dǎo)致的疾病，目前可采用脫敏療法，可以減輕癥狀和疾病的發(fā)作。對(duì)于花粉過(guò)敏者，減少與各種花粉接觸，平時(shí)盡量減少高蛋白質(zhì)、高熱量的飲食，少食用精加工食物。對(duì)于食物過(guò)敏患者，應(yīng)盡量避免食用。準(zhǔn)確地查找出過(guò)敏原，既可為臨床過(guò)敏性疾病的診斷和治療提供依據(jù)，又可提示患者在日常生活中避免接觸導(dǎo)致自身過(guò)敏的致病因素，具有重要的臨床意義。

1周海林，胡白，蔣法興，等.安徽省1062例慢性蕁麻疹過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析.安徽醫(yī)藥，2012，16(11):1615－1617.

2張玲，吳麗華，肖玲，等.廣東地區(qū)11728例過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(6):657－658，660.

3韋海鵬，鐘永軍，李曉華，等.變態(tài)反應(yīng)性皮膚病過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析.右江醫(yī)學(xué)，2013，41(2):240－241.

4張燕，史學(xué)娟.808例變態(tài)反應(yīng)性疾病敏篩過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42(10):1142－1145.

5張蕊娜，許穎，段曉涵，等.過(guò)敏性皮膚病1774例過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果分析.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2012，26(4):317－318，329.

(收稿:2013－09－09 修回:2013－11－24)

Analysis of the in vitro allergen testing of patients w ith allergic diseases in north areas of Zhejiang

HUANG Jia，HU Li-hua，HUAHai-fei，et al.Institute of Dermatology of Zhejiang Province，313200

Objective:To determine the allergens among the patients with allergic diseases in north areas of Zhejiang.Methods:The serum levels of inhaled allergens and food allergens of 1809 patientswith allergic diseaseswere detected by Western blotting.Results:The positivity rates of inhalation allerges and food allerges were 87.7%and 46.2%，respectively.Conclusion:The main allergens were inhalation allergens.in north areas of Zhejiang.

allergic disease；allergen；Western blotting

·經(jīng)驗(yàn)交流·

浙江省皮膚病防治研究所檢驗(yàn)科，德清，313200