高漫，劉彤，張巖，王曉芳，梁成波

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110004）

AP?2α、E?cadherin及β?catenin與早發(fā)型子癇前期的相關(guān)性

高漫，劉彤，張巖，王曉芳，梁成波

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110004）

目的探討AP-2α、E-cadherin及β-catenin在早發(fā)型子癇前期、晚發(fā)型子癇前期及34周前分娩的胎盤組織中的表達(dá)情況，從而研究其與早發(fā)型子癇前期發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性。方法選取35例早發(fā)型子癇前期、30例晚發(fā)型子癇前期及10例34周前分娩的孕婦，采用免疫組化方法檢測3組胎盤中AP-2α、E-cadherin及β-catenin的表達(dá)情況。結(jié)果早發(fā)型子癇前期、晚發(fā)型子癇前期及34周前分娩的孕婦胎盤組織比較，AP-2α及E-cadherin陽性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而β-catenin陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論早發(fā)型子癇前期與晚發(fā)型子癇前期可能存在不同的發(fā)病機(jī)制，且AP-2α及E-cadherin與早發(fā)型子癇前期發(fā)病機(jī)制有一定關(guān)系。

胎盤淺著床；早發(fā)型子癇前期；轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白；E-cadherin；β-catenin；免疫組化

子癇前期是妊娠期高血壓疾病類型中的一種，可分為早發(fā)型子癇前期與晚發(fā)型子癇前期。本文通過檢測子癇前期患者及≤34周分娩胎盤中轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白（activator protein-2α，AP-2α）、β-連環(huán)素（β-catenin）及上皮型鈣黏蛋白（epithelial cadherin，E-cadherin）表達(dá)水平，進(jìn)而研究其是否能夠影響子癇前期的發(fā)病時(shí)間，以及早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期是否具有不同的發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇2013年2月至2013年11月于我院產(chǎn)科診斷為早發(fā)型子癇前期患者35例，同期診斷為晚發(fā)型子癇前期患者30例及34周前分娩的患者10例?；颊咂骄挲g無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。患者均月經(jīng)正常，無其他手術(shù)、內(nèi)分泌、免疫和代謝性等疾病，無其他妊娠并發(fā)癥，不服用免疫抑制或增強(qiáng)藥物，初產(chǎn)婦，單胎妊娠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本收集與處理：胎盤娩出之后，立即取與臍帶附著處相對的胎盤母體面約1.0 cm×1.0 cm× 1.0 cm大小組織一塊，用生理鹽水沖洗干凈后置于10%中性甲醛固定。

1.2.2 主要試劑：兔抗人AP-2α（bs-3569R）、兔抗人E-cadherin（bs-1016R）及兔抗人β-catenin（bs-1165R）單克隆抗體、羊抗兔抗體、通用型SP試劑盒（s9001-06）、DAB試劑盒（ZL1-9018）均購自北京中杉金橋公司。

1.2.3 免疫組化法檢測胎盤組織中AP-2α、E-cadherin及β-catenin蛋白的表達(dá)水平：實(shí)驗(yàn)步驟按免疫組化SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化測定具體步驟按說明書進(jìn)行。兔抗人AP-2α、兔抗人E-cadherin及兔抗人β-catenin單克隆抗體均為工作液。所有標(biāo)本均設(shè)陽性對照和陰性對照。采用PBS代替一抗作陰性對照。陽性反應(yīng)：細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中有棕黃色顆粒沉著；AP-2α、E-cadherin及β-catenin的表達(dá)強(qiáng)度：0，與背景一致；1，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上見少量淡黃色顆粒；2，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上見較多棕色顆粒；3，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上見褐色顆粒。400倍鏡下觀察每張切片的10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：0，無陽性細(xì)胞；1，＜25%；2，25%～49%；3，＞50%。以染色程度及陽性細(xì)胞數(shù)的乘積評分：0～1，（-）；2～3，（+）；4～5，（++）；＞6，（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包，AP-2α、E-cadherin及β-catenin在各組間表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

早發(fā)型子癇前期、晚發(fā)型子癇前期及34周前分娩的孕婦胎盤組織比較，AP-2α及E-cadherin陽性表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.644，P=0.036；χ2= 6.122，P=0.047），β-catenin陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.479，P=0.065）。見表1，圖1。

3 討論

子癇前期是妊娠期高血壓疾病類型中的一種，為妊娠20周之后出現(xiàn)的以高血壓及蛋白尿?yàn)橹饕卣鞑橛幸悦谀蛳到y(tǒng)及心血管系統(tǒng)為主的多種臟器的損害，是造成孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的主要原因之一。

表1 3組中AP?2α、E?cadherin及β?catenin的陽性表達(dá)率Tab.1 Positive expression rates of AP?2α，E?cadherin and β?catenin in 3 groups

圖1 3組中AP?2α、E?cadherin和β?catenin的表達(dá)免疫組化×200Fig.1 Expressions of AP?2α，E?cadherin and β?catenin in 3 groups Immunohistochemistry×200

正常妊娠時(shí)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞可侵入子宮壁及其血管中，進(jìn)而對子宮螺旋動脈進(jìn)行重塑，發(fā)生血管重鑄現(xiàn)象［1，2］。若重鑄不全則會造成管腔狹窄，進(jìn)而造成胎盤缺血缺氧，胎盤發(fā)育受阻，發(fā)生“胎盤淺著床”［3］。而AP-2α、β-catenin及E-cadherin與胚胎著床有密切關(guān)系，且有研究稱早發(fā)型子癇前期為胎盤源性［4～6］，因此研究其在早發(fā)型子癇前期、晚發(fā)型子癇前期及≤34周分娩患者中的表達(dá)，為早發(fā)型子癇前期發(fā)病機(jī)制的研究提供進(jìn)一步的佐證。

AP-2α是序列特定的DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，可在胎盤中表達(dá)并控制合體滋養(yǎng)細(xì)胞特異性基因表達(dá)。研究表明，AP-2α與人類絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞分化到合體滋養(yǎng)細(xì)胞有密切的關(guān)系［7］，它可以抑制前3個(gè)月滋養(yǎng)細(xì)胞的遷徙和入侵能力［8］，最終引起胎盤的“淺著床”。在本實(shí)驗(yàn)中早發(fā)型子癇前期胎盤組織中AP-2α的表達(dá)高于晚發(fā)型子癇前期及≤34周正常妊娠胎盤組織，可以證明AP-2α與早發(fā)型子癇前期發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

E-cadherin是一組鈣依賴性的細(xì)胞跨膜糖蛋白，影響正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞間的黏附作用［8］。有研究稱正常孕早中期滋養(yǎng)細(xì)胞中E-cadherin是下調(diào)的［9］。過高表達(dá)的E-cadherin可通過減弱胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤能力，影響胎盤床的血管重鑄，造成胎盤淺著床［10］。本實(shí)驗(yàn)中早發(fā)型子癇前期胎盤組織中E-cadherin的表達(dá)高于晚發(fā)型子癇前期及≤34周正常妊娠胎盤組織，可以證明E-cadherin與早發(fā)型子癇前期發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

β-catenin是一種多功能蛋白質(zhì)，它可以與E-cadherin形成復(fù)合體，影響細(xì)胞的黏附性及運(yùn)動性，在婦科惡性腫瘤、胃癌及腸癌等研究中得出二者是正相關(guān)關(guān)系，因而推測β-catenin在早發(fā)型子癇前期中應(yīng)與E-cadherin相一致，屬于高表達(dá)狀態(tài)。但在本實(shí)驗(yàn)中，雖然顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí)可以觀察到差異性，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，早發(fā)型子癇前期、晚發(fā)型子癇前期及≤34周分娩胎盤組織中陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因本實(shí)驗(yàn)自身?xiàng)l件所限制，符合≤34周分娩標(biāo)準(zhǔn)的胎盤收集較困難，致本實(shí)驗(yàn)的研究例數(shù)相對偏少，可能影響本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的結(jié)果。因此繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行進(jìn)一步深入研究二者在滋養(yǎng)細(xì)胞組織中關(guān)系是必要的。

AP-2α與E-cadherin在早發(fā)型子癇前期胎盤組織中高表達(dá)，通過減弱胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤能力，進(jìn)而影響子宮螺旋動脈的入侵能力，使胎盤床的血管重鑄不能完成，造成胎盤淺著床。進(jìn)而證明早發(fā)型子癇前期為胎盤源性疾病，但其可能的分子機(jī)制有待于進(jìn)一步研究闡明。β-catenin與早發(fā)型子癇前期的關(guān)系有待于擴(kuò)大樣本量后進(jìn)一步討論及闡述。

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（編輯 陳姜）

Correlation Study Between the Expression ofAP-2α，E-cadherin，β-catenin and Early-onsetPreeclampsia

GAOMan，LIUTong，ZHANGYan，WANGXiao-fang，LIANGCheng-bo
（DepartmentofObstetrics and Gynecology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo evaluate the expression of AP-2α，E-cadherin and β-catenin in the placental tissue of≤34-week delivery-women，earlyonset preeclampsia and late-onset preeclampsia delivery-women，so as to explore the possible relationship of AP-2α，E-cadherin，and β-catenin with early-onset preeclampsia.MethodsA total of 35 cases of placental tissue from early-onset preeclampsia delivery-women，30 cases of placental tissue from late-onset preeclampsia delivery-women and 10 cases of placental tissue from≤34-week delivery-women were selected.The expression of AP-2α，E-cadherin and β-catenin were detected with the method of immunohistochemistry.ResultsThe expressions of AP-2α and E-cadherin in the experimental group were higher in the placental tissue from early-onset preeclampsia delivery-women than these in other subjects，and the differences were statistical significant.The expression of β-catenin in the experimental group was higher in the placental tissue from earlyonsetpreeclampsia delivery-women，butthere was no significantdifference ofthe positive rate.ConclusionThe pathogenesis ofearly-onsetand late -onsetpreeclampsia may be different.AP-2αand E-cadherin may be involved in the developmentofearly-onsetpreeclampsia.

superficial implantation of placenta；early-onset preeclampsia；AP-2α；E-cadherin；β-catenin；immunohistochemistry

R714.2

A

0258-4646（2014）06-0527-03

高漫（1988-），女，碩士研究生.

劉彤，E-mail：iut@sj-hospital.org

2014-03-05

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