毛正發(fā) 黨勝春 范 昕 朱 霆 瞿建國 王旭青

胃癌是最常見的消化系腫瘤之一，其在腫瘤引起的死亡中居第2位[1]。但是約有65%的患者在確診時有局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，減少了根治性切除的機(jī)會，其5年生存率依然很低，尤其是進(jìn)展期胃癌，只有5%～15%[2]。

雖然胃癌的治療手段有了很大的進(jìn)步，但是胃癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移似乎是不可避免的。胃癌術(shù)后的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是患者主要的致死原因，傳統(tǒng)的治療方法效果十分有限。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的病變過程，涉及多個基因的改變。有研究顯示[3]，在復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的胃癌病灶組織中，多種基因表達(dá)異常，結(jié)締組織生長因子（CTGF）是其中一種。CTGF是CCN蛋白家族成員之一，CTGF的表達(dá)水平與人類多種組織的惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、浸潤轉(zhuǎn)移及其預(yù)后密切相關(guān)。近年來其在腫瘤細(xì)胞增殖，遷移、凋亡及化療耐藥性中的作用逐漸被重視。

本研究中檢測CTGF在胃癌中表達(dá)并且分析了其與臨床病理參數(shù)及患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 CTGF抗體購自美國Santan Cruz公司，β- actin購自美國Sigma公司，收集江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院2009年～2011年病理診斷為胃癌的手術(shù)切除標(biāo)本73例，其中男45例，女28例，年齡43～73歲。距腫瘤5 cm以上正組織取為對照組織（病理證實(shí)非腫瘤組織）。所有患者術(shù)前均未行放、化療。將本組胃癌按大小分為＜5 cm和≥5 cm。胃癌組織學(xué)類型按Lauren 類型分為腸型和彌漫型；癌細(xì)胞分化為高、中、低，胃癌的臨床分期根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）的TNM分期為Ⅰ～Ⅳ期。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)：胃癌組織和正常胃組織固定脫水石蠟包埋后4 μm厚的連續(xù)石蠟切片。采用ABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)的檢測，蘇木精復(fù)染核。免疫球蛋白G（IgG）代替CTGF做一抗，檢測CTGF的特異性。陽性定位于胃癌細(xì)胞胞漿或胞膜，細(xì)顆粒狀。胃癌細(xì)胞CTGF表達(dá)強(qiáng)度判斷：染色陽性細(xì)胞＜5%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度淡黃為1分，黃為2分，棕黃為3分。陽性細(xì)胞數(shù)與染色強(qiáng)度相乘，≤6分低表達(dá)，＞6 分為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中CTGF的表達(dá)檢測及其臨床意義 胃癌組織中免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與對照的正常組織相比，腫瘤組織中的免疫染色強(qiáng)度更強(qiáng)。在73例胃癌標(biāo)本中，CTGF的高表達(dá)39例，低表達(dá)34例，高表達(dá)率53.4%。CTGF在胃癌中高表達(dá)與腫瘤組織分化、Lauren分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性（P＜0.05）。但是其表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期及轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P＞0.05），見表1。

表1 CTGF的表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n=73)

2.2 Kaplan-Meier生存分析 CTGF高表達(dá)的患者共39例，平均生存時間（33±4）個月，五年生存率28.2%（11/39），CTGF低表達(dá)患者34例，平均生存時間（42±4）個月，五年生存率52.9%（18/34）。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.035）。

3 討論

CTGF是一個富含半胱氨酸的蛋白，屬于CCN蛋白家族。雖然CTGF的特異性的受體未被證實(shí)，有報道[4]CTGF參與了多個生長因子信號通路，包括轉(zhuǎn)化生長因子β（TGFβ）、成骨因子（BMP）及分泌性糖蛋白（wnt）。CTGF也可以與細(xì)胞表面的整合素相結(jié)合。其參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、遷移、血管形成及轉(zhuǎn)移。越來越多的證據(jù)顯示CTGF在腫瘤形成中發(fā)揮重要的作用。在乳腺癌及食管癌中均發(fā)現(xiàn)其表達(dá)增高，相反的，在結(jié)腸癌中其表達(dá)下降，并且在此腫 瘤細(xì)胞中，通過表達(dá)CTGF可抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。這種在不同的腫瘤中CTGF表達(dá)的差異性可能是由于CTGF表達(dá)調(diào)控是細(xì)胞類型特異性的并且在不同的腫瘤環(huán)境中CTGF有不同的功能。

本研究中結(jié)果顯示，與正常的胃組織相比，胃癌組織CTGF的表達(dá)水平明顯增加，提示CTGF的高表達(dá)與胃癌中的惡性表型相關(guān)。進(jìn)一步的分析顯示高表達(dá)的CTGF與腫瘤組織的分化、Lauren分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，提示其可能參與了的胃癌的分化過程及轉(zhuǎn)移。生存分析顯示，CTGF高表達(dá)組與低表達(dá)組的生存率之間有明顯差異性。CTGF的高表達(dá)與生存率呈負(fù)相關(guān)。但是在結(jié)腸癌中，有結(jié)果顯示在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或Ⅲ/Ⅳ腫瘤患者標(biāo)本中，其表達(dá)下降；高表達(dá)的CTGF的患者比低表達(dá)的患者5年生存率要高，提示CTGF的表達(dá)與生存率呈正相關(guān)。進(jìn)一步說明了CTGF在不同腫瘤環(huán)境中的功能的差異。

綜上所述，CTGF在胃癌組織表達(dá)升高并且與患者的不良預(yù)后相關(guān)。但是CTGF促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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