周劍宇，王瑞清，王林元，馬曉君，黃銀峰，屈勝勝，朱映黎，周恬恬

·藥理毒理·

脈管復康片抗凝、鎮(zhèn)痛及抗炎作用研究

周劍宇1，王瑞清3，王林元2，馬曉君3，黃銀峰2，屈勝勝2，朱映黎2，周恬恬2

目的：觀察脈管復康片抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。方法：分別采用抗凝血實驗、醋酸扭體實驗、二甲苯致小鼠耳腫脹實驗，觀察脈管復康片的活血，鎮(zhèn)痛以及抗炎作用。結果：2g/kg脈管復康片的凝血時間明顯延長，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；1g/kg與0.5g/kg脈管復康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復康片小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。結論：脈管復康片具有抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。

脈管復康片；脈管炎；抗凝；鎮(zhèn)痛；抗炎

血栓閉塞性脈管炎及深部靜脈血栓形成屬于中醫(yī)“脈痹”、“脫疽”范疇，其病機特點是在臟腑功能失調的基礎上感受寒濕或濕熱蘊結至痹阻脈絡，氣血不暢，陽氣不能到達肢端而致壞疽。中醫(yī)目前治療該病以活血祛瘀中藥為主[1]。脈管復康片是由乳香、沒藥、郁金、丹參、雞血藤等中藥制備而成，功效活血化瘀，通經(jīng)活絡，止痛生肌，臨床用于瘀血阻滯，血脈不暢引起的脈管炎、硬皮病、動脈硬化性下肢血管閉塞癥[2～4]。本研究旨在通過抗凝、鎮(zhèn)痛、抗炎實驗研究脈管復康片活血化瘀、通經(jīng)活絡、止痛生肌的功效。

1 材料

1.1 實驗動物

ICR小鼠，雄性，18-22g，由斯貝福（北京）實驗動物科學技術有限公司提供，合格證號：SCXK（京）2011-0004。

1.2 受試藥

脈管復康片：由天津同仁堂集團股份有限公司提供，批號C90031，生產(chǎn)日期2013020。

阿司匹林片：拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國藥準字J20080078，批號BJ04335，有效期至2016.7.10，有效期60個月。

1.3 試劑

冰醋酸，分析純（500mL/瓶），北京化工廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號20130108。

1.4 儀器用品

計數(shù)器；計時器；電子天平；7mm打孔器；微量移液器；1mL注射器；載玻片；4號注射針頭。

2 方法

2.1 抗凝實驗

取ICR小鼠，按隨機數(shù)表方法將動物分為5組，分別為溶液對照組，阿司匹林組20mg/kg，脈管復康片2g成藥/kg，脈管復康片1g成藥/kg，脈管復康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥5天，于第5天給藥60min后，用毛細管眼眶取血，滴于載玻片上，血滴直徑約0.5mm，立即用秒表記時，每隔10s用清潔的4號注射針頭自血滴邊緣向里輕輕撥動，觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止即為凝血時間。記錄凝血時間[5]。

2.2 鎮(zhèn)痛實驗

取ICR小鼠，按隨機數(shù)表方法將動物分為5組，分別為溶液對照組，阿司匹林組200mg/kg，脈管復康片2g成藥/kg，脈管復康片1g成藥/kg，脈管復康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥3天，于第3天給藥90min后，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.1mL/10g，i.p.，醋酸溶液臨用前配制），立即將小鼠放入觀察箱中觀察。觀察標準：腹部內凹，伸展后肢，臀部抬高計算為一次數(shù)。記錄小鼠15min內的扭體次數(shù)[5,6]。

2.3 抗炎實驗

取ICR小鼠，按隨機數(shù)表方法將動物分為5組，分別為溶液對照組，阿司匹林組200mg/kg，脈管復康片2g成藥/kg，脈管復康片1g成藥/kg，脈管復康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥7天，于第7天給藥60min后，將二甲苯滴于小鼠右耳正反面，0.02mL/只，20min后將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用7mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片，電子天平稱重，以左右耳片重量之差為小鼠耳腫脹度（mg），表示炎癥反應強度，并計算腫脹抑制率[5]。

耳腫脹度(mg) = 右耳重量－左耳重量

腫脹抑制率(%) = (溶液對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度) / 溶液對照組平均腫脹度×100%。

3 數(shù)據(jù)分析

4 結果

4.1 脈管復康片對小鼠凝血時間的影響

與溶液對照組比較阿司匹林組的凝血時間明顯延長，差異顯著（P＜0.05）； 2g/kg脈管復康片的凝血時間明顯延長，差異顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 脈管復康片對小鼠凝血時間的影響（n=10）

4.2 脈管復康片對小鼠醋酸致痛模型扭體次數(shù)的影響

與模型組比較阿司匹林組的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；2g/kg脈管復康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；1g/kg脈管復康片與0.5g/kg脈管復康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異顯著（P＜0.05）。見表2。

表2 脈管復康片對小鼠醋酸致痛模型扭體次數(shù)的影響（n=15）

4.3 脈管復康片對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與溶液對照組比較阿司匹林組小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復康片小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。見表3。

表3 脈管復康片對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（n=12）

5 討論與分析

血栓閉塞性脈管炎與血管內皮損傷、血流動力學改變及血液凝固性增高等因素密切相關，這些因素導致微循環(huán)障礙及組織的缺血、缺氧而發(fā)病。疼痛是該病最突出的癥狀，開始時疼痛源自動脈痙攣，常因血管壁與周圍組織中的末梢感受器受刺激引起。當動脈內膜發(fā)生炎癥并因血栓引起動脈閉塞后，即可產(chǎn)生缺血性疼痛。血栓閉塞性脈管炎受損血管呈一種非動脈粥樣硬化、非化膿性炎癥狀態(tài)。研究顯示[7]血栓閉塞性脈管炎患者內皮依賴性血管舒張功能減弱，炎性介質水平明顯升高，在疾病急性期，血管損傷以血栓形成和炎性反應為主。Halacheva K[8]等研究證實血栓性脈管炎患者血管壁中白細胞、單核巨噬細胞浸潤明顯，內皮細胞表達細胞間粘附分子-1、血管細胞粘附分子-1和E選擇素明顯升高，TNF-α在單核細胞和內皮細胞頂部呈陽性。

脈管復康片組方由丹參、雞血藤、郁金、乳香、沒藥五味中藥組成。本藥組方中丹參活血祛瘀、涼血消癰，既針對血瘀的病因，又針對脈管炎易引起感染而涼血消癰以抗炎；雞血藤行血補血、舒筋活絡；郁金活血、止痛、行氣既針對病因又針對疼痛癥狀；乳香、沒藥消腫生肌、活血止痛，起到對證及促進肌肉生長作用。全方共奏活血化瘀，痛經(jīng)活絡，止痛生肌之效。有研究報道[9,10]丹參具有降低血小板聚集，抗凝血、抑制纖維細胞增殖的作用，丹參還可通過抑制細胞對IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥介質的釋放環(huán)節(jié)使機體產(chǎn)生明顯抗炎作用。Li等[11]研究9種藤本植物的抗炎作用時發(fā)現(xiàn)，雞血藤乙醇提取物（除去多酚類化合物）對除COX-2以外的與抗炎作用有關的酶均具有抑制作用，表明雞血藤具有一定的抗炎作用。有研究[12,13]表明郁金提取物具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛機制可能與降低炎癥細胞因子的表達，參與抑制炎癥反應有關。鄭杭生等[14]研究表明乳香、沒藥提取物中揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛作用，醇提部分則可以明顯增強揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛效果。陳婷等[15]實驗證實乳香和沒藥配伍可增強抗炎效應。

凝血時間主要反映凝血因子被激活至纖維蛋白形成所需的時間?？鼓獙嶒灲Y果顯示脈管復康片可以延長小鼠凝血時間的作用，說明脈管復康片可影響小鼠內源性凝血途徑產(chǎn)生抗凝作用，具有活血化瘀功效。腹腔注射醋酸可刺激小鼠腹膜引起持久的疼痛反應，致使小鼠出現(xiàn)“扭體反應”，醋酸扭體實驗結果表明脈管復康片可減少小鼠扭體次數(shù)，具有明顯的外周鎮(zhèn)痛作用。二甲苯涂抹于小鼠耳廓兩面后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛細血管充血，通透性增加，滲出增多，發(fā)生水腫，表現(xiàn)出紅、腫、熱、痛等炎性癥狀，二甲苯致小鼠耳腫脹實驗結果表明脈管復康片可降低鼠耳腫脹度，具有明顯的抗炎作用。本研究顯示脈管復康片具有抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用，其作用機制有待進一步研究。

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（責任編輯：陳思敏）

Study on the anticoagulant, analgesic and anti-inflammatory effects of Maiguan Fukang Tablets

ZHOU Jian-yu1, WANG Rui-qing3, WANG Lin-yuan2, MA Xiao-jun3, HUANG Yin-feng2, QU Sheng-sheng2, ZHU Ying-li2, ZHOU Tian-tian2//(1. Chengde Medical University,Chengde 067000,Beijing 100029,China; 2.China Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029;3. Tianjin Tongrentang Group by Share Ltd,Tianjin,300385.)

Objective:To study the anticoagulant, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets on mice.Method:The anti- coagulation experiments, acetic acid writhing test, xylene-induced mouse ear swelling experiment were used to observe the blood circulation-promoting, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets.Result:Compared with the control group, the coagulation time of 2g/kg Maiguan Fukang Tablets(P ＜0.05) group was prolonged obviously. The mice writhing times within 15min of 2g/kg(P ＜0.01),1g/ kg(P ＜0.05) and 0.5g/kg (P ＜0.05)Maiguan Fukang Tablets group were reduced obviously. The ear swelling of mice in 2g/kg Maiguan Fukang Tablets group (P＜0.05) were decreased obviously.Conclusion:Maiguan Fukang Tablets has anticoagulant, analgesic, anti-infammatory effects.

Maiguan Fukang Tablets; vasculitis; anticoagulation; analgesia; anti-Infammation

R 285

A

1674-926X(2014)03-008-03

1.承德醫(yī)學院，河北 承德 067000 2.北京中醫(yī)藥大學，北京 100029 3.天津同仁堂集團股份有限公司，天津 300385

周劍宇，男，助教，在讀博士，研究方向：中藥藥理 Tel:18810951597 Email:zhoujianyu1@163.com

王林元，男，副教授，研究方向：中藥產(chǎn)業(yè)化應用Tel:64287912 Email:wanglinyuan110@vip.163.com

2013-09-09