覃超林

廣西壯族自治區(qū)融水縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西融水 545300

融水縣家畜布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查

覃超林

廣西壯族自治區(qū)融水縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西融水 545300

為進(jìn)一步了解融水縣家畜布魯氏菌病防控成果，全面了解融水縣家畜布魯氏菌病的流行病學(xué)情況，2013年，筆者采用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)法對(duì)轄區(qū)內(nèi)20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的豬100份、牛100份、羊75份血清進(jìn)行了檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采用虎紅平板凝集試驗(yàn)法檢測的275份血清檢出15份陽性（其中豬5份、牛5份、羊5份，且均來自同一個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)），其余260份血清均為陰性；但采用試管凝集試驗(yàn)法對(duì)虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性的20份樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性。

布魯氏菌??；家畜；血清流行病學(xué)；調(diào)查；融水縣

布魯氏菌病（也稱布氏桿菌病，以下簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊愿腥炯倚鬄橹鞯娜双F共患傳染病。家畜中以牛、羊、豬最常發(fā)生，感染家畜以流產(chǎn)、不孕、睪丸炎等為特征。融水縣自1971年發(fā)現(xiàn)豬布病后，在各級(jí)政府的領(lǐng)導(dǎo)和各級(jí)業(yè)務(wù)部門的支持協(xié)助下，嚴(yán)格按照布病防制程序，采取了“檢、宰、切、健”四大措施，經(jīng)過多年的努力，1992年11月順利通過自治區(qū)布病考核驗(yàn)收小組的考核驗(yàn)收，達(dá)到穩(wěn)定控制縣的標(biāo)準(zhǔn)。

控制家畜布病是一項(xiàng)關(guān)系到人民群眾身體健康和畜牧業(yè)發(fā)展的艱巨而長期的任務(wù)。為進(jìn)一步了解融水縣家畜布病防控成果，全面了解融水縣家畜布病的流行病學(xué)情況，2013年1～12月，筆者對(duì)轄區(qū)內(nèi)20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的豬100份、牛100份、羊75份血清進(jìn)行了檢測?，F(xiàn)將調(diào)查情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1）被檢血清。20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽取未免疫布病疫苗的豬5份、黃/水牛5份、羊5份血清，全縣共采集豬100份、黃/水牛100份、羊75份血清（部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)無存欄羊，未采樣），并保存于-20℃待檢。

2）診斷液。布魯氏菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清，布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原，及布魯氏菌病試管凝集抗原均購自青島易邦生物工程有限公司。

1.2 檢測方法及判定標(biāo)準(zhǔn)

1）虎紅平板凝集試驗(yàn)。先取陽性血清、陰性血清和稀釋液各30 μL分別置于潔凈玻璃片上，各加布病虎紅平板凝集抗原懸液30 μL，攪拌混勻?yàn)橹睆酱笮? cm，然后搖動(dòng)1～2 min，于4 min內(nèi)在黑色背景下觀察結(jié)果。當(dāng)陰性血清對(duì)照不凝集（-），陽性血清對(duì)照出現(xiàn)凝集（+）時(shí)，陰陽性血清對(duì)照試驗(yàn)成立，方可對(duì)被檢血清進(jìn)行判定。被檢血清的檢測與陰陽性血清檢測方法相同，重復(fù)上述操作并觀察記錄結(jié)果。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)凝集反應(yīng)強(qiáng)度判讀?！?+++”，凝集塊呈菌叢狀，凝塊間液體明顯清亮；“+++”，凝集反應(yīng)較強(qiáng)；“++”，形成較明顯卷邊，凝集塊間液體稍清亮；“+”，稍有凝集，稍有卷邊形成，凝集物間液體呈紅色；“-”，無凝集，呈均勻粉紅色。以4 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象判為陽性（+）；無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。對(duì)出現(xiàn)陽性反應(yīng)的需作試管凝集試驗(yàn)檢測。

2）試管凝集試驗(yàn)?？乖?:20稀釋，被檢豬和羊的血清分別作1:25、1:50、1:100、1:200稀釋，被檢牛血清分別作1:50、1:100、1:200和1:400稀釋，同時(shí)設(shè)陰、陽性血清對(duì)照（陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同，陽性血清需稀釋到原有滴度，加抗原的方法與受檢血清相同）。將0.5 mL稀釋后的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，置36～37℃作用24 h，取出觀察并記錄結(jié)果。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：按各試管上層液體清亮度判讀?！?+++”，菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；“+++”，菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；“++”，菌體凝集顯著，液體50%清亮；“+”，凝集物有沉淀，液體25%清亮；“-”，凝集物無沉淀，液體均勻渾濁。以產(chǎn)生50%凝集（++）的血清最大稀釋度為受檢血清的效價(jià)。牛待檢血清的凝集價(jià)在1:100（++）以上者為陽性，1:50（++）為可疑；羊、豬待檢血清的凝集價(jià)在1:50（++）以上為陽性，1:25（++）為可疑。對(duì)試驗(yàn)結(jié)果為“可疑”的，應(yīng)在3～4周后重新采血檢驗(yàn)，以進(jìn)一步確定檢測結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

1）采用虎紅平板凝集試驗(yàn)法對(duì)所有血清進(jìn)行初篩，發(fā)現(xiàn)275份血清檢出15份陽性（其中豬5份、牛5份、羊5份，且均來自同一個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)），其余260份血清均為陰性。

2）采用試管凝集試驗(yàn)法對(duì)虎紅平板凝集試驗(yàn)陽性的20份樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果均為陰性。

3討 論

1）本次布病血清學(xué)調(diào)查中，采用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)法對(duì)融水縣20個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的豬100份、牛100份、羊75份血清進(jìn)行抗體檢測，檢出陽性率為0%。本次所調(diào)查的家畜均未免疫過布病疫苗，檢測結(jié)果表明所檢測的豬、牛、羊不存在自然感染布病野毒情況，說明融水縣在過去這些年家畜布病的防控工作還是扎實(shí)、穩(wěn)定、有保障的。

2）而對(duì)于布病虎紅平板凝集試驗(yàn)中檢出陽性的樣品為何出現(xiàn)在同一個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的原因，筆者經(jīng)過分析，懷疑采樣材料有問題。經(jīng)證實(shí)，是因該鄉(xiāng)鎮(zhèn)在采樣時(shí)由于一次性PE注射器不足，臨時(shí)用了該鄉(xiāng)衛(wèi)生院的十幾支真空采血管，且這些真空采血管內(nèi)含帶肝素鈉。而抗凝劑可造成布病虎紅平板凝集試驗(yàn)的假陽性結(jié)果[1]。

3）布病的傳播流行影響著畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和人類的身體健康，布病預(yù)防和控制工作任重而道遠(yuǎn)。在融水縣的這次調(diào)查中也發(fā)現(xiàn)了一些問題，如：多數(shù)養(yǎng)戶文化水平低，對(duì)布病了解甚少，不了解布病的傳播途徑和相關(guān)防護(hù)知識(shí)。因此，加強(qiáng)布病防治宣傳、增強(qiáng)自我保護(hù)意識(shí)、積極采取防控措施，將是融水縣未來布病防控工作的重點(diǎn)之一。

融水縣為布病的老疫區(qū)，雖然多年前已經(jīng)通過了自治區(qū)家畜布病控制工作的驗(yàn)收，但我們?nèi)圆荒艿粢暂p心，還應(yīng)該嚴(yán)格實(shí)行檢疫制度，對(duì)新引進(jìn)種用家畜進(jìn)行檢疫，以免造成病原從外地流入?！俺Ｒ?guī)監(jiān)測+種畜場重點(diǎn)監(jiān)測、定時(shí)+定點(diǎn)監(jiān)測”，可以做到早發(fā)現(xiàn)、早處置，全面掌握疫情動(dòng)態(tài)，為布病防控提供依據(jù)，把布病的發(fā)生和傳播控制在源頭。

[1]蒙文娟.抗凝劑對(duì)布氏桿菌病檢測結(jié)果的影響[J].養(yǎng)殖與飼料，2014（7）：10-11.

2014-05-28

覃超林，男，1984年生。