王玉瑾宋 輝朱 濤

1.江蘇省新沂市畜牧獸醫(yī)站，江蘇新沂 221400；2.江蘇省新沂踢球山種畜場，江蘇新沂 221418

1例規(guī)?；N雞場雞呼腸孤病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒混合感染的診斷

王玉瑾1宋 輝2朱 濤1

1.江蘇省新沂市畜牧獸醫(yī)站，江蘇新沂 221400；2.江蘇省新沂踢球山種畜場，江蘇新沂 221418

目前，規(guī)模化養(yǎng)殖場盡管非常重視病毒性疾病的免疫預(yù)防，但馬立克氏病、禽白血病、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病、呼腸孤病毒病等依然存在，嚴(yán)重影響著機體免疫系統(tǒng)作用的發(fā)揮，是造成多種疾病繼發(fā)感染、種雞生產(chǎn)性能下降、經(jīng)濟效益銳減的重要因素。2013年6月，江蘇某種雞場出現(xiàn)雞群發(fā)育不良、羽毛粗亂、下痢等臨床癥狀，經(jīng)實驗室檢查診斷為禽呼腸孤病毒和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒混合感染所致。

1 發(fā)病情況

該規(guī)?；N雞場于2012年11月份分別從北京及聊城引進12 040套、12 950套祖代種雞，8周齡時出現(xiàn)發(fā)育不良、跛行、精神沉郁等臨床癥狀，雞群的免疫程序見表1。

2 臨床癥狀

雞群整體表現(xiàn)為發(fā)育不良，精神沉郁，食欲減退或廢絕，羽毛粗亂，漸進性消瘦。發(fā)病雞下痢，糞便呈水樣；有的雞跛行；部分雞踝關(guān)節(jié)不能活動；極個別呈“企鵝”樣；個別雞腿部鱗片脫落。雞群增重情況很不理想，體重只有430～450 g，而8周齡雞的正常體重為560～580 g。平均每天死亡40～60只，采取多種措施均未見好轉(zhuǎn)。

3 剖檢病變

對病死雞進行剖檢發(fā)現(xiàn)，法氏囊嚴(yán)重萎縮，重量減輕；胸腺充血、出血、萎縮、水腫；肝、脾、腎、心、胸腺、法氏囊、胰腺等有灰白色點狀結(jié)節(jié)；腺胃病變非常明顯，大部分腺胃腫脹成球狀，剖開后腺胃乳頭呈針尖狀出血（非彌漫性出血），水腫；其他臟器眼觀無異常。

4 實驗室檢查

4.1 抗體水平

在發(fā)病雞群中隨機采集發(fā)病雞的血清10份，通過ELISA方法測定雞傳染性貧血病毒（CIAV）、呼腸孤病毒（REO）、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（REV）的抗體水平（試劑盒均購自IDEXX公司）。所監(jiān)測的抗體水平見表2。

表1 1～60日齡種雞的免疫程序

通過表2可發(fā)現(xiàn)，在發(fā)病雞群未免疫REO、REV的情況下，雞群中存在REO、REV抗體，且抗體陽性率分別達100%和80%，表明雞群中可能存在REO、REV感染；而在該雞群尚未進行針對CIAV的任何免疫的情況下，CIAV抗體陽性率為0%，表明雞群中不存在CIAV感染。

表2 種雞場不同疫病的抗體效價

4.2 病原的篩查

采集患病雞的肝臟、脾臟、肺臟、氣管、腎臟、腦等組織，加入PBS溶液，充分研磨制成1:5的組織勻漿液。反復(fù)凍融3次，8 000 r/min離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的滅菌離心管。按照 Trizol Reagent說明書和酚/氯仿/異戊醇法提取RNA和DNA，用 PCR或 RT-PCR法檢測禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）、CIAV、REO、REV、傳染性支氣管炎病毒（IBV）、雞白血病病毒（ALV）等。病原篩查的結(jié)果見表3。

表3 發(fā)病雞群病原篩查結(jié)果

通過應(yīng)用PCR或RT-PCR方法對病原進行篩查，AIV、NDV、CIAV、ALV、IBV全部陰性，表明患雞群并沒有上述病毒的感染；所檢的7份樣品中REO、REV幾乎全部呈陽性，表明患病雞群中存在REO、REV感染。

5診 斷

結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變和實驗室檢查結(jié)果，可診斷該雞群存在禽呼腸孤病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒的混合感染。

6討 論

1）網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒引起的幾種禽類的一群病理綜合征，如矮小綜合征、淋巴組織及其他組織形成的慢性腫瘤、急性網(wǎng)狀細(xì)胞腫瘤等。REV可感染火雞、鴨、雞和其它禽類，且呈世界分布，但并非無處不在。

REV的傳播方式呈現(xiàn)多樣性，包括水平傳播、垂直傳播、通過被污染的疫苗等生物材料傳播等。水平傳播受宿主種類和病毒毒株的影響，通過與感染的雞、火雞和鴨的直接接觸而傳播。有持續(xù)病毒血癥的雞、火雞、鴨能將感染性病毒垂直傳播給后代，但與禽白血病病毒相比，其傳染率比較低。

盡管REV可造成巨大的經(jīng)濟損失，但目前尚無商品化的疫苗用于預(yù)防。正在研究的候選疫苗主要有表達REV的基因的重組禽痘病毒和轉(zhuǎn)染的QT35鵪鶉細(xì)胞系產(chǎn)生的空REV顆粒，研究表明雞免疫接種后能對REV感染起到一定的保護作用。目前對REV的防控主要是通過嚴(yán)格的生物安全手段在禽類生物安全保障和SPF動物中實現(xiàn)的。商業(yè)性養(yǎng)禽業(yè)可借鑒控制禽白血病的方法來控制REV，即通過淘汰攜帶病毒的種雞的方法來消除垂直傳播，并且在能夠消除水平傳播的隔離條件下飼養(yǎng)子代。

2）禽呼腸孤病毒在商品禽中很常見，且大部分毒株無致病性，但從病雞的各種組織和器官中可分離到禽呼腸孤病毒，這些疾病包括病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾病、腸道疾病、免疫抑制性疾病、吸收不良綜合征等。禽呼腸孤病毒引起的疾病很大程度上取決于宿主年齡、免疫狀態(tài)、病毒的致病性以及感染途徑等；當(dāng)呼腸孤病毒與其他傳染性病原體相互作用時，可使呼腸孤病毒引起的疾病和嚴(yán)重程度有所不同。禽呼腸孤病毒可垂直和水平傳播，常通過機械方式傳播，而且對外界環(huán)境的抵抗力較強，因此，在現(xiàn)代高密度的飼養(yǎng)條件下，要消除病毒感染似乎是不可能的。

良好的管理制度和生物安全措施以及免疫預(yù)防是控制禽呼腸孤病毒感染的主要方法。目前市場上已有商品化的呼腸孤病毒疫苗，如S1133株、2177株等。值得注意的是S1133株與馬立克氏病疫苗同時免疫1日齡雛雞時，會干擾馬立克氏病疫苗的免疫效果；而無致病性的2177株可避免干擾馬立克氏病疫苗的效果。

種雞群在開產(chǎn)前使用活疫苗可以為1日齡雛雞提供母源抗體的保護，降低垂直傳播的可能性。當(dāng)野毒株與商品疫苗的血清型明顯不同時，建議使用自家苗。

蛋雞生產(chǎn)中常用的免疫方法及注意事項

蛋雞生產(chǎn)中常用的免疫方法有滴鼻、點眼、飲水、氣霧、注射、刺種等。弱毒苗主要用滴鼻、點眼、氣霧、飲水等免疫方法；滅活苗主要采取注射免疫，生產(chǎn)中常用胸部皮下免疫。下面詳細(xì)介紹其免疫方法及注意事項。

1 氣霧免疫

1）氣霧免疫遵循的原則是利用氣壓使稀釋的疫苗霧化，并均勻地懸浮于空氣中，隨呼吸進入雞體呼吸道。

2）氣霧免疫時環(huán)境溫度應(yīng)控制在18～24℃，相對濕度在70%左右，免疫前清水降塵。

3）氣霧免疫前停止使用藥物，氣霧免疫與其他免疫間隔應(yīng)不少于7 d，以免產(chǎn)生免疫干擾；免疫前后7 d不得使用抗病毒藥物，免疫前1 d不得消毒。

4）氣霧免疫速度一般為200 mL的疫苗要在1 min內(nèi)噴完。

5）疫苗稀釋用塑料瓶、玻璃瓶等非金屬器皿作容器，稀釋液用量以1 000只雞為單位，稀釋后的疫苗在1 h內(nèi)用完。

6）氣霧免疫方法：氣霧免疫前應(yīng)加大通風(fēng)量并保持3～5 min，以降低雞舍粉塵含量、保證舍內(nèi)空氣清新，之后要關(guān)閉舍內(nèi)門窗和通風(fēng)設(shè)備，氣霧后15 min再打開所有門窗和通風(fēng)換氣設(shè)備。

7）氣霧免疫優(yōu)點是省時省力，適用于密集飼養(yǎng)的雞群；對呼吸道有親嗜性的疫苗特別有效。缺點是對雞群應(yīng)激大，可加重慢性呼吸道疾病、大腸桿菌性氣囊炎的發(fā)生。

2 點眼和滴鼻免疫

點眼免疫是將要接種雞的頭部固定在水平狀態(tài)，用滴嘴向其眼內(nèi)滴1滴疫苗，當(dāng)疫苗擴散后放開接種雞。滴鼻免疫是將雞嘴緊閉，蓋住一側(cè)鼻孔，向另一側(cè)鼻孔滴入疫苗液，吸入后放開接種雞。滴鼻時遇有雞的鼻孔堵塞、疫苗不易吸進鼻孔內(nèi)時，可換滴另一側(cè)鼻孔。

3 注射免疫

油苗一般采用胸部皮下注射，注射時抓雞人員一只手抓住雞翅、另一只手抓住雙腿，將雞固定，胸部向上，平行抓好；注射人員用手將胸部羽毛扒開，針頭呈15°將疫苗注入，同時用拇指按壓注入部位，使疫苗擴散，防止漏出。

4 注意事項

疫苗接種前應(yīng)預(yù)先檢查雞群的健康狀況，對正在發(fā)病的雞群不宜接種疫苗（緊急預(yù)防接種除外），在惡劣氣候條件下也不應(yīng)接種疫苗。使用疫苗時，要嚴(yán)格按照說明書及瓶簽上的各項規(guī)定進行操作，不得任意改變；同時，應(yīng)進行詳細(xì)登記，注明疫苗名稱、批號、使用方法和劑量等。

來源：河北畜牧服務(wù)網(wǎng)

2014-06-15

王玉瑾，1968年生，本科，高級獸醫(yī)師。