孔玉蓮 李肇彥 孔金燕 楊會(huì)燕 劉 莉 楊宏煜

河南省鄧州市人民醫(yī)院，河南鄧州 474150

近幾年來(lái)，結(jié)腸癌的發(fā)病率在逐漸增加，并且發(fā)病年齡也逐漸趨向老齡化，發(fā)病多在60～70歲，男性多于女性。結(jié)腸癌的治療一直是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的臨床問(wèn)題，據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究[1]，手術(shù)后進(jìn)行化療能夠延長(zhǎng)患者的生存期，提高生活質(zhì)量。為探討分析中晚期結(jié)直腸癌化療中ATP-TCA技術(shù)的應(yīng)用效果,該研究選取該院自2009年3月—2013年3月這4年以來(lái)收治的100例中晚期結(jié)直腸癌患者標(biāo)本進(jìn)行ATP-TCA技術(shù)體外檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)患者臨床化療，取得了顯著效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的100例中晚期結(jié)直腸癌患者標(biāo)本，所有患者均經(jīng)過(guò)電子結(jié)腸鏡以及臨床病理診斷后進(jìn)行手術(shù)治療。其中男性患者有54例，女性患者有46例，年齡范圍為63～79歲，平均年齡為(71±8)歲。其中高分化腺癌有17例，中分化腺癌有18例，低分化腺癌有37例，未分化癌15例，管狀腺癌有8例，粘液腺癌有5例。所有患者沒(méi)有嚴(yán)重的心、腎以及肝功能不全現(xiàn)象，沒(méi)有腸梗阻，預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月，血小板大于100×109/L,白細(xì)胞大于4×109/L。

1.2 抗癌藥物

所有抗癌藥物均在該院臨床使用，主要包括氟尿嘧啶(5-FU)、奧沙利鉑(L-OHP)、絲裂霉素(MMC)以及伊立替康(SN-38)等，其中奧沙利鉑主要采用糖水稀釋，其余藥物采用生理鹽水溶解稀釋，在-20℃的溫度下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法

所有患者取新鮮腫瘤組織之后侵入到裝有培養(yǎng)液的無(wú)菌液瓶中，進(jìn)行侵泡15 min，然后剪成大小為0.6～1 mm的3個(gè)碎塊，將腫瘤組織轉(zhuǎn)移到含有組織消化液的離心管中，放置37℃的孵育箱中進(jìn)行孵育2～3 h，每隔15～30 min震蕩1次，充分消化后，采用160目篩網(wǎng)濾得單細(xì)胞懸液，然后加入25 mL培養(yǎng)基，混勻，400 g離心10 min，棄上清。若有明顯紅細(xì)胞沉淀，則需要進(jìn)行去除紅細(xì)胞的操作，最后將細(xì)胞濃度調(diào)整為3×109/mL-4×109/m L.

將培養(yǎng)板置于37℃、5%的二氧化碳飽和溫度的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)5 d，然后每孔加入50 μL的ATP提取液，吸出50 μL的上清液于檢測(cè)板中，每孔加入50 μL的TAP熒光素-熒光酶，震蕩10 s，采用熒光測(cè)定儀自帶分析軟件計(jì)算各個(gè)測(cè)試濃度抑制率以及各種藥物的IC50(抑制50%腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)藥物濃度)和IC90(抑制90%腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)藥物濃度)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其中檢測(cè)后與標(biāo)準(zhǔn)樣品采用t檢驗(yàn)，臨床治療效果采用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05，表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)各種抗癌藥物的敏感度

100例結(jié)腸癌組織標(biāo)本中有2例因?yàn)榧?xì)菌污染而放棄，實(shí)驗(yàn)的可評(píng)價(jià)率為98%。5-FU、L-OHP、MMC以及SN-38體外抗敏度之間沒(méi)有明顯的差異，不具有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，5-FU+ L-OHP、5-FU+MMC以及5-FU+SN-38體外抗敏度之間也沒(méi)有明顯的差異，不具有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，4組單藥與3組聯(lián)合藥物在體外抗敏度上有著明顯的差異，具有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 ATP-TCA檢測(cè)結(jié)果與近期療效之間的關(guān)系

根據(jù)ATP-TCA檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)化療，結(jié)果表明98例結(jié)腸癌患者中有效例數(shù)達(dá)到59例(60.20%)，ATP-TCA總預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率為64.29%(63/98)，陽(yáng)性符合率為、54.08%(53/98)。

3 討論

結(jié)腸癌作為常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其治療一直以來(lái)是臨床中具有挑戰(zhàn)性的問(wèn)題。目前，隨著ATP生物熒光法的發(fā)展，在腫瘤化療藥物敏感性檢測(cè)中有著重要作用，其檢測(cè)原理為當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，ATP合成下降，細(xì)胞死亡時(shí)，ATP迅速水解消失，然后通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)源性ATP的含量，就能夠反映出細(xì)胞活性以及細(xì)胞數(shù)量[2]。國(guó)外學(xué)者已經(jīng)對(duì)ATP-TCA檢測(cè)法進(jìn)行了多方面研究，并且在一定程度上也提高了臨床治療的可行性[3]。據(jù)我國(guó)文獻(xiàn)報(bào)道[4]，由于腫瘤的異質(zhì)性應(yīng)該對(duì)結(jié)腸癌患者進(jìn)行ATP腫瘤化療藥物的敏感性分析實(shí)驗(yàn)，有利于指導(dǎo)患者后期化療。

表1 98例結(jié)腸癌患者體外抗癌藥物敏感度比較

在該研究中，所使用的抗癌藥物主要有氟尿嘧啶(5-FU)、奧沙利鉑(L-OHP)、絲裂霉素(MMC)以及伊立替康(SN-38)，通過(guò)藥物敏感度實(shí)驗(yàn)表明，結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)3組聯(lián)合藥物的敏感度并沒(méi)有明顯的差異，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3組聯(lián)合藥物的敏感度與4組單藥物有著明顯的差異，并且，使用5-FU+L-OHP藥物的敏感度最高，達(dá)到55.10%，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相一致[5-6]。由于腫瘤的異質(zhì)性存在不同，就致使不同腫瘤患者對(duì)于同一化療藥物的敏感性就不同，因此，必須建立個(gè)性化治療方案，以免出現(xiàn)藥物導(dǎo)致的不良反應(yīng)現(xiàn)象[7]。應(yīng)采用ATP-TCA檢測(cè)法對(duì)常用化療藥物的敏感性以及耐藥性進(jìn)行提前檢測(cè)，從而為臨床化療提供一定的依據(jù)。

綜上所述，采用ATP生物熒光體外藥敏檢測(cè)法能夠有效的檢測(cè)化療藥物的敏感性，指導(dǎo)中晚期結(jié)腸癌患者化療有著重要價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。

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