謝少林，房偉平、2，陳金濤、2，王超、2，鄒記興

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州510642;2.清遠(yuǎn)市北江水產(chǎn)科學(xué)研究所，廣東 清遠(yuǎn)511510)

斑鳠Mystus guttatus 隸屬于鲇形目、鲿科、鳠屬，俗稱魽魚(yú)、芝麻魽、白須鰍、花魽，棲息于江河底層，以小型水生動(dòng)物為食，分布于珠江、元江等水系［1-2］，其肉質(zhì)細(xì)嫩、味鮮美，是珠江“四大名魚(yú)”之一。隨著社會(huì)的發(fā)展和人類活動(dòng)的不斷增加，對(duì)適合野生斑鳠繁衍的自然生態(tài)環(huán)境的破壞日益嚴(yán)重，水體污染、水域減少、過(guò)渡捕撈等，使得野生斑鳠數(shù)量不斷減少，然而市場(chǎng)需求卻在不斷增加，因此，對(duì)其繁殖生物學(xué)方面進(jìn)行研究已迫在眉睫。目前，有關(guān)斑鳠的研究?jī)H見(jiàn)國(guó)內(nèi)有報(bào)道，內(nèi)容主要涉及遺傳多樣性［3-4］、人工養(yǎng)殖與繁育技術(shù)［5-7］、疾病防治［8-9］、營(yíng)養(yǎng)［10-11］等方面。但大規(guī)模的人工育苗始終未完全獲得成功，有關(guān)斑鳠生殖生理及其性腺發(fā)育方面的研究尚屬空白。本研究中，通過(guò)對(duì)人工生態(tài)馴養(yǎng)斑鳠的性腺發(fā)育進(jìn)行研究，以期掌握人工馴養(yǎng)下的野生斑鳠性腺發(fā)育規(guī)律，為進(jìn)行斑鳠的人工繁殖提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用斑鳠于2010年6—8月取自中山市水潤(rùn)漁業(yè)種養(yǎng)有限公司，此批魚(yú)由該公司于2008年初從廣西桂平、廣東韶關(guān)等地引進(jìn)的約4月齡魚(yú)苗養(yǎng)殖而成，試驗(yàn)魚(yú)共計(jì)48 尾，其中雄性28 尾，雌性20 尾。2012年9月—2013年6月補(bǔ)充采集樣品，共采集斑鳠20 尾，其中雌性11 尾，雄性9 尾。

1.2 方法

對(duì)新鮮樣本魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)(精確到0.1 cm)和稱量體質(zhì)量(精確到0.01 g)后，解剖取其性腺并稱重(精確到0.01 g)，計(jì)算性腺成熟系數(shù)(GSI)。性腺經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為10%的中性福爾馬林固定后，按常規(guī)石蠟切片操作步驟進(jìn)行制片，用Leica DM2500 顯微鏡觀察并拍照。性腺分期主要依據(jù)劉筠［12］和樓允東［13］的分期標(biāo)準(zhǔn)。性腺成熟系數(shù)計(jì)算公式［14］為

2 結(jié)果

2.1 卵母細(xì)胞發(fā)育的組織學(xué)觀察

第Ⅰ時(shí)相卵母細(xì)胞 此時(shí)相的卵母細(xì)胞多見(jiàn)于發(fā)育未成熟的卵巢中，處于卵原細(xì)胞階段，其不被濾泡細(xì)胞所包圍，胞質(zhì)少，體積小，細(xì)胞形狀不規(guī)則，多為橢圓形，中央或邊緣有一核仁(圖1 -A)。

第Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞 卵母細(xì)胞停止分裂后，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)開(kāi)始增長(zhǎng)，進(jìn)入其小生長(zhǎng)階段［12］，細(xì)胞形狀基本呈圓形，其細(xì)胞膜外出現(xiàn)單層的濾泡細(xì)胞。胞質(zhì)嗜堿性增強(qiáng)，H.E 染色為藍(lán)色(圖1 -B)。

第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞 由小生長(zhǎng)期進(jìn)入大生長(zhǎng)期，細(xì)胞體積及其核體積進(jìn)一步增大，胞質(zhì)嗜堿性減弱，H.E 染色為淡紫色。細(xì)胞質(zhì)邊緣開(kāi)始出現(xiàn)少量卵黃粒，濾泡膜由第Ⅱ時(shí)相的一層變?yōu)閮蓪樱吘壋霈F(xiàn)少量液泡(圖1 -C)。

第Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞 卵母細(xì)胞體積繼續(xù)增大，卵黃顆粒繼續(xù)增多直至充滿整個(gè)核外空間。卵母細(xì)胞膜外的濾泡細(xì)胞仍為雙層。核仁逐漸溶解在核漿中(圖1 -D、E)。

第Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞 核仁消失，細(xì)胞質(zhì)中充滿粗大的卵黃顆粒，此時(shí)，卵細(xì)胞已生理成熟，與濾泡膜分離并游離于卵巢腔中［15］(圖1 -F)。

2.2 卵巢形態(tài)及發(fā)育分期

雌性斑鳠體長(zhǎng)為(31.50 ±2.35)cm，體質(zhì)量為(1.20 ± 0.38)kg。養(yǎng)殖條件下斑鳠卵巢(圖1-G)發(fā)育良好，呈“V”型，卵巢外由一層卵巢膜包被，成對(duì)位于消化道背上方。在腹腔后端，左右卵巢相連形成一短的輸卵管，經(jīng)泄殖孔開(kāi)口于體外。繁殖期的卵巢GSI 為(1.28 ±0.12)%。將斑鳠的卵巢發(fā)育分為以下6 個(gè)時(shí)期。

第Ⅰ期 卵巢呈線狀，微透明，肉眼觀察不能辨別雌雄。經(jīng)組織切片觀察，卵巢內(nèi)主要為第Ⅰ時(shí)相卵原細(xì)胞。魚(yú)類Ⅰ期卵巢終生只出現(xiàn)一次［12］。

第Ⅱ期 卵巢外部形態(tài)加粗，出現(xiàn)微血管，顏色為淺黃色，肉眼不能分辨卵粒，生殖細(xì)胞以第Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，亦有少量卵原細(xì)胞。

第Ⅲ期 卵巢顏色轉(zhuǎn)為黃白色，外形繼續(xù)加粗，卵巢膜上血管發(fā)達(dá)，出現(xiàn)分枝，卵粒明顯，經(jīng)肉眼可以辨別。經(jīng)組織切片觀察，以第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，同時(shí)有較早期的卵母細(xì)胞。

第Ⅳ期 卵巢為長(zhǎng)桶狀，外形明顯膨大，呈桔黃色，卵粒飽滿，相互黏連。發(fā)育良好的卵巢以第Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞為主，還有少量的第Ⅱ時(shí)相、第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞。發(fā)育不良的卵巢，經(jīng)組織切片觀察，仍有大量的第Ⅱ時(shí)相、第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞。

第Ⅴ期 卵巢顏色加深為深黃色，表面布滿血管，用手指觸摸松軟，切開(kāi)卵巢膜觀察，卵粒為圓形，游離在卵腔中。處于此期的雌魚(yú)，若輕壓其腹部會(huì)有少量卵子流出。此時(shí)期卵巢已達(dá)生理成熟。

第Ⅵ期 由于所采集的樣本有限，未找到第Ⅵ期卵巢。

2.3 精巢形態(tài)及發(fā)育分期

雄性斑鳠體長(zhǎng)為18 ～42 cm，體質(zhì)量為0.5 ～1.2 kg。斑鳠的精巢(圖1 -H)為淡黃色，呈長(zhǎng)條狀帶并有小的細(xì)梳狀凸起，位于鰾和腎臟兩側(cè)，體積較小，由精巢系膜與體壁相連，左右精巢在尾端合并成“Y”型，形成很短的輸精管，通過(guò)泄殖孔與外界相通。繁殖期的精巢GSI 為(0.11 ±0.04)%。從外形上無(wú)法判斷發(fā)育至第幾期。斑鳠的精巢同大多數(shù)硬骨魚(yú)類相似，屬于小葉型結(jié)構(gòu)。依據(jù)斑鳠精巢組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞成分在形態(tài)和數(shù)量上的變化，將斑鳠的精巢發(fā)育分為以下6 個(gè)時(shí)期。

第Ⅰ期 精巢為細(xì)線狀，貼在腹腔壁上，肉眼不能辨別雌雄。此期精巢主要為分布較分散的精原細(xì)胞，呈圓形或卵圓形，體積較大。細(xì)胞間界限不明顯，細(xì)胞核體積大，核膜較清晰，胞質(zhì)較少，偏嗜酸性，染色為淡粉紅色，細(xì)胞膜不清晰(圖1 -I)。

第Ⅱ期 精巢仍為細(xì)線狀，為淺灰色，精小葉無(wú)腔隙，小葉間有結(jié)締組織，精原細(xì)胞的數(shù)量明顯增多。此期精巢主要由精母細(xì)胞組成，包括初級(jí)精母細(xì)胞和次級(jí)精母細(xì)胞。初級(jí)精母細(xì)胞排列緊密，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞質(zhì)和核體積減小。次級(jí)精母細(xì)胞來(lái)源于初級(jí)精母細(xì)胞第一次成熟分裂，細(xì)胞體積明顯變小，嗜堿性增強(qiáng)，較初級(jí)精母細(xì)胞染色深，為藍(lán)紫色［16］(圖1 -J)。

第Ⅲ期 精巢為淡粉紅色，出現(xiàn)細(xì)微細(xì)梳妝凸起，精小葉出現(xiàn)空腔，初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞沿小葉邊緣單層或者多層排列(圖1 -K)。

第Ⅳ期 精巢仍為淡粉紅色，細(xì)梳妝凸起明顯，精小葉由初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子組成(圖1 -L)。

第Ⅴ期 精巢為粉紅色，精小葉腔隙擴(kuò)大，腔隙中充滿了成熟的精子，小葉壁只有少量早期精原細(xì)胞。精子呈顆粒狀，細(xì)胞核著色甚濃，染色為深紫色，顯微鏡下觀察為黑色小點(diǎn)(圖1 -M)。

第Ⅵ期 切片觀察可見(jiàn)腔隙中大部分精子已經(jīng)排出體外，小葉中只有少量殘存的精子。小葉壁有少量精原細(xì)胞和精母細(xì)胞(圖1 -N)。

3 討論

3.1 養(yǎng)殖斑鳠性腺發(fā)育的特點(diǎn)

養(yǎng)殖斑鳠在6—8月時(shí)，雌魚(yú)體色稍呈深褐色，腹部明顯比雄魚(yú)膨大而豐滿，手感松弛柔軟，卵巢輪廓明顯，生殖孔和泌尿孔外突稍展開(kāi)，周圍呈紫紅色，范圍比雄魚(yú)大。雄魚(yú)體色淡白，腹部平扁，但泄殖孔周圍呈微紅色。解剖發(fā)現(xiàn)，大部分卵巢已達(dá)Ⅳ或Ⅴ期，此時(shí)距投苗時(shí)間大約為2年，說(shuō)明養(yǎng)殖斑鳠2 齡時(shí)就能達(dá)到性成熟，這與李紅敬等［17］得出的斑鳠第1次性成熟年齡為6 ～8 齡相差甚大。另外，養(yǎng)殖斑鳠的腹腔脂肪沉積很厚，這可能與長(zhǎng)期投喂冰鮮野雜魚(yú)和一些脂肪含量高的飼料有關(guān)。斑鳠Ⅰ期精巢和卵巢是從6月齡魚(yú)苗取得，但由于樣本數(shù)量有限，其性腺何時(shí)出現(xiàn)以及持續(xù)時(shí)間不得而知。筆者只對(duì)各個(gè)時(shí)期的精巢和卵巢組織結(jié)構(gòu)及外部形態(tài)做了描述，至于各個(gè)時(shí)期的精巢和卵巢從何時(shí)開(kāi)始以及它們的持續(xù)時(shí)間還有待進(jìn)一步研究。

圖1 斑鳠性腺的外觀形態(tài)以及不同時(shí)相卵母細(xì)胞發(fā)育和精巢發(fā)育分期形態(tài)特征Fig.1 Gonads appearance，and characteristics of oocytes at different stages and characteristics of testis at different stages

3.2 斑鳠生殖細(xì)胞發(fā)育的非同步性

魚(yú)類卵巢發(fā)育活動(dòng)可以分為三種類型:完全同步型、分批同步型和非同步型。本研究中發(fā)現(xiàn)，斑鳠在人工馴養(yǎng)條件下卵巢發(fā)育為非同步型。由切片觀察結(jié)果可以看出:處于第Ⅴ期的卵巢中，仍有一部分Ⅲ期、Ⅳ期卵母細(xì)胞存在;處于第Ⅳ期的卵巢中，也可以見(jiàn)到大量的Ⅱ期、Ⅲ期卵母細(xì)胞。這與石大康［18］對(duì)大眼鱖、盛曉灑等［19］對(duì)瓦氏黃顙魚(yú)的研究結(jié)果相似。通過(guò)后期補(bǔ)充采樣結(jié)果可以看出，斑鳠卵巢發(fā)育雖為非同步型，但其產(chǎn)卵類型為一次產(chǎn)卵，斑鳠產(chǎn)卵結(jié)束后，卵巢中雖然仍存在大量的Ⅲ期、Ⅳ期卵母細(xì)胞，但發(fā)育到Ⅴ期需要較長(zhǎng)的時(shí)間和大量的營(yíng)養(yǎng)積累，斑鳠一次產(chǎn)卵結(jié)束后，需要攝取大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為下一年產(chǎn)卵做準(zhǔn)備。斑鳠繁殖率低，產(chǎn)卵量少，與其卵巢發(fā)育的不同步性和一次性產(chǎn)卵有直接的關(guān)系。這與董玉蘭等［20］對(duì)泰山螭霖魚(yú)的研究結(jié)果相似。

3.3 斑鳠的性成熟與繁殖期

采于6—8月的斑鳠樣品，輕壓雌魚(yú)腹部，部分有卵液流出，說(shuō)明此時(shí)卵巢已經(jīng)發(fā)育成熟;切片觀察，大部分卵巢處于Ⅳ期或Ⅴ期，通過(guò)后期補(bǔ)充采樣驗(yàn)證，其卵巢發(fā)育情況均不如6—8月采集的斑鳠卵巢發(fā)育良好，說(shuō)明斑鳠卵巢的成熟期應(yīng)在6—8月。而性成熟斑鳠同齡雌魚(yú)卵巢發(fā)育不同步與其體型大小及營(yíng)養(yǎng)狀況的關(guān)系，還有待進(jìn)一步研究。雄性斑鳠精巢細(xì)長(zhǎng)，曾一度認(rèn)為其發(fā)育不理想，但通過(guò)切片觀察發(fā)現(xiàn)，精巢內(nèi)精子細(xì)胞發(fā)育良好，有的甚至充滿整個(gè)精小葉腔，由此排除了精巢發(fā)育不良導(dǎo)致斑鳠人工繁殖受精率低的推論，這與朱新平等［21］對(duì)池養(yǎng)斑鳠人工繁殖的研究結(jié)果相似。但是，精子的成熟度以及交配時(shí)排出精子的量是否是影響斑鳠繁殖率低的原因尚需進(jìn)一步研究。

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