臺(tái)凡力，陳民傭，蔣福松，黃如渠，鄧東養(yǎng)

（廣東省湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東 湛江 524022）

豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起豬的一種繁殖障礙和呼吸道炎癥的傳染病[1]。其臨床特征為厭食、發(fā)熱、母豬繁殖障礙，懷孕期發(fā)生大批流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發(fā)生嚴(yán)重呼吸道疾患及高死亡率為特征的一種傳染病。

廣東湛江地區(qū)某規(guī)模化豬場(chǎng)，在2014年1月份的血清學(xué)常規(guī)檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)豬繁殖與呼吸綜合征抗體水平明顯波動(dòng)，懷疑有野毒在場(chǎng)內(nèi)活動(dòng)，馬上采購(gòu)一批豬繁殖與呼吸綜合征基因缺失苗做緊急接種。為了了解掌握該批疫苗緊急接種后的免疫效果，以及豬群豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的變化動(dòng)態(tài)，筆者從緊急接種后的第3周開(kāi)始，采集血清，對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，采集血清樣本52份。為該豬場(chǎng)有效控制PRRS提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清來(lái)源 廣東湛江地區(qū)某規(guī)模化豬場(chǎng)共采集52份血清。

1.1.2 試劑 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒（PRRS X3 Ab），美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)。

1.1.3 儀器設(shè)備 MK3酶標(biāo)儀，MK2自動(dòng)洗板儀，MILLI-Q-A超純水機(jī)，單道微量移液器，多道微量移液器，渦旋混合儀。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 采取隨機(jī)抽樣的方法，每一次采血不低于5份。緊急接種前采集樣本20份，緊急接種后21 d采集有效血清6份，28 d采集有效血清7份，35 d采集有效血清6份，42 d采集有效血清樣本13份。血樣采集后及時(shí)進(jìn)行常規(guī)血清分離，冷凍備檢。

1.2.2 抗體測(cè)定 取10 μL血清，利用豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)。操作程序按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，在630 nm處測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光度值（OD630）。只有陰性對(duì)照的平均OD630小于等于0.150，陽(yáng)性對(duì)照的平均值減去陰性對(duì)照的平均值大于或等于0.150時(shí)，該檢測(cè)結(jié)果才能有效。如果被檢樣品阻斷率大于或等于40%,該樣本被判為陽(yáng)性(有PRRSV抗體存在)；如果被檢測(cè)樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就被判為抗體陰性（無(wú)抗PRRSV抗體存在）；如果被檢測(cè)樣品的阻斷率在30%～40%之間，就應(yīng)在數(shù)日后再對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行重測(cè)。如果重測(cè)結(jié)果仍舊可疑，就使用血清中和試驗(yàn)的方法再次進(jìn)行確認(rèn)。

1.2.3 離散度分析 離散度（CV）采用變異系數(shù)表示。如果被檢測(cè)豬場(chǎng)PRRSV抗體的離散度小于或等于40%，我們認(rèn)為該豬場(chǎng)PRRS抗體比較整齊，免疫效果比較確實(shí)。反之，如果該場(chǎng)的離散度大于40%，我們認(rèn)為該豬場(chǎng)的豬PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。

2 結(jié)果

由表1可見(jiàn)，在緊急接種前該場(chǎng)的豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的阻斷率均值為1.938 5。緊急接種基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗體阻斷率平均值分別為2.305 6、2.050 2、1.641 7和1.301 0。在緊急接種前該場(chǎng)的豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的離散度為99.83%。緊急接種基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗體離散度分別為66.20%、57.00%、78.90%和86.59%。

3 分析與討論

3.1 結(jié)果分析

由表1可見(jiàn)，該規(guī)?；i場(chǎng)在2014年1月份監(jiān)測(cè)的血清樣本中，雖然總體抗體阻斷率平均值1.938 5還算理想，但是出現(xiàn)很多極端值。有4份血清的阻斷率大于3，其中編號(hào)為7號(hào)的血清高達(dá)5.6，編號(hào)為16號(hào)的血清高達(dá)7.6。在實(shí)際生產(chǎn)中，現(xiàn)有的診斷試劑盒還不能區(qū)分野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，但我們一般認(rèn)為現(xiàn)有的疫苗干預(yù)所能產(chǎn)生的抗體阻斷率一般都小于3.0。因此當(dāng)樣品的阻斷率超過(guò)3.0時(shí)，我們都判為野毒感染。因此我們懷疑該場(chǎng)目前有PRRS野毒感染。同時(shí)有4份血清的抗體阻斷率小于0.3，就是說(shuō)這4份血清沒(méi)有PRRS抗體。這和阻斷率高達(dá)7.6的血清相比，形成強(qiáng)烈的反差，進(jìn)一步驗(yàn)證該場(chǎng)遭受了PRRS野毒感染。緊急接種21 d后，抗體阻斷率平均值上升，平均值為2.305 6，接種后28 d，抗體阻斷率平均值開(kāi)始下降,平均值為2.050 2，隨后的3周，勻速下降，到第42天的時(shí)候，抗體阻斷率下降到1.301 0。這說(shuō)明在緊急接種PRRS基因缺失苗后，該疫苗起到了有效的干預(yù)作用，使得PRRS抗體產(chǎn)生了明顯變化。這也說(shuō)明該豬場(chǎng)這次緊急接種PRRS基因缺失苗起到了緊急接種的作用，達(dá)到了預(yù)期效果

表1 豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

該規(guī)模化豬場(chǎng)在2014年1月份對(duì)PRRS進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)時(shí)，PRRS抗體離散度為99.83%，高于40%，說(shuō)明這一時(shí)期該豬場(chǎng)的PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。緊急接種PRRS基因缺失苗后，到28 d的時(shí)候下降到57.00%。這說(shuō)明在緊急接種PRRS基因缺失苗后，該疫苗起到了有效的干預(yù)作用。在緊急接種35 d后，抗體離散度又開(kāi)始上升，到42 d的時(shí)候，離散度又重新上升到86.59%，這反映這次緊急接種，隨著時(shí)間的推移，對(duì)豬PRRS野毒感染的干預(yù)作用在減小。因此建議，就針對(duì)PRRS,針對(duì)這個(gè)型號(hào)的PRRS基因缺失苗，最好在緊急接種42 d后，重新接種一次，以確保緊急接種的效果。

綜上所述，結(jié)合PRRS阻斷率平均值的變化和抗體離散度的變化，我們認(rèn)為該場(chǎng)緊急接種的PRRS基因缺失苗，有效地干預(yù)了該場(chǎng)PRRS抗體的變化?？梢耘袛嘣撠i場(chǎng)這次緊急接種PRRS基因缺失苗起到了緊急接種的作用，達(dá)到了預(yù)期效果。

3.2 討論

3.2.1 抗體變化和臨床表現(xiàn) 筆者通過(guò)和該場(chǎng)獸醫(yī)人員的溝通了解到，該場(chǎng)在緊急接種PRRS基因缺失苗前，產(chǎn)房仔豬開(kāi)始腹瀉，久治不愈。但并沒(méi)有出現(xiàn)典型的PRRS臨床癥狀，即：豬群出現(xiàn)厭食、發(fā)熱、母豬繁殖障礙，懷孕期發(fā)生大批流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發(fā)生嚴(yán)重呼吸道疾患及高死亡率。緊急接種1個(gè)月后，產(chǎn)房仔豬拉稀現(xiàn)象逐步消失，生產(chǎn)恢復(fù)正常。這和筆者監(jiān)測(cè)到的抗體變化成正相關(guān)，在緊急接種前，該場(chǎng)的豬群PRRS的阻斷率出現(xiàn)很大的波動(dòng)，出現(xiàn)一些極高和極低的阻斷率，并且離散度高達(dá)99.83%。雖然臨床沒(méi)有出現(xiàn)典型的PRRS臨床癥狀，但是由于PRRSV對(duì)免疫系統(tǒng)有一定的破壞力，致使臨床仔豬拉稀，變得很難治愈。豬群PRRS抗體阻斷率在緊急接種21 d后上升到2.305 6，抗體離散度下降到66.20%，說(shuō)明已經(jīng)有效干預(yù)PRRS野毒感染。所以在緊急接種后1個(gè)月左右，產(chǎn)房仔豬拉稀問(wèn)題，得到了有效的控制，生產(chǎn)逐步穩(wěn)定。雖然在42 d后，抗體離散度重新回升，但是抗體阻斷率還是一直處于下降狀態(tài)，所以生產(chǎn)非常穩(wěn)定。這似乎說(shuō)明，該場(chǎng)雖然遭受了PRRS野毒感染，但是由于接種及時(shí)，接種的疫苗效果確實(shí)，該場(chǎng)并沒(méi)有暴發(fā)PRRS。

3.2.2 抗體依賴性增強(qiáng)作用 PRRS感染有一個(gè)很重要的特點(diǎn)是抗體依賴性增強(qiáng)作用，即無(wú)論在體內(nèi)或者體外的試驗(yàn)條件下，PRRSV抗體的存在可介導(dǎo)和加強(qiáng)感染，而不是保護(hù)。該規(guī)?；i場(chǎng)在2014年1月份抗體監(jiān)測(cè)的時(shí)候，雖然抗體水平總體不錯(cuò)，但是臨床還是出現(xiàn)仔豬腹瀉的問(wèn)題，緊急接種PRRS基因缺失苗后，PRRS抗體阻斷率整體雖然下降，但是臨床的生產(chǎn)卻非常穩(wěn)定。PRRS感染的這一特點(diǎn)，剛好解釋了這一現(xiàn)象。因此單單通過(guò)血清抗體水平來(lái)評(píng)估PRRS病毒疫苗的免疫效果不科學(xué)，但可以通過(guò)監(jiān)測(cè)PRRS病毒 N蛋白抗體水平的變化狀態(tài)來(lái)監(jiān)測(cè)群體中PRRSV的活躍程度。

3.2.3 監(jiān)測(cè)方法 目前臨床上監(jiān)測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的多采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的方法。國(guó)內(nèi)外很多生物制品廠家都生產(chǎn)檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的試劑盒，質(zhì)量參差不齊。錢(qián)歡，唐利對(duì)市場(chǎng)一些常見(jiàn)的試劑盒做了對(duì)比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)美國(guó)IDXX公司生產(chǎn)的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒重復(fù)性和一致性比較高，適用于發(fā)病診斷和疫病預(yù)警[2]。馬超峰，孫何云等也對(duì)市場(chǎng)一些常見(jiàn)的試劑盒做了對(duì)比試驗(yàn)，最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是美國(guó)IDXX公司生產(chǎn)的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒具有較高的敏感性和特異性，可以作為PRRS檢測(cè)的首選試劑[3]。IDEXX豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，是用重組的PRRSV抗原包被的微量反應(yīng)板，利用ELISA原理來(lái)檢驗(yàn)豬血清或血漿中的PRRSV抗體。該試劑盒具有較高的重現(xiàn)性、敏感性和特異性，檢測(cè)結(jié)果可靠。所以筆者認(rèn)為對(duì)廣東湛江地區(qū)該規(guī)?；i場(chǎng)的檢測(cè)結(jié)果比較可靠。

3.2.4 疫苗選擇 目前市場(chǎng)上PRRS疫苗的生產(chǎn)廠家比較多，生產(chǎn)規(guī)格也很多。PRRS疫苗免疫后能不能真正地，有效地干預(yù)到豬體對(duì)PRRS病毒的免疫，筆者通過(guò)過(guò)去幾年對(duì)湛江地區(qū)PRRS免疫抗體的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格、不同廠家的疫苗所產(chǎn)生的免疫效果相差甚遠(yuǎn)。因此筆者建議，大家一定要慎重選擇疫苗。同時(shí)筆者還發(fā)現(xiàn)，目前湛江地區(qū)的規(guī)?；i場(chǎng)在設(shè)計(jì)PRRS免疫程序的時(shí)候，大多都是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，或者專家教授的推薦來(lái)設(shè)計(jì)的，有的很多年都沒(méi)有變過(guò)。目前疫苗的生產(chǎn)工藝不斷在改進(jìn)，疫苗免疫效果不斷在進(jìn)步，因而我們的免疫程序一定也要做出相應(yīng)的調(diào)整。所以筆者建議，有條件的豬場(chǎng)最好借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，根據(jù)抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，來(lái)選擇適合自己豬場(chǎng)的PRRS疫苗，來(lái)完善適合自己豬場(chǎng)的免疫程序。

[1] 宣長(zhǎng)和,馬春全,陳志寶，等.豬病學(xué)[M]. 第3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2010：146-172.

[2] 錢(qián)歡，唐利.3種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的ELISA試劑盒 的比較[J].豬業(yè)科學(xué)， 2012， 29（10）：42-44.

[3] 馬超鋒，孫何云，張軼，等.幾種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體ELSA診斷試劑盒的對(duì)比試驗(yàn) [J].豬業(yè)科學(xué)，2013，30（9）：82-83.