童春堂，車曉宇，李雪輝，尤蘭華，郭沛艷，陳杭薇

目前非典型病原體(主要指肺炎支原體、嗜肺軍團(tuán)菌)及病毒在呼吸道感染患者中的檢出率日漸升高，隨著檢測方法的改進(jìn)及研究的深入，該病原體及病毒檢測在呼吸道感染診治中的地位越來越受到臨床醫(yī)師的重視。本研究采用間接免疫熒光法(indirect immuno fluorescence，IIF)快速定性檢測住院呼吸道感染患者血清9種常見呼吸道病原體及病毒急性期IgM抗體，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 對象與方法

1.1 檢測對象 北京軍區(qū)總醫(yī)院呼吸內(nèi)科2012年2月1日—2013年5月31日收治呼吸道感染488例，男300例，女188例;年齡17～99(62.3±21.4)歲。病種:急性支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD)、支氣管擴(kuò)張、支氣管哮喘急性發(fā)作、間質(zhì)性肺病、肺癌、發(fā)熱待查等。

1.2 檢測試劑 9種呼吸道感染病原體及病毒IgM抗體檢測試劑盒為西班牙VIRCELL公司原裝進(jìn)口產(chǎn)品，購自鄭州安圖科技發(fā)展有限公司。采用IIF技術(shù)可檢測9種IgM抗體:嗜肺軍團(tuán)菌(legionella pneumophila，LP)血清1型(孔1)，肺炎支原體(mycoplasma pneumonia，MP，孔2)，貝氏柯克斯體(coxiella burnetii，Cb，孔 3)，肺炎衣原體(chlamydia pneumonia，CP，孔 4)，腺病毒(adenovirus，ADV，孔5)，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV，孔6)，流感病毒 A(influenza virus A，F(xiàn)luA，孔7)，流感病毒 B(influenza virus B，F(xiàn)luB，孔8)，副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)1、2、3 型(孔 9)，孔10為質(zhì)控孔，有效期內(nèi)按照試劑盒使用說明書操作。

1.3 檢測方法

1.3.1 標(biāo)本收集與處理:①患者入院24 h內(nèi)，靜脈穿刺采集血液2～3 ml，2000 r/min離心5 min后取血清待測，按1∶1比例稀釋血清樣本;②向稀釋后的血清加入吸附劑，以3000 r/min離心10～15 min，于試劑盒內(nèi)自帶“載玻片”的每孔(9個檢測孔和1個質(zhì)控孔)中加入15μl處理后血清，于37℃下溫育90 min;③用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗載玻片后放置水平搖床搖動10 min，再用蒸餾水緩慢沖洗;④將載玻片自然晾干，每孔加入15μl熒光素標(biāo)記的抗人IgM磷酸緩沖液后放入試劑盒37℃溫育30 min，晾干后加封閉介質(zhì)，加蓋玻片，即刻在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，如不能立即觀察，可2～8℃避光放置，但不能超過24 h。

1.3.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):陽性:FluA、FluB、ADV、PIV、RSV抗原與血清IgM抗體結(jié)合后細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或細(xì)胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光(在PIV、RSV與IgM抗體結(jié)合后的細(xì)胞中可能同時觀察到著色的合胞);CP、LP、Cb與IgM抗體結(jié)合后的整個細(xì)胞呈現(xiàn)蘋果綠色熒光;MP與陽性血清結(jié)合后在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性:CP、LP和Cb與IgM抗體結(jié)合后整個細(xì)胞無熒光，MP、FluA、FluB、ADV、PIV 和 RSV與IgM抗體結(jié)合后的細(xì)胞呈紅色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢測結(jié)果 488例9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性總檢出率為57.0%(278/488，設(shè)定1種病原體及病毒IgM抗體陽性即算作1例)，Cb未檢出，見表1。

表1 住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢測結(jié)果(n=488)

2.2 呼吸道病原體及病毒IgM抗體混合感染檢出情況 488例中FluA+FluB陽性9例，F(xiàn)luA+LP陽性11例，F(xiàn)luA+MP陽性7例，F(xiàn)luA+PIV陽性3例，F(xiàn)luB+MP陽性 3例，F(xiàn)luB+LP陽性 2例，F(xiàn)luB+PIV陽性2例，LP+ADV陽性3例，LP+MP陽性4例，LP+PIV陽性1例。兩種及以上混合感染陽性檢出率為13.9%(68/488)，其中 FluA、LP、FluB、MP合并其他病原體及病毒IgM抗體陽性分別為 36、25、20、18 例。

2.3 不同季節(jié)、病種、年齡段呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢出情況 春季和冬季FluA IgM抗體陽性檢出率分別為 20.0%(40/200)、27.8%(35/126)，顯著高于夏秋季，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);春季LP IgM抗體陽性檢出率為22.0%(44/200)高于秋季的6.0%(5/84)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);其他病原體及病毒不同季節(jié)間IgM抗體陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。不同病種間呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。15～65歲年齡段LP及MP IgM抗體陽性檢出率分別為 19.0%(43/226)、11.9%(27/226)，高于 65～99歲年齡段的 10.7%(28/262)、6.1%(16/262)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，兩年齡段其余病原體及病毒IgM抗體陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表4。

表2 住院呼吸道感染患者不同季節(jié)呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結(jié)果

表3 不同病種住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結(jié)果

表4 不同年齡住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結(jié)果

注:FluA:流感病毒A，LP:嗜肺軍團(tuán)菌，MP:肺炎支原體，F(xiàn)luB:流感病毒B，PIV:副流感病毒，ADV:腺病毒，RSV:呼吸道合胞病毒，CP為肺炎衣原體;aP＜0.05

3 討論

研究表明，近年來肺炎鏈球菌的感染率有所下降，而呼吸道非典型病原體及病毒的感染率不斷上升［1-2］。呼吸道非典型病原體及病毒致病性強(qiáng)、傳播快、起病急，人群不易形成持久免疫力，臨床特征缺乏特異性，容易造成抗生素的濫用，給疾病的診治及防控造成了一定的困難［3］。因而，快速高效地檢出呼吸道非典型病原體及病毒對疾病的及時診治及疫情報告有重要意義。

呼吸道非典型病原體及病毒的檢測方法包括病原體的分離和培養(yǎng)、血清學(xué)檢測和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)等方法，但上述方法由于檢測時間長、操作復(fù)雜、設(shè)備昂貴等缺點(diǎn)而導(dǎo)致病原診斷延遲。本研究采用IIF檢測9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體，該法可對血清中反映新近發(fā)生感染的急性期IgM抗體進(jìn)行定性檢測［4］，具有檢測快速、操作簡便、準(zhǔn)確性高、檢測范圍廣、利于早期發(fā)現(xiàn)且價格低廉等優(yōu)點(diǎn)［5］。本研究結(jié)果顯示，488例9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性總檢出率高達(dá)57.0%，以FluA IgM抗體陽性檢出率最高，其次為LP、MP、FluB，高于劉又寧等［6］2004年進(jìn)行的一項(xiàng)呼吸道病原學(xué)調(diào)查結(jié)果。考慮此次檢測對象并不能排除有IgM抗體長期攜帶者，因有相關(guān)研究報道部分呼吸道感染患者產(chǎn)生的IgM抗體可持續(xù)存在1年或更長時間［7］。本研究488例中存在一定比例的混合感染，以FluA、LP、FluB、MP合并其他病原體及病毒最為多見，再度證明了FluA、LP和MP是呼吸道感染的主要病原［8-9］，混合感染是其特點(diǎn)［10-12］，提示臨床醫(yī)師應(yīng)當(dāng)重視非典型病原體及病毒在成人呼吸道感染中的危害。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)luA IgM抗體在春季和冬季的陽性檢出率均顯著高于夏秋季節(jié);而春季LP IgM抗體陽性檢出率高于秋季，與文獻(xiàn)［13］報道不太相符。本研究結(jié)果還顯示，呼吸道非典型病原體及病毒在15～65歲年齡段患者中LP及MP IgM抗體陽性檢出率較高，與智霞萍等［14］調(diào)查結(jié)果一致。提示呼吸道非典型病原體及病毒的分布與患者檢測季節(jié)、年齡密切相關(guān)，與近年流感流行的季節(jié)相符。上述結(jié)果對呼吸道感染患者的臨床經(jīng)驗(yàn)性治療有著重要的指導(dǎo)意義。

綜上所述，呼吸道非典型病原體及病毒為呼吸道感染的重要病原，其混合感染不容忽視，此外還應(yīng)重視季節(jié)、年齡、環(huán)境等因素對呼吸道非典型病原體及病毒分布的影響。

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