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        高危型人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA在宮頸病變篩查中的作用研究

        2014-02-08 03:06:50劉佳佳瞿全新唐榮榮
        中國全科醫(yī)學(xué) 2014年10期
        關(guān)鍵詞:高級別危型預(yù)測值

        劉佳佳,馮 姝,瞿全新,唐榮榮,李 敏

        宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的一組癌前病變,反映了宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程。從CIN發(fā)展為宮頸癌一般需要10~15年。因此,高效篩查是早期發(fā)現(xiàn)病變、指導(dǎo)及時恰當(dāng)治療和隨訪管理、有效預(yù)防宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵。目前,宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)是宮頸癌篩查中應(yīng)用最為廣泛的方法,但是,該方法不能單獨(dú)用于區(qū)分少數(shù)可能進(jìn)展為浸潤癌的病變和絕大多數(shù)可能自然消退的病變[1-2]。20世紀(jì)70年代德國病毒學(xué)家Zur Hausen提出人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)的假設(shè)以來,大量研究表明HPV感染,特別是高危型HPV持續(xù)感染是絕大多數(shù)宮頸癌前病變和宮頸癌的主要原因[3]。進(jìn)行HPV DNA檢測可提高高級別CIN及宮頸癌的檢出率,對細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果可疑患者的分類及癌前病變治療后隨訪具有重要意義[4]??焖賹?dǎo)流雜交芯片可進(jìn)行HPV分型檢測,為當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的HPV檢測技術(shù),臨床多與宮頸TCT聯(lián)合應(yīng)用。然而,多數(shù)HPV感染都是無癥狀和暫時性的,且大多數(shù)新發(fā)感染可在2年內(nèi)消退[5],這使得HPV DNA檢測雖然具有較高的敏感度,但特異度相對較低[6],意味著HPV DNA檢測可能檢出過多臨床無意義感染,從而增加患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理負(fù)擔(dān)。本研究旨在探討高危型HPV E6/E7 mRNA檢查是否能更好地預(yù)測宮頸癌前病變進(jìn)展,從而為臨床篩查及患者隨訪管理方面提供新方法。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選取2011年6月—2012年7月因?qū)m頸疾病在天津醫(yī)科大學(xué)一中心臨床學(xué)院 天津市第一中心醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的74例患者為研究對象,年齡22~77歲,平均38.1歲。多以接觸性出血或異常陰道出血、白帶異常、下腹隱痛就診。均無CIN史、宮頸癌史及盆腔放射治療史,無子宮全切術(shù)史,目前無妊娠,取材前3 d內(nèi)無陰道沖洗及用藥史。所有患者行宮頸TCT、陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查。

        1.2 宮頸樣本采集 采用凱普宮頸細(xì)胞收集保存系統(tǒng)及專用去RNA酶宮頸細(xì)胞保存系統(tǒng)分別采集每例患者宮頸細(xì)胞標(biāo)本共2份,將刷頭放入相應(yīng)的取樣管中,取樣管內(nèi)含專用細(xì)胞保存液,擰緊瓶蓋,室溫保存待測。

        1.3 實(shí)驗(yàn)器材與試劑 超凈工作臺、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增儀、HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、離心機(jī)、水浴鍋、移液器;HPV DNA提取試劑盒、PCR擴(kuò)增試劑盒、HPV DNA雜交試劑盒,購自凱普生物化學(xué)有限公司;QuantiVirusTMHPV mRNA診斷試劑盒購自科蒂亞(新鄉(xiāng))生物技術(shù)有限公司。

        1.4 宮頸TCT與陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查 宮頸TCT為常規(guī)篩查手段,其檢查結(jié)果異常〔正常為未見上皮內(nèi)病變細(xì)胞(NILM),異常為非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)〕患者,于陰道鏡檢查下取活檢,送病理科行組織病理學(xué)檢查,以病理檢查報告為金標(biāo)準(zhǔn)。

        1.5 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測 按照試劑盒要求進(jìn)行操作,主要步驟包括裂解細(xì)胞、雜交捕獲mRNA、信號放大、底物發(fā)光反應(yīng),經(jīng)QuantiVirusTM冷光儀檢測,檢測結(jié)果為光子數(shù),經(jīng)Diacarta公司計算機(jī)軟件計算轉(zhuǎn)換后自動判斷結(jié)果。

        1.6 HPV DNA分型檢測 按試劑盒要求進(jìn)行操作,主要步驟包括全基因組DNA提取、PCR、導(dǎo)流雜交,通過肉眼進(jìn)行判斷,檢測結(jié)果陽性點(diǎn)為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn),根據(jù)雜交膜的HPV亞型分布圖,判斷陽性點(diǎn)為何種HPV亞型感染,一個圓點(diǎn)為HPV亞型單一感染,兩個及以上即為多重感染。另外,每張芯片上都有一個內(nèi)照點(diǎn)(PCR放映質(zhì)控點(diǎn))和生物素對照點(diǎn)(雜交顯色質(zhì)控點(diǎn))。

        1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料及敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 病理學(xué)檢查結(jié)果 陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查慢性宮頸炎患者20例,年齡34~54歲;CIN患者42例,其中CINⅠ10例,年齡30~61歲,CINⅡ12例,年齡22~56歲,CIN Ⅲ 20例,年齡24~58歲;宮頸癌患者12例,年齡23~65歲。根據(jù)病理結(jié)果進(jìn)行合并:慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ、宮頸癌。

        2.2 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測在宮頸病變中的檢出率 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測宮頸病變總檢出率分別為60.8%(45/74)和66.2%(49/74),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.467,P>0.05)。兩種方法檢測慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ、宮頸癌檢出率比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05,見表1)。

        2.3 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測對高級別宮頸病變的診斷 CINⅡ及以上的宮頸病變定義為高級別宮頸病變,以病理學(xué)檢查為金標(biāo)準(zhǔn),高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測高級別宮頸病變的敏感度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);兩組特異度比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,見表2~4)。

        表1 兩種檢測方法宮頸病變檢出率比較〔n(%)〕

        Table1 Comparison of the detection rate of cervical lesions between the two methods

        方法例數(shù)慢性宮頸炎及CINⅠCINⅡ~Ⅲ宮頸癌高危型HPVE6/E7mRNA檢測74 5(68) 29(392)11(149)HPVDNA分型檢測7412(162)28(378) 9(122) χ2值325600280231P值007108660631

        注:HPV=人乳頭瘤病毒,CIN=宮頸上皮內(nèi)瘤變

        表2 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與病理學(xué)檢查高級別宮頸病變比較(例)

        Table2 Comparison of high-risk HPV E6 /E7 mRNA testing and pathology report in predicting advanced cervical lesions

        高危型HPVE6/E7mRNA檢測病理學(xué)檢查陽性 陰性合計陽性40 5 45陰性 4 2529合計443074

        表3 HPV DNA分型檢測與病理學(xué)檢查高級別宮頸病變比較(例)

        Table3 Comparison of HPV DNA testing and pathology report in predicting advanced cervical lesions

        HPVDNA分型檢測病理學(xué)檢查陽性 陰性合計陽性371249陰性 7 1825合計443074

        表4 兩種方法檢測高級別宮頸病變的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值比較(%)

        Table4 Comparison of sensitivity,specificity,positive predictive value and negative predictive value of the two methods in predicting advanced cervical lesions

        方法敏感度特異度陽性預(yù)測值陰性預(yù)測值高危型HPVE6/E7mRNA檢測909833889862HPVDNA分型檢測841600755720χ2值0935402228341671P值0330004500900196

        2.4 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測對ASC-US患者高級別宮頸病變的診斷 25例患者宮頸TCT結(jié)果為ASC-US,高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測ASC-US患者高級別宮頸病變的敏感度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);兩組特異度比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,見表5~7)。

        表5 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與病理學(xué)檢查ASC-US患者高級別宮頸病變比較(例)

        Table5 Comparison of high-risk HPV E6 /E7 mRNA testing and pathology report in predicting advanced cervical lesions in patients with ASC-US

        高危型HPVE6/E7mRNA檢測病理學(xué)檢查陽性 陰性合計陽性12 1 13陰性 1 1112合計131225

        注:ASC-US=非典型鱗狀細(xì)胞

        表6 HPV DNA分型檢測與病理學(xué)檢查ASC-US患者高級別宮頸病變比較(例)

        Table6 Comparison of HPV DNA testing and pathology report in predicting advanced cervical lesions in patients with ASC-US

        HPVDNA分型檢測病理學(xué)檢查陽性 陰性合計陽性11 6 17陰性 2 6 8 合計131225

        表7 兩種方法檢測ASC-US患者高級別宮頸病變的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值比較(%)

        Table7 Comparison of sensitivity,specificity,positive predictive value and negative predictive value of the two methods in predicting advanced cervical lesions in patients with ASC-US

        方法敏感度特異度陽性預(yù)測值陰性預(yù)測值高危型HPVE6/E7mRNA檢測923917923917HPVDNA分型檢測846500647750χ2值0377504231371046P值0539002500770306

        3 討論

        3.1 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測在宮頸病變中的作用 目前,以DNA為基礎(chǔ)的HPV檢測在宮頸病變篩查中發(fā)揮重要作用[7-8],但是HPV DNA檢測可以檢出大量的暫時性感染,這些感染通常對預(yù)測病變的風(fēng)險無實(shí)際意義。盡管DNA檢測具有較高的敏感度和陰性預(yù)測值,但其陽性預(yù)測值較低[9]。隨著對E6、E7癌蛋白在宮頸癌致癌機(jī)制中的作用逐漸明了,許多研究者提出對E6、E7癌蛋白表達(dá)過程中反映其轉(zhuǎn)錄活性的E6/E7 mRNA進(jìn)行檢測可能更能預(yù)測病情的進(jìn)展[10-11]。

        本研究對74例宮頸疾病患者分別進(jìn)行了高危型HPV E6/E7 mRNA檢測和HPV DNA分型檢測,結(jié)果證實(shí),HPV E6/E7 mRNA檢測和DNA檢測宮頸病變總檢出率分別為60.8%和66.2%,兩種方法間無差異。兩種方法檢測慢性宮頸炎及CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ、宮頸癌的檢出率比較亦無差異。高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測高級別宮頸病變比較,靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值間無差異,而高危型HPV E6/E7 mRNA檢測特異度為83.3%,明顯高于HPV DNA分型檢測的60.0%。HPV DNA分型檢測可早期發(fā)現(xiàn)有進(jìn)展風(fēng)險的持續(xù)性感染,并能夠識別可能消退的病變,避免對患者的過度檢查與治療,減少患者的心理負(fù)擔(dān)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

        3.2 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測在ASC-US患者分流中的作用 目前,宮頸TCT為ASC-US的患者臨床處理較為棘手,臨床多對其進(jìn)行HPV DNA分型檢測,其結(jié)果已作為對ASC-US患者分流的重要標(biāo)準(zhǔn)。美國國立腫瘤研究院對ASC-US患者進(jìn)行多中心研究顯示,HPV DNA分型檢測對發(fā)現(xiàn)CIN及以上病變的敏感度為96.3%,其中僅有56.1%的患者需要進(jìn)行陰道鏡下宮頸活組織檢查。而對ASC-US患者進(jìn)行HPV DNA分型檢測可能導(dǎo)致過多患者進(jìn)行不必要的陰道鏡及宮頸活組織檢查,給患者造成不必要的傷害和負(fù)擔(dān)。本研究對25例宮頸TCT為ASC-US患者進(jìn)行分析,證實(shí)高危型HPV E6/E7 mRNA檢測的特異度為91.7%,明顯高于HPV DNA分型檢測的50.0%。通過檢測患者宮頸標(biāo)本中高危型HPV E6/E7 mRNA表達(dá),可在一定程度上反應(yīng)高危型HPV E6、E7癌蛋白表達(dá)和病變活躍程度。高危型HPV E6/E7 mRNA檢測相對更高的特異度決定了其排除可疑或低度病變的能力更強(qiáng),能夠把更多無進(jìn)展性的病變重新歸入常規(guī)的篩查程序中,有效減少對疾病程度的誤判,避免過度檢查、治療給患者帶來的痛苦和精神負(fù)擔(dān)。而在靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值方面的比較無差異。高危型HPV E6/E7 mRNA檢測與HPV DNA分型檢測相當(dāng)?shù)拿舾卸纫脖WC了對ASC-US高級別病變具有較高的辨別能力,使其漏診的風(fēng)險并不比HPV DNA分型檢測增加,另一方面,與HPV DNA分型檢測相似的陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值也保證其判定有無病變進(jìn)展高危風(fēng)險的準(zhǔn)確性,具有較高的診斷可信度。

        因此,本研究認(rèn)為高危型HPV E6/E7 mRNA檢測對ASC-US的分流意義更為明確,可有效指導(dǎo)陰道鏡的合理使用。但由于研究涉及樣本量較小,同時由于選取樣本的限制,導(dǎo)致高危型HPV檢出率可能較正常人群更高,因此仍需要進(jìn)一步的深入研究。

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