蔡麗娟，朱麗敏，林啟存，許寶青，劉 凱

（浙江省杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江杭州 310024）

2株鱉源致病菌的鑒定及藥敏結(jié)果差異性的比較

蔡麗娟，朱麗敏，林啟存，許寶青，劉 凱

（浙江省杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江杭州 310024）

對分離自溫室和外塘發(fā)病甲魚肝臟的2株鱉源致病菌，分別進(jìn)行細(xì)菌鑒定并測定其對19種抗生素的藥物敏感性，對比分析藥敏結(jié)果的差異。經(jīng)鑒定，2株菌均為嗜水氣單胞菌，且均存在一定程度的耐藥性，其中分離自溫室甲魚的嗜水氣單胞菌耐藥狀況相對較嚴(yán)重。

鱉源；致病菌；嗜水氣單胞菌；鑒定；藥敏

鱉（Pelodiscus sinensis）俗稱甲魚、水魚、團(tuán)魚等，卵生爬行動物，水陸兩棲生活，因鱉肉味鮮美、營養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者喜愛。近幾年來隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，養(yǎng)殖環(huán)境惡化程度加劇，病原滋生，疾病已成為制約甲魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。其中原發(fā)性和繼發(fā)性細(xì)菌性疾病占據(jù)了很大的比重，主要有腐皮病、穿孔病、疥瘡病、白點(diǎn)病、紅脖子病、出血性敗血癥等，死亡率均很高，給養(yǎng)鱉業(yè)造成了巨大的損失。

面對致病菌的肆虐，抗生素是最強(qiáng)有力的武器，但由于抗生素長期無度使用已導(dǎo)致了一定比例耐藥菌的出現(xiàn)，給養(yǎng)殖用藥造成很大的困擾。試驗(yàn)中2株菌株A1、A2分別分離自本地區(qū)有明顯出血性敗血癥癥狀的溫室鱉和外塘鱉，用VⅠTEK-32對其進(jìn)行鑒定，并用紙片法［1］分別測定其對19種抗生素的藥敏結(jié)果，對比2株致病菌的藥敏結(jié)果差異?，F(xiàn)將有關(guān)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

主要耗材。血平板，GNⅠ+鑒定卡，MH培養(yǎng)基均購自法國梅里埃生物公司。

試驗(yàn)菌株。2株試驗(yàn)菌株A1、A2分別分離自本地區(qū)發(fā)病的溫室甲魚和外塘甲魚。發(fā)病癥狀，病鱉肝臟有明顯出血點(diǎn)，腸道無食且內(nèi)壁明顯充血，發(fā)病后死亡率很高。取病鱉肝臟組織，用無菌方式在血平板上分離出溶血嚴(yán)重的優(yōu)勢菌群，經(jīng)動物回歸后確診為該鱉病的致病菌，用30%甘油制成菌懸液置于冰箱-70℃超低溫冷凍保種。

藥敏紙片。恩諾沙星（ENR，5μg·片-1）、氟哌酸（NOR，10μg·片-1）、慶大霉素（GEN，10μg·片-1）、四環(huán)素（LET，3μg·片-1）、丁胺卡那（AMⅠ，30μg·片-1）、強(qiáng)力霉素（DOX，30μg·片-1）、復(fù)方新諾明（COS，23.75/1.225 μg·片-1）、青霉素（P，10μg·片-1）、鏈霉素（SM，10μg·片-1）、利福平（RⅠF，5μg·片-1）、頭孢唑啉（CZO，30μg·片-1）、萘啶酸（NAL，30μg·片-1）、氨芐青/舒巴坦（SAM，10/10μg·片-1）、頭孢呋辛（CEP，30μg·片-1）、頭孢他啶（FOR，30μg·片-1）、左氟沙星（LEV，5μg·片-1）、克林霉素（CM，2μg·片-1）、妥布霉素（TOB，10μg·片-1）、氯霉素（CL，30μg·片-1）購自杭州微生物試劑有限公司。

主要儀器。VⅠTEK-32微生物鑒定系統(tǒng)，NU-6382E超低溫冰箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱。

1.2 方法

細(xì)菌鑒定。2株鱉源致病菌A1，A2分別采用生物梅里埃的VⅠTEK-32全自動化微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

K-B紙片法藥敏試驗(yàn)。將致病菌A1，A2經(jīng)過24 h培養(yǎng)后，用無菌生理鹽水配置成濃度為0.5個麥?zhǔn)系木鷳乙?，用無菌棉拭子均勻涂抹至MH培養(yǎng)基上，按序貼上所需藥敏紙片，置30℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并測量抑菌圈直徑，并對結(jié)果進(jìn)行判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 VⅠTEK32鑒定

A1，A2 2株鱉源致病菌的VⅠTEK32鑒定生化反應(yīng)結(jié)果如表1。

VP試驗(yàn)、GAS試驗(yàn)均陽性，VⅠTEK32鑒定結(jié)果顯示A1，A2 2株鱉源致病菌均為嗜水氣單胞菌。

2.2 藥物敏感性

經(jīng)KB紙片法藥敏試驗(yàn)，用游標(biāo)卡尺測量藥敏圈直徑，具體結(jié)果如表2。

表1 2株鱉源致病菌A1，A2 VⅠTEK32鑒定結(jié)果

表2 2株鱉源致病菌A1，A2對19種抗生素的藥敏結(jié)果

表3顯示，同為鱉源嗜水氣單胞菌的2株菌A1和A2對19種抗生素的耐藥百分比存在較大的差異，A2耐藥率為36.8%，A1的耐藥率為63.2%明顯高于A2。

表3 2株鱉源致病菌A1，A2的耐藥率

3 小結(jié)與討論

鱉源致病菌A1，A2經(jīng)鑒定均為嗜水氣單胞菌。嗜水氣單胞菌屬氣單胞菌科氣單胞菌屬，為條件致病菌，廣泛存在于池塘及土壤中。當(dāng)放養(yǎng)密度、水溫、水質(zhì)等環(huán)境不適宜于養(yǎng)殖動物時，通?？芍吗B(yǎng)殖動物感染嗜水氣單胞菌，從而發(fā)?。?］。因此在養(yǎng)殖過程中須嚴(yán)格控制好養(yǎng)殖密度與水質(zhì)，這對預(yù)防嗜水氣單胞菌感染具有積極的作用。

試驗(yàn)表明，不管來自溫室甲魚還是外塘甲魚的嗜水氣單胞菌均存在一定的耐藥性率，其中來自溫室甲魚的耐藥情況更為嚴(yán)重，這與溫室甲魚較外塘甲魚更易發(fā)病，抗生素使用更為頻繁有一定關(guān)系，一般情況下用藥背景復(fù)雜的養(yǎng)殖環(huán)境更容易產(chǎn)生耐藥菌［3］。

鑒于甲魚養(yǎng)殖業(yè)尤其溫室甲魚出現(xiàn)耐藥菌的概率較高，經(jīng)驗(yàn)用藥已不再有效，建議當(dāng)養(yǎng)殖場出現(xiàn)爆發(fā)性疾病的時候，養(yǎng)殖場工作人員最好持發(fā)病甲魚就近求助于基層水產(chǎn)技術(shù)站或水產(chǎn)科研機(jī)構(gòu)，進(jìn)行確診，并借助藥敏檢測技術(shù)選擇合適的抗生素。

［1］ 張卓然，夏夢巖，倪語星.微生物耐藥的基礎(chǔ)與臨床［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007.

［2］ 王增福，謝紅梅，張靜.水產(chǎn)動物嗜水氣單胞菌病研究進(jìn)展［J］.水利漁業(yè)，2002，22（2）：18-19.

［3］ 蔡麗娟，許寶青，林啟存.水產(chǎn)致病性嗜水氣單胞菌耐藥性比較與分析［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2011，30（1）：42-45.

（責(zé)任編輯：張才德）

TS 254

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0528-9017（2014）06-0939-02

文獻(xiàn)著錄格式：蔡麗娟，朱麗敏，林啟存，等.2株鱉源致病菌的鑒定及藥敏結(jié)果差異性的比較［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（6）：939-940.

2014-04-09

杭州市農(nóng)業(yè)科研攻關(guān)專項(xiàng)（20130432B12）；浙江省公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項(xiàng)目（2012C22065）作者簡介：蔡麗娟（1978-），女，浙江紹興人，工程師，本科，研究方向?yàn)樗a(chǎn)病害。