張鳳春

關(guān)于超廣譜β-內(nèi)酰胺酶與細(xì)菌耐藥性的研究

張鳳春

目的 了解鞍山市第二醫(yī)院大腸桿菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)菌的發(fā)生率及其與細(xì)菌耐藥性的關(guān)系。方法 雙紙片、酶抑制劑增強(qiáng)紙片擴(kuò)散法；Kirby-Bauer(KB)法測(cè)定ESBLs株對(duì)抗菌藥物的敏感性。結(jié)果 大腸桿菌中產(chǎn)ESBLs菌株占26.67%, 肺炎克雷伯菌中為24.27 %；上述產(chǎn)ESBLs株對(duì)第三代頭孢菌素和氨曲南多為耐藥, 亞安培南的耐藥株少見(jiàn), 對(duì)阿米卡星、環(huán)丙沙星等多為耐藥。結(jié)論 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是對(duì)第三代頭孢菌素、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥的重要機(jī)制。

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；藥敏試驗(yàn)；耐藥機(jī)制

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)是以滅活窄譜和廣譜頭孢菌素、單環(huán)類(lèi)抗生素及抗革蘭氏陰性桿菌青霉素等抗生素為特征的β-內(nèi)酰胺酶［1］。而ESBLs產(chǎn)生菌導(dǎo)致的耐藥性已日益成為臨床治療的難題, 因此作者對(duì)遼寧省鞍山市第二醫(yī)院2012年1月～2013年5月臨床分離的大腸桿菌和肺炎克雷伯菌菌株產(chǎn)ESBLs株的發(fā)生率及耐藥性進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái).2012年1月～2013年5月鞍山市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室住院患者的各種標(biāo)本中分離出的肺炎克雷伯菌206株, 大腸桿菌135株, 全部經(jīng)ATB系統(tǒng)鑒定。質(zhì)控菌株大腸桿菌ATCC25922(非β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株)、大腸桿菌ATCC35218(β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株)以及肺炎克雷伯菌WHO12(ESBLs產(chǎn)生株)。

1.2 抗生素紙片 氨芐西林(AMP)、頭孢唑林(CEZ)、頭孢克羅(CEC)、頭孢呋辛(CXM)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢三嗪(CRO)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢哌酮(CFP)、氨曲南(ATM)、亞安培南(IM)均為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品；頭孢哌酮/舒巴坦(CFP/SU)、頭孢噻肟/克拉維酸(CTX/CA)、頭孢他啶/克拉維酸(CAZ /CA)為美國(guó)BBL公司產(chǎn)品；阿莫西林/克拉維酸(AMX/CA)、阿米卡星(AK)、環(huán)丙沙星(CIP)為北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司產(chǎn)品。

1.3 藥敏試驗(yàn) 采用紙片擴(kuò)散法, 結(jié)果按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)1999年標(biāo)準(zhǔn)［2］判讀, 同時(shí)作質(zhì)控。

1.4 ESBLs檢測(cè) ①采用雙紙片協(xié)同擴(kuò)散法, 選擇AMX/ CA、CTX、CAZ、CRO和ATM五種抗生素紙片, 周?chē)埰c中央紙片中心距離定為20 mm。②NCCLS ESBLs表型確證試驗(yàn)：利用酶抑制劑增強(qiáng)紙片擴(kuò)散法, 選擇CAZ/CA與CAZ, CTX/CA與CTX將它們貼在事先涂布好待測(cè)菌的藥敏平板上, 設(shè)立單藥對(duì)照組藥敏平板。

2 結(jié)果

2.1 ESBLs檢出情.341株臨床菌株中, 共檢出ESBLs菌86株, ESBLs檢出率為25.22%；其中肺炎克雷伯菌為24.27%(50/206), 大腸桿菌為26.67%(36/135)。

2.2 產(chǎn)ESBLs 株與非產(chǎn)ESBLs株對(duì)14種抗生素的耐藥率(%)比較。大腸桿菌(135株)ESBLs株(36)非ESBLs株(99)：AMP各占100%、81.9% ；CEZ各占98.6%、19%；CEC各占 97.6%、18.9% ；CXM 各占95.9%、18.4%； CTX各.59.1%.5%；CFP各占82.1%、6.9%；CRO各占76.8%、6.7%；ATM各占25.4%、3.5%；IMP各占2.3%、0.4 %；AMK各占51.4%、8.7 %；CIP各占86.7%、77.3%；AMX/CX各占62.4%、9.9%；CFP/ SU各占51.2%、7.5%；CTX/CA各占54.2%、6.3%。

肺炎克雷伯菌(206株)ESBLs株(50) 非ESBLs株(156)：AMP各占100% 、99.8%；CEZ各占95.3%、22.6%；CEC各占 94.2%、22.4%CXM各占 96.1%、24.7%；CTX各.55.0 %、9.6%；CFP各占90.1%、15.5 %；CRO各占86.6%、16.4%；ATM各占81.4%、15.8 %；IMP各占1.7%、1.5%；AMK各占87.5%、16.7%；CIP各占45.3%、15.5%；AMX/CX各占67.4%、11.7%；CFP/SU各占60.7%、10.5% ；CTX/CA各占63.5%、7.8%。

2.3 產(chǎn)ESBLs(86)株的病房分布 產(chǎn)ESBLs(86)株主要分布在重癥病房 ICU占27.2%；腦外占18.1%；普外占14.8% ；CCU占14.5%；呼吸內(nèi)占13.3 %；泌尿內(nèi)占6.8%；內(nèi)分泌占2.9%；消化內(nèi)占2.4%。

3 討論

細(xì)菌耐藥性的機(jī)制：①滅活酶：主要為 β-內(nèi)酰胺酶 (200多種), 使抗生素失效。②靶位改變：與抗生素結(jié)合靶位的改變, 使抗生素作用下降。③細(xì)菌膜通透性的改變：使抗生素不能或很少進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)到達(dá)作用靶位。細(xì)菌耐藥性的發(fā)展從醫(yī)院內(nèi)菌株(如腸桿菌科、金黃色葡萄球菌)到醫(yī)院外菌株(如肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、淋球菌), 其耐藥性從對(duì)單種藥物耐藥發(fā)展至多重耐藥, 例如金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素耐藥;ESBL菌株對(duì)多種常用抗生素耐藥。本組資料顯示大腸桿菌和肺炎克雷伯菌中的多數(shù)產(chǎn)ESBLs株對(duì)第三代頭孢菌素、氨曲南等耐藥, 此外, 近半數(shù)或以上的產(chǎn)ESBLs株對(duì)AMK和CIP耐藥, 但對(duì)亞安培南和頭孢西丁則多數(shù)顯示敏感。因此ESBLs株的藥物敏感性試驗(yàn)對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥有重要意義。

自從1983年德國(guó)報(bào)道首例產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌以來(lái)［3］, ESBLs產(chǎn)生菌導(dǎo)致的耐藥性已日益成為臨床治療的問(wèn)題。它是革蘭氏陰性桿菌對(duì)第三代頭孢菌素及單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥的最重要和常見(jiàn)的機(jī)制之一。本組資料顯示, 非ESBLs組菌株對(duì)受試抗生素均較ESBLs組顯著敏感, 因此,臨床實(shí)驗(yàn)室有必要將其作為常規(guī)檢測(cè), 以便及時(shí)給臨床報(bào)告,從而指導(dǎo)臨床合理用藥。

產(chǎn)ESBLs株菌多分布在重癥病房, 可能與這些病房的抗生素應(yīng)用及患者情況有關(guān)。

β-內(nèi)酰胺酶抑制劑CA、SUL等對(duì)于ESBLs具有抑制作用, 可用于產(chǎn)ESBLs菌感染的治療。本研究結(jié)果顯示, 亞安培南作用最強(qiáng), 這與文獻(xiàn)報(bào)道的相一致［4,5］。因此, 它是治療產(chǎn)ESBLs感染的首選藥物。在臨床治療產(chǎn)ESBLs菌感染時(shí)不宜選用第三代頭孢菌素, 應(yīng)根據(jù)感染部位、感染嚴(yán)重程度及患者情況合理選用有效抗菌藥物。此外, 臨床上應(yīng)嚴(yán)格掌握和限制使用第三代頭孢菌素, 以減輕抗生素的選擇壓力,避免醫(yī)院內(nèi)產(chǎn)ESBLs菌株的產(chǎn)生和流行。

［1］ Philippon A, Labia R, Jacoby G.Extended-spectrum betalactamases. Antibimicrobial Agents and Chemotherapy.1989.33(8):1131-1136.

［2］ Natonal Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibily testing. Approval standard M100-S9. Pennsylvania: NCCLS.1999:72-75.

［3］ Jacoby G A, Medeiros A A.More extended-spectrum betalactamases.Antibimicrobial Agents and Chemotherapy.1991.35(9).1697-1704..

［4］ Livermore D M. β-lactamase-mediated resistance and opportunities for its control.Journal of Antimicrobial Chemotherapy.1998.41(4).25-41.

［5］ Siro D.Extended-spectrum beta-lactamases.Journal of Antimicrobial Chemotherapy .1995.36(1).19-34.

114014 遼寧省鞍山市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科