李方超 靳會(huì)敏 佟 倩

(吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院心血管內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

機(jī)體內(nèi)的抗凝系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，當(dāng)凝血系統(tǒng)被激活占優(yōu)勢(shì)時(shí)，則出現(xiàn)血栓栓塞性疾病。在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮重要抗凝作用的3個(gè)體系：抗凝血酶、蛋白C(PC)系統(tǒng)和組織因子途徑抑制物。PC和蛋白S(PS)與凝血酶調(diào)節(jié)蛋白(TM)和活化PC抑制物(APCI) 共同組成PC系統(tǒng)，在抗凝過程中起重要作用。人類基因組中存在著廣泛的多態(tài)性，最簡(jiǎn)單的多態(tài)形式是發(fā)生在基因組中的單個(gè)核苷酸的替代，即單核苷酸多態(tài)性(SNP)。通過探討靜脈血栓栓塞(VTE)患者PS和PC基因SNP，明確PS和PC基因多態(tài)性與VTE的關(guān)系，進(jìn)一步明確中國人VTE的主要致病基因。

1 PC和PS的功能

PC是維生素K依賴性的絲氨酸蛋白酶原，主要由肝臟合成，是重要的抗凝物質(zhì)。成熟的PC在結(jié)構(gòu)上分成3個(gè)區(qū)域：(1)結(jié)合鈣離子的羧基谷氨酸(Gla)區(qū)域；(2)2凝血酶-TM復(fù)合物激活PC的2個(gè)表皮生長(zhǎng)因子(EGF)同源區(qū)域；(3)PC的活性區(qū)域〔1〕。PC由內(nèi)皮細(xì)胞的凝血酶和血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合體激活成為活化蛋白(APC)，PS是PC的輔助因子，是依賴維生素K的單鏈糖蛋白，主要由肝臟合成，可與PC結(jié)合，形成“APC-PS”復(fù)合體，該復(fù)合體使得凝血因子Va、Ⅷa更易被APC降解〔2〕。此外，PC還能夠抑制炎癥介質(zhì)的釋放，參與機(jī)體抗炎及抗細(xì)胞凋亡作用〔3〕。

2 PC和PS的基因結(jié)構(gòu)

PC基因位于2q13～q14，由9個(gè)外顯子(exon)和8個(gè)內(nèi)含子(intron)組成，全長(zhǎng)11.2 kb，由蛋白編碼區(qū)(exon 29)、5′端不翻譯區(qū)(exon 1加21bp exon 2)和294 bp的 3′端不翻譯區(qū)(exon 9)組成。具有轉(zhuǎn)錄活性的PS基因(PSa或PROSl基因)，位于染色體3P11.1～11.2上，DNA全長(zhǎng)80 kb，含15個(gè)外顯子和14個(gè)內(nèi)含子及6個(gè)重復(fù)的Alu序列。PS基因mRNA長(zhǎng)約4 kb，由一個(gè)5′非翻澤區(qū)、一個(gè)蛋白編碼區(qū)以及3′非翻譯區(qū)組成。

3 PC和PS基因SNP

SNP是人類基因組DNA序列變異的主要形式，是決定人類疾病易感性及藥物反應(yīng)性個(gè)體差異的重要因素。SNP廣泛存在于人類基因組中的編碼序列以及非編碼序列上。位于編碼區(qū)內(nèi)的SNP(cSNP)比較少，但在遺傳性疾病中卻有重要意義。cSNP又可分為2種：一種是同義cSNP,即SNP所致的編碼序列的改變并不影響其所翻譯的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，突變堿基與未突變堿基的含義相同；另一種是非同義cSNP,指堿基序列的改變可使以其為模板翻譯的蛋白質(zhì)序列發(fā)生改變，從而影響了蛋白質(zhì)的功能。這種改變常是導(dǎo)致生物性狀改變的直接原因。cSNP中約有一半為非同義cSNP。SNP是二等位基因，有利于發(fā)展自動(dòng)化技術(shù)篩選或檢測(cè)SNPs,從而使得檢測(cè)PC和PS基因SNPs更為便捷，在基因水平上尋找VTE病因并設(shè)計(jì)個(gè)體化的最佳治療方案。

4 PC和PS基因突變數(shù)據(jù)庫

SNP為基因突變提供基礎(chǔ)，PC和PS基因突變導(dǎo)致PC和PS缺陷，與靜脈血栓形成有關(guān)。目前根據(jù)Reistma〔4〕的統(tǒng)計(jì),PC缺陷病例已達(dá)300多例，涉及160多種突變。PC缺陷屬于常色體顯性遺傳疾病，可分為Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅰ型缺陷PC總量和抗凝活性都降低；Ⅱ型缺陷是表達(dá)量正常，但抗凝血活性下降。PS基因突變數(shù)據(jù)庫登記的PS基因突變有180多種，PS缺陷屬常染色體顯性遺傳,分為3型：Ⅰ型是總的PS和游離的PS水平均降低；Ⅱ型主要是PS的功能活性降低，而總的及游離的PS水平仍正常；Ⅲ型以游離PS水平降低為顯著。吳瑛婷等〔5〕發(fā)現(xiàn)復(fù)合雜合性PC基因突變(R178W和D255H、L-34P和T295I)，使PC分泌障礙和細(xì)胞內(nèi)降解，導(dǎo)致Ⅰ型遺傳性PC缺陷癥。周榮富等〔6〕發(fā)現(xiàn)PC基因C3135G、T6128G、6161～6163或6164～6166AAG缺失，分別導(dǎo)致C64W、F139V、K150d，從而導(dǎo)致PC缺陷。葉絮等〔7〕發(fā)現(xiàn)(exon 3)5540位堿基的G-A的雜合突變和位于(exon 7)10230位堿基C-T的雜合突變，導(dǎo)致E29K和R147W兩種錯(cuò)義突變，導(dǎo)致PC缺陷。Lind等〔8〕報(bào)道Ser270Leu突變和Asp180Gly突變〔9〕可導(dǎo)致Ⅰ型PC缺陷癥。Song等〔10〕發(fā)現(xiàn)Val297Met導(dǎo)致突變蛋白在細(xì)胞內(nèi)快速降解，導(dǎo)致Ⅰ型PC缺陷癥。Millar等〔11〕發(fā)現(xiàn)Gly347Ala突變導(dǎo)致I型PC缺陷,Trp380Gly導(dǎo)致Ⅱ型PC缺陷癥。Heerlen多態(tài)性位點(diǎn)(Ser460Pro)造成Ⅰ型PS缺陷癥,Beauchamp等〔12〕調(diào)查蘇格蘭人群發(fā)現(xiàn)，Heerlen多態(tài)性位點(diǎn)是造成遺傳性PS缺陷最普遍的原因。Leroy-Matheron等〔13〕研究發(fā)現(xiàn)PROS1(exon 15)2148A-G突變使血漿PS濃度下降。Espinosa-Parriua 等〔14〕發(fā)現(xiàn)PROS1(exon 10)TCA-TGA突變，導(dǎo)致Ⅲ型PS缺陷。Suzuki等〔15〕發(fā)現(xiàn)PROS1(exon 10)TGG-TAG突變，導(dǎo)致Ⅲ型PS缺陷。劉麗等〔16〕發(fā)現(xiàn)PROS1(exon 10)上第163位核苷酸發(fā)生G-T突變，在蛋白質(zhì)合成過程中絲氨酸被終止密碼子替代(Ser-stop)，導(dǎo)致Ⅲ型PS缺陷。于麗俠等〔17〕發(fā)現(xiàn)ROS1 Tl378C和K196E〔18〕多態(tài)性與新疆地區(qū)漢族人肺栓塞的發(fā)生可能有關(guān)。葉絮等〔19〕發(fā)現(xiàn)PROS1(exon 10)發(fā)生了C82792T雜合點(diǎn)突變，即R314C雜合突變，導(dǎo)致PS缺陷癥。

通過檢測(cè)VTE患者PC和PS基因SNP，明確PC和PS基因多態(tài)性與VTE的關(guān)系，進(jìn)一步明確中國人VTE的主要致病基因，并設(shè)計(jì)個(gè)體化的最佳治療方案。并且可以建立中國人PC和PS基因突變數(shù)據(jù)庫，將這些致病基因制成基因探針，便于篩選出高?；颊?，采取多種預(yù)防措施，防病于未然，減少該病的發(fā)病率及死亡率。

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