金曉東，張 杰，顧正兵*

(1.中國人民解放軍第一六一醫(yī)院藥械科，湖北武漢 430010;2.江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司，江蘇泰州 225300)

大葉紫珠Callicarpa macrophylla Vahl為馬鞭草科紫珠屬植物，是《中國藥典》2010年版一部新增品種，具有散瘀止血、消腫止痛的功效［1］。目前國內(nèi)外關(guān)于大葉紫珠化學(xué)成分的研究較少，Singh等［2］用GC/MS法對大葉紫珠的葉子和果實(shí)中提取的揮發(fā)油進(jìn)行了研究，表明揮發(fā)油中含有豐富的芹子烯類化合物。潘萍等［3］對其脂溶性成分(乙酸乙酯部位)進(jìn)行了研究，分離得到了4個(gè)萜類成分和2個(gè)甾醇化合物，但未對醇溶性成分進(jìn)行研究;Lu等［4］從其水溶部分分離得到4個(gè)酚酸類化合物，但未得到黃酮類化合物;周嵩煜等［5］從其水溶性部分僅分離得到一個(gè)主要成分，鑒定為毛蕊花糖苷?！吨袊幍洹?010年版規(guī)定以毛蕊花糖苷作為大葉紫珠的質(zhì)控指標(biāo)，而許多中藥如肉蓯蓉、鮮地黃等藥材均含有毛蕊花糖苷，且毛蕊花糖苷含有量很高，顯然以毛蕊花糖苷作為其指標(biāo)性成分不具特征性，不能全面的控制此藥材的質(zhì)量及合理開發(fā)該藥。為了更好地探究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找其止血活性成分，本研究對大葉紫珠水溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。

1 儀器與試藥

核磁共振儀 (Varian INOVA-400型，TMS為內(nèi)標(biāo))，制備型高效液相色譜儀 (Waters Delta Prep 4000，VWD)Sephadex LH-20(美國 GE公司)，薄層色譜及柱色譜用硅膠 (青島海洋化工有限公司)。液相用甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

大葉紫珠藥材來源于貴州省順義，經(jīng)嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院王峻副教授鑒定為Callicarpa macrophylla Vahl的莖葉。

2 提取與分離

取大葉紫珠的干燥葉10 kg，剪碎，以70%的甲醇回流提取3次 (每次15倍量，提取2 h)。合并提取液并減壓濃縮得到甲醇提取物，將甲醇提取物分散于水中成懸濁液，依次用石油醚-乙酸乙酯(1∶1)、正丁醇萃取，濃縮得到石油醚-乙酸乙酯(1∶1)部分 (385.4 g)和正丁醇部分 (264.5 g)。正丁醇部分經(jīng)硅膠柱色譜粗分，依次用石油醚-乙酸乙酯 (5∶1～2∶1)(分離低極性部分)、乙酸乙酯-甲醇 (10∶1～2∶1)(中極性部分)、乙酸乙酯-甲醇-水 (高極性部分)梯度洗脫，得到9個(gè)流份 (Fr.1～Fr.10)。由于色素較多以及高極性部分分離效果差，將Fr.4-7合并后以三氯甲烷-甲醇-水梯度洗脫，薄層檢測，得到5個(gè)流份。各部分再反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20色譜柱以及制備液相分離純化得到化合物1(32.0 mg)，2(101.4 mg)，3(82.4 mg)，4(105.3 mg)，5(129.1 mg)，6(202.4 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:黃色粉末 (甲醇)，易溶于水。EIMS顯示分子離子峰為610，結(jié)合1H-NMR和13CNMR譜確定分子式為C27H30O16。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.54(1H，s，5-OH)，6.42(1H，s，H-6)，6.49(1H，s，H-8)，7.70(1H，s，H-2')，6.90(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.55(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，5.05(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.55(1H，s，H-1″')，1.11(3H，d，J=6.4 Hz，H-6″')。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:147.58(C-2)，136.42(C-3)，176.22(C-4)，160.38(C-5)，98.88(C-6)，162.74(C-7)，94.42(C-8)，155.81(C-9)，104.90(C-10)，121.96(C-1')，115.80(C-2')，145.20(C-3')，147.84(C-4')，115.49(C-5')，120.22(C-6')，100.65(C-1″)，73.27(C-2″)，76.44(C-3″)，69.76(C-4″)，75.74(C-5″)，66.20(C-6″)，100.15(C-1″')，70.93(C-2″')，70.44(C-3″')，72.22(C-4″')，68.42(C-5″')，17.86(C-6″')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［6-7］對照基本一致，鑒定為槲皮素-7-O-蕓香糖苷 (quercetin-7-O-rutinoside)，首次從該植物中分離得到。

化合物2:黃色無定型粉末 (甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.45(1H，s，H-6)，6.72(1H，s，H-3)，6.78(1H，s，H-8)，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，7.44(1H，s，H-6')，7.42(1H，s，H-2');12.95(1H，s，H-5)，5.07(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，另外在 δ:9.0 ～10.0之間有兩個(gè)酚羥基信號。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:157.05(C-2)，103.30(C-3)，181.95(C-4)，161.25(C-5)，99.71(C-6)，164.60(C-7)，94.90(C-8)，121.55(C-1')，113.70(C-2')，145.88(C-3')，150.041(C-4')，116.12(C-5')，119.25(C-6')，99.71(C-1″)，73.27(C-2″)，76.50(C-3″)，69.78(C-4″)，77.30(C-5″)，60.82(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［8］ 對照基本一致，鑒定為木犀草苷 (luteoloside)。

化合物 3:黃色粉末(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:6.74(1H，s，H-3)，6.39(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.72(1H，s，H-8)，7.43(1H，s，H-2')，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，7.45(1H，s，H-6')，5.24(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.61(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″')，3.20～3.90(m，糖基氫)，1.12(3H，d，J=6.4Hz， rha-CH3)。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ:164.63(C-2)，181.95(C-4)，161.30(C-5)，162.67(C-7)，157.10(C-9)，121.55(C-1')，113.68(C-2')，145.90(C-3')，150.04(C-4')，116.18(C-5')，119.26(C-6')，99.46(C-1″)，77.34(C-2″)，77.14(C-3″)，69.90(C-4″)，76.57(C-5″)，60.71(C-6″)，100.60(C-1″')，70.54(C-2″')，70.68(C-3″')，72.07(C-4″')，68.44(C-5″')，18.14(C-6″')。與文獻(xiàn) ［9-10］報(bào)道木犀草素-7-O-新橙皮糖苷數(shù)據(jù)一致，鑒定為木犀草素-7-O-新橙皮糖苷 (luteolin-7-O-neohesperidoside)，首次從該植物中分離得到。

化合物 4:黃色針晶(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:6.21(1H， d， J=2.0 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.56(1H，s，H-2')，6.85(1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，7.57(1H，d，J=8.8 Hz，H-6')，5.44(1H，d，J=8.8 Hz，H-1″)，12.61(1H，s，OH-5)，10.42(1H，s，OH-7)，9.60(1H，s，OH-3')，9.10(1H， s， OH-4')。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ:156.45(C-2)，133.51(C-3)，177.55(C-4)，161.35(C-5)，98.75(C-6)，164.22(C-7)，93.60(C-8)，156.33(C-9)，104.11(C-10)，121.68(C-1')，116.32(C-2')，144.89(C-3')，148.54(C-4')，116.35(C-5')，121.31(C-6')，101.14(C-1″)，74.23(C-2″)，76.66(C-3″)，70.14(C-4″)，77.59(C-5″)，61.14(C-6″)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道異槲皮苷數(shù)據(jù)一致，鑒定該化合物為異槲皮苷 (isoquercitrin)，首次從該植物中分離得到。

化合物5:淺黃色針狀結(jié)晶 (甲醇)，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.52(1H，d，J=16.4 Hz，H-2)，8.12(1H，d，J=16.4 Hz，H-3)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:170.97(C-1)，125.84(C-2)，157.54(C-3)，119.65(C-1')，141.46(C-2')，117.08(C-3')，132.78(C-4')，123.65(C-5')，128.86(C-6')，102.47(C-1″)，74.91(C-2″)，78.19(C-3″)，71.37(C-4″)，78.26(C-5″)，62.39(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］ 對照基本一致，鑒定為反式草木樨苷 (trans-melilotoside)，為首次從該植物中分離得到。

化合物 6:白色無定型粉末，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.91(1H，d，J=16.0 Hz，H-α')，7.46(1H，d，J=16.0 Hz，H-β')，4.35(1H，d，J=8.0 Hz，H-1″)，5.04(1H，s，H-1″')。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:129.38(C-1)，116.46(C-2)，145.12(C-3)，143.67(C-4)，115.63(C-5)，119.68(C-6)，70.68(C-α)，35.15(C-β)，125.71(C-1')，114.88(C-2')，145.61(C-3')，148.59(C-4')，115.95(C-5')，121.50(C-6')，113.82(C-α')，145.71(C-β')，165.80(C-γ')，102.41(C-1″)，74.68(C-2″)，79.26(C-3″)，69.39(C-4″)，74.68(C-5″)，60.93(C-6″)，101.30(C-1″')，70.60(C-2″')，70.33(C-3″')，71.89(C-4″')，68.82(C-5″')，18.23(C-6″')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13-14］對照基本一致，鑒定為類葉升麻苷 (acteoside)。

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