徐志南

（江蘇省濱?？h五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，江蘇 濱海 224532）

亳菊總黃酮類的抗氧化活性研究

徐志南

（江蘇省濱?？h五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，江蘇 濱海 224532）

目的研究亳菊總黃酮類的抗氧化活性。方法采用乙醇提取法，提取毫菊中的總黃酮類，以羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽為材料，采用Fenton法測定亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽清除率的影響；以卵黃脂蛋白脂質(zhì)為材料，采用Decker法測定亳菊總黃酮類對卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響。結(jié)果亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強(qiáng)，對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強(qiáng)。結(jié)論亳菊總黃酮類化合物具有很好的抗氧化能力。

亳菊；總黃酮類；抗氧化活性；清除率

菊花為我國傳統(tǒng)用藥，其“苦、辛，微寒”，具有“清熱解毒、平肝”之功效[1]。菊花中主要含萜類和揮發(fā)油、黃酮類化合物等生物活性物質(zhì)?，F(xiàn)代研究表明，菊花黃酮具有廣譜抗菌、抗病毒、降壓、增加冠脈血流量、清除活性氧自由基等生理活性。亳菊(C. morifolium Ramat‘Boju’)主產(chǎn)于安徽亳州市辛集、大寺、十九里鎮(zhèn)等地，為藥用菊花的主要來源之一，充分開發(fā)利用亳菊中的黃酮類成分具有十分重要的現(xiàn)實(shí)經(jīng)濟(jì)意義。本研究通過乙醇提取法，提取毫菊中的總黃酮類，采用Fenton和Decker法測定亳菊總黃酮類對羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽的清除作用和對卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響，旨在為深入開展亳菊總黃酮類研究、拓寬亳菊綜合利用途徑奠定理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料：①材料：亳菊是購買于太和縣醫(yī)藥公司。②主要儀器：HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋；紫外燈；FA/JA電子天平；UV-757CRT型紫外可見分光光度計(jì)；微量定量移液器。③主要試劑：蘆?。皇兔?；乙醇；三氯化鋁；氫氧化鈉；硝酸鋁；亞硝酸鈉均為分析純。

1.2 方法：①Fe2+清除率測定：在各試管中加入不同質(zhì)量濃度的亳菊總黃酮類溶液，空白對照用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇，陽性對照用等質(zhì)量濃度的EDTA代替樣品。再分別加入2 mmol/L的FeSO4 0.1 mL和5 mmol/L的Ferrozine 0.2 mL，最后各管用蒸餾水補(bǔ)至5 mL，室溫放置20 min，于562 nm處測定吸光度，根據(jù)吸光度的減少程度計(jì)算亳菊總黃酮類對Fe2+的螯合率。②對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用：用0.1 mol/L pH值7.4的PBS緩沖液配制體積分?jǐn)?shù)為3.85%的卵黃懸液，分別吸取該懸液0.2 mL加入不同質(zhì)量濃度的樣品，空白對照為體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇。各管再加入0.1 mL 25 mmol/L FeSO4，用pH值7.4的PBS補(bǔ)充至2 mL，37 ℃恒溫震蕩15 min。取出后分別加入0.5 mL 20%的三氯乙酸，3500 r/min離心10 min。分別吸取上清液2 mL于試管中，加入0.28%的硫代巴比妥酸1 mL，加塞，放入沸水浴中15 min。冷卻后于波長532 nm處測定吸光度，根據(jù)吸光度計(jì)算抑制率。同時(shí)以等質(zhì)量濃度的BHT作為陽性對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：得到回歸方程為：Y=12.093X-0.0009，R2為0.9990。蘆丁濃度在0.008～0.048 mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度A之間有較好的線性關(guān)系。

2.2 亳菊黃酮類化合物對OH-的清除率的影響：羥基自由基屬于活性氧物種，是正常有氧代謝的副產(chǎn)物。在生理?xiàng)l件下，能導(dǎo)致生物體內(nèi)DNA，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)氧化損傷。此外羥基自由基不僅破壞細(xì)胞膜的通透性，引起細(xì)胞內(nèi)外離子濃度失衡，而且可抑制細(xì)胞間隙通訊，使細(xì)胞信息傳遞通路發(fā)生障礙。據(jù)報(bào)道，中藥來源的黃酮可以有效地清除體內(nèi)過剩的活性氧自由基，保護(hù)細(xì)胞和線粒體的正常結(jié)構(gòu)和功能，防止對身體的傷害。亳菊黃酮類化合物對羥基自由基具有較高的清除率，隨著黃酮濃度的增加，其清除羥基自由基的能力進(jìn)一步增強(qiáng)。在同等條件下，亳菊黃酮類化合物對羥基自由基的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

2.3 毫菊黃酮類化合物對NO2-的清除率的影響：亞硝胺是一類重要的強(qiáng)致癌物質(zhì)，而亞硝酸鹽是亞硝胺合成的前體物質(zhì)。因此，阻斷亞硝胺的合成或清除亞硝酸鹽是防止癌癥的有效途徑之一。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，毫菊黃酮類化合物對亞硝酸鹽具有較高的清除率，隨著毫菊黃酮類化合物質(zhì)量濃度的增大，對亞硝酸鹽的清除作用增強(qiáng)，呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。在同等條件下，毫菊黃酮類化合物對亞硝酸鹽的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

2.4 亳菊黃酮類化合物對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化抑制的影響：卵黃中以卵黃脂蛋白溶液為脂質(zhì)過氧化體系，測定了亳菊黃酮類黃酮類化合物所脂質(zhì)過氧化的抑制作用。亳菊黃酮類化合物對Fe2+誘導(dǎo)的卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化有較強(qiáng)的抑制作用，并且隨著其質(zhì)量濃度的增加，抑制率逐漸增大。在同等質(zhì)量濃度水平下亳菊黃酮類化合物對卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用強(qiáng)于BHT。

3 討 論

大量研究證實(shí)，黃酮類化合物可通過酚羥基與自由基反應(yīng)生成較穩(wěn)定的半醌式自由基，從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，能有效地阻止脂質(zhì)過氧化引起的細(xì)胞破壞[2]，起到天然抗氧化劑的功效。本實(shí)驗(yàn)采用乙醇浸提方法提取中毫菊中的黃酮類化合物，并考察亳菊總黃酮類的體外抗氧化的作用。通過四種方法來測定亳菊總黃酮類化合物的抗氧化能力，觀察亳菊對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除率和對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用。結(jié)果表明，亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強(qiáng)，對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強(qiáng)，亳菊總黃酮類化合物有很好的抗氧化能力。

[1] 楊建雄.連翹葉黃酮的體外抗氧化作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2007,19(1):97-99.

[2] 朱慧,馬瑞君,吳雙桃,等.薇甘菊總黃酮的提取及清除羥自由基活性的測定[J].食品科學(xué),2010,31(6):70-73.

R282.710.3

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1671-8194（2014）29-0060-02