■張為利 喻禮懷 肖天榮 劉正旭 徐登輝 李志兵 張艷云

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2.寶應(yīng)金雞禽業(yè)有限公司，江蘇寶應(yīng) 225815)

動(dòng)物生產(chǎn)過程產(chǎn)生的惡臭問題正逐漸引起關(guān)注和重視。生物除臭飼料添加劑漸漸成為減少畜舍惡臭的重要方法。絲蘭提取物(天然類固醇薩灑皂角苷，YUCCA)是我國批準(zhǔn)的唯一一種飼用除臭劑，減少畜舍氨氣效果明顯[1-3]。但資源有限，價(jià)格高。我國允許用作飼料添加劑的地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、側(cè)孢芽孢桿菌也有一定的減少畜舍氨氣的作用，但尚未見有以除臭為主要功效的飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品。

巨大芽孢桿菌1259（Bacillus.megaterium1259，BM1259）制劑，是一種正在研發(fā)的新型除臭調(diào)理飼料添加劑。張艷云等（2008）[4]研究表明，在產(chǎn)蛋雞日糧中添加2×106CFU/g的BM1259可降低冬季密閉雞舍空氣氨濃度53%～74%，硫化氫濃度55%～90%。霍永久等（2012）[5]研究顯示，BM1259制劑可以減少生長(zhǎng)肥育豬糞氨氣釋放量。但未見有BM1259與絲蘭提取物作用比較的研究報(bào)道。本試驗(yàn)旨在通過測(cè)定和分析日糧中添加了BM1259與添加了絲蘭素的蛋雞排泄物在不同存放時(shí)間氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度以及脲酶活性、pH值，比較在日糧中添加這兩種制劑對(duì)蛋雞排泄物存放過程中幾種指標(biāo)的變化及影響，為BM1259作為飼料添加劑除臭劑應(yīng)用提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

BM1259制劑由“新型生物飼料添加劑——BM1259的研制”課題組提供。BM1259制劑含活菌數(shù)為1010個(gè)/g。

絲蘭素采購自上海優(yōu)久生物科技有限公司，主要成分由絲蘭屬植物提取加工而成。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取飼養(yǎng)環(huán)境、養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖密度相近的兩棟320日齡京紅一號(hào)蛋雞，每棟8 000只，隨機(jī)選取一棟飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加150 g/t絲蘭素，另一棟飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加200 g/t BM1259制劑。基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)前和試驗(yàn)第28 d，在兩棟雞舍環(huán)境條件相同的位置分別選取4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9只雞，收集30 min內(nèi)排出未污染的新鮮排泄物。測(cè)得正式試驗(yàn)前兩組排泄物中氨氮濃度差異不顯著（P＞0.05）。

1.3 飼養(yǎng)管理

兩棟雞舍的大小結(jié)構(gòu)基本一致，采用3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只，按產(chǎn)蛋雞常規(guī)的生產(chǎn)管理程序?qū)蓷澋半u進(jìn)行飼養(yǎng)管理。每天觀察蛋雞采食、糞便以及精神狀況。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 樣本的采集與處理

試驗(yàn)第28 d上午9：00收集試驗(yàn)雞30 min內(nèi)排出未經(jīng)污染的新鮮排泄物。按每個(gè)重復(fù)混勻，每個(gè)重復(fù)取90 g蛋雞新鮮排泄物于500 ml的錐形瓶中，每個(gè)錐形瓶中加入270 ml生理鹽水，置于30℃水浴存放，并分別于 0、6、12、24、48、72、168 h 各取 10 ml溶液，4℃、4 000 r/min離心5 min，氨態(tài)氮測(cè)定離心10 min。取上清液測(cè)定其中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度及脲酶活性。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

NH3-N的測(cè)定采用靛酚藍(lán)比色法[6]；尿酸的測(cè)定采用試劑盒法（試劑盒購自南京建成生物工程研究所，編號(hào)為C012）；尿素氮測(cè)定采用試劑盒法（試劑盒購自南京建成生物工程研究所，編號(hào)為C013-1）；脲酶活性的測(cè)定采用靛酚藍(lán)比色法[7]。脲酶活性以每24 h每克糞樣產(chǎn)生的氨氮毫克數(shù)為單位；pH值測(cè)定采用Sartorius PB-21型酸度計(jì)[8]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2012軟件初步整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 13.0軟件中的獨(dú)立性T檢驗(yàn)進(jìn)行平均數(shù)顯著性比較，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中氨態(tài)氮濃度變化的比較(見圖1)

從圖1可以看出，BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中氨態(tài)氮濃度均隨著存放時(shí)間的增加而增長(zhǎng)，變化基本一致，上升的范圍在0.3～0.7 mg/g。0～12 h上升的速度較快，12～72 h保持在一定的水平，72 h～7 d間略有上升。兩組各時(shí)間段氨態(tài)氮濃度均差異不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中氨態(tài)氮濃度影響基本相同。

圖1 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時(shí)間段的氨態(tài)氮濃度

2.2 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中尿酸濃度變化的比較（見圖2）

圖2 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時(shí)間段的尿酸濃度

從圖2可以看出，BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中尿酸濃度變化趨勢(shì)一致，0～12 h略有上升，12～72 h尿酸濃度降低，72 h～7 d基本穩(wěn)定。兩組尿酸濃度除72 h BM1259組顯著低于絲蘭素組（P＜0.05）外，其他各時(shí)間段均差異不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中尿酸濃度影響趨勢(shì)基本相同；添加BM1259與添加絲蘭素相比，可明顯降低蛋雞排泄物存放72 h尿酸濃度。

2.3 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中尿素氮濃度變化的比較(見圖3)

圖3 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物

從圖3可以看出，在7 d存放期間BM1259組和絲蘭素組蛋雞排泄物中尿素氮的濃度均為先下降后上升，變化趨勢(shì)基本一致。0～24 h明顯下降，24 h～7 d逐漸上升。各時(shí)間段兩組尿素氮濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異都不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加BM1259與絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中尿素氮濃度變化影響基本一致。

2.4 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中脲酶活性變化的比較（見圖4）

圖4 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時(shí)間段的脲酶活性

從圖4可以看出，BM1259組與絲蘭素組蛋雞排泄物中的脲酶活性變化趨勢(shì)一致，0～12 h脲酶活性迅速下降,12～24 h迅速上升，24～72 h緩慢上升。兩組排泄物中脲酶活性范圍在1.244 2～2.297 3 μg/(g·h)之間，除存放168 h BM1259組極顯著高于絲蘭素組（P＜0.01）外，其他各時(shí)間點(diǎn)兩組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.5 日糧中添加BM1259與添加絲蘭素對(duì)蛋雞排泄物存放過程中pH值變化的比較(見圖5)

圖5 日糧中添加兩種不同制劑蛋雞排泄物存放過程中不同時(shí)間的pH值

從圖5可以看出，兩組蛋雞排泄物pH值隨著存放時(shí)間變化的趨勢(shì)基本一致，0～6 h時(shí)明顯下降，12～48 h時(shí)pH值上升，72～168 h又明顯下降。整個(gè)存放期間各時(shí)間點(diǎn)兩組間排泄物pH值差異均不顯著（P＞0.05），pH值變化范圍在6.60～7.06。

3 討論

梁國旗等（2009）[1]研究表明，絲蘭素能有效減緩氨態(tài)氮的產(chǎn)生，減少氨氣的散發(fā)，改善畜禽舍空氣環(huán)境。李曉剛（2012）[9]研究表明，BM1259能夠降低尿酸、尿素降解為氨態(tài)氮的速度，降低消化道內(nèi)容物pH值，從而減少蛋雞排泄物中氨氣氣體的釋放。程志斌等（2012）[10]在研究絲蘭提取物與枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞舍臭氣影響中的研究表明，絲蘭素與枯草芽孢桿菌組合使用能夠顯著降低雞舍氨氣的釋放，改善肉雞生長(zhǎng)性能。

雞舍氨氣的最主要來源是排泄物中含氮化合物在微生物作用下轉(zhuǎn)化為氨氣，特別是尿酸、尿素在微生物酶作用下降解為氨，而氨易揮發(fā)；而且排泄物中的pH值影響氨的揮發(fā)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在整個(gè)試驗(yàn)期間各時(shí)間段BM1259組與絲蘭素組排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值，除72 h BM1259組尿酸濃度顯著低于絲蘭素組、168 h BM1259組脲酶活性極顯著高于絲蘭素組外，其他各時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)兩組間差異均不顯著，而且各指標(biāo)變化趨勢(shì)基本一致。說明日糧中添加BM1259，對(duì)蛋雞排泄物存放過程中氨氮的釋放作用相近。

4 結(jié)論

日糧中添加BM1259與添加絲蘭素的蛋雞排泄物在30℃存放0～168 h期間排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值變化趨勢(shì)基本一致。

30 ℃存放0、6、12、24、48、72、168 h排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸濃度及脲酶活性和pH值，除72 h BM1259組尿酸濃度顯著低于絲蘭素組、168 h BM1259組脲酶活性極顯著高于絲蘭素組外，其他各時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)兩組間差異均不顯著。

本試驗(yàn)條件下，蛋雞排泄物中氨態(tài)氮、尿素氮、尿酸的濃度及脲酶活性范圍分別為0.294 3～0.746 6 mg/g，0.357 2～0.974 2 mg/g，0.371 6～1.539 9 mg/g和1.244 2～2.297 3 μg/(g·h)。