■ 潘樹德 李學(xué)儉 曹冬伸 張秋月 張 良

（1.沈陽工學(xué)院，遼寧撫順 113112；2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽 110161）

雙黃連是由金銀花、連翹、黃芩三味中藥按一定比例精制而提取制成的純中藥復(fù)方制劑。研究發(fā)現(xiàn)雙黃連具有抗菌、抗病毒、抗真菌、消炎、解熱、抗變態(tài)反應(yīng)、抗心律失常，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫等藥理作用，有清熱解毒、疏風(fēng)解表和增強(qiáng)肌體免疫功能的功效。

控制支原體病主要是通過藥物控制和疫苗免疫兩種方法。藥物控制已經(jīng)應(yīng)用許多年，之所以結(jié)果不一致，可能與毒株致病力的差異和抗藥性有關(guān)，故間歇用藥和輪換用藥很有必要。但必須認(rèn)識到，目前無論哪一種抗菌素，都難以將存在于雞群中的病原體根除。但隨著抗生素的應(yīng)用，耐藥性支原體菌株不斷產(chǎn)生，給治療上帶來很大困難。疫苗免疫目前國內(nèi)尚無成功的疫苗上市，國外已有滑液囊支原體滅活苗和滑液囊支原體H株活疫苗用于生產(chǎn)，價格較高。

本試驗使用平板凝集試驗對肉種雞飼養(yǎng)場進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，并且檢測中草藥雙黃連對雞支原體陽性率的控制，探索雙黃連對控制降低種雞支原體病陽性率的影響效果。進(jìn)一步評價中草藥雙黃連的臨床意義，對評價中草藥雙黃連的多重功效，篩選最佳配方；對臨床使用雙黃連控制雞支原體感染提供理論指導(dǎo)和實踐依據(jù)。

1 試驗一、肉種雞支原體感染流行病學(xué)調(diào)查

1.1 材料與方法

1.1.1 試驗動物及處理

2010年3月～2010年8月，對29家規(guī)?；夥N雞飼養(yǎng)場進(jìn)行了調(diào)查，并跟蹤記錄。隨機(jī)對5 800只肉種雞（均未免疫雞支原體苗）直接采取血樣，分離制成待檢血清，并進(jìn)行封存。而后用平板凝集試驗檢測支原體陽性率高低。

1.1.2 主要試劑及儀器

主要試劑：雞支原體診斷抗原、雞支原體陰性血清、陽性血清均購置于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

主要儀器：玻璃板、微量移液器、滅菌塑料吸頭、離心機(jī)。

1.1.3 試驗方法與步驟

將抽取血樣制成雞支原體待檢血清：對29家規(guī)模飼養(yǎng)場每家隨機(jī)抽取200只42日齡雞只的血液，經(jīng)離心、洗滌、懸浮、超聲波裂解、染色制成。從冰箱中取出抗原，恢復(fù)至室溫，使用前將抗原進(jìn)行充分搖勻。將玻璃板分別標(biāo)號為1、2、3、4，用移液器取25 μl抗原，分別滴在1、2、3、4號玻璃板；分別向1、2、3、4號玻璃板上滴25 μl待檢血清、生理鹽水，輕輕搖動玻璃板使其充分混合。室溫下，放置2 min，觀察結(jié)果。有明顯凝集塊，背景清亮者判為陽性，無凝集塊出現(xiàn)判為陰性，介于二者之間的判為可疑，可重復(fù)測定1次。1.2 結(jié)果與分析

1.2.1 各規(guī)模飼養(yǎng)場肉種雞支原體感染情況

先后抽樣調(diào)查29家規(guī)模飼養(yǎng)場的肉種雞5 800只，分為29組，每組200只肉種雞，血清，對29組進(jìn)行平板凝集試驗，測出29組雞毒支原體（MG）陽性感染率平均值33.38%，滑液支原體（MS）陽性感染率平均值50.69%（見表1），最高感染批次達(dá)100%。

表1 雞支原體（霉形體）檢測報告

1.2.2 肉種雞支原體感染情況分析

雞支原體病是由雞支原體引起雞的一類疾病總稱。有雞敗血支原體(MG)引起的慢性呼吸道病和滑膜支原體(MS)引起的雞傳染性滑膜炎。近年來，隨著雞只飼養(yǎng)密度的增大，雞支原體病發(fā)病率越來越高。支原體病在現(xiàn)代化肉種雞場屬常見疾病，也是最難以根除的，因為本病可以經(jīng)種蛋垂直方式傳播，也可通過水平傳播，可以單發(fā)，也可并發(fā)或者繼發(fā)，本病一年四季均可發(fā)生，因此本次調(diào)查采取一年時間不定期進(jìn)行調(diào)查。經(jīng)分析，飼養(yǎng)環(huán)境的差的飼養(yǎng)場，陽性感染率高，飼養(yǎng)環(huán)境優(yōu)越的飼養(yǎng)場，陽性率較低。

1.3 小結(jié)

使用平板凝集試驗對肉種雞飼養(yǎng)場進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，試驗結(jié)果表明，29家規(guī)模飼養(yǎng)場的肉種雞雞毒支原體陽性感染率平均值33.38%，滑液支原體陽性感染率平均值50.69%，最高感染批次達(dá)100%，說明雞群中的雞毒支原體和滑液支原體的陽性感染率均較高。

2 試驗二、雙黃連對肉種雞支原體陽性率的影響試驗

本試驗通過對肉種雞使用雙黃連粉劑，對比該藥物對兩組肉種雞（對照組和試驗組）支原體陽性率數(shù)據(jù)的影響，對肉種雞從8日齡開始給藥，分別檢測在不同日齡及轉(zhuǎn)群應(yīng)急條件下，該藥物對雞支原體的控制，探索雙黃連對控制降低種雞支原體病陽性率的影響，從而判定該藥物對控制雞支原體病的作用效果。

2.1 試驗材料

2.1.1 試驗動物

8日齡肉種雞（均未免雞支原體苗），共80只，分兩組，每組40只，由某牧業(yè)有限公司標(biāo)準(zhǔn)化肉種雞飼養(yǎng)場提供。

2.1.2 藥品及主要試劑

雙黃連粉劑。待檢血清（為翅下靜脈采血，離心、分離血清，并標(biāo)記，儲存于2～8℃冰箱內(nèi)待檢）；雞支原體平板凝集抗原、雞支原體陰性血清、陽性血清均購置于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。冰箱（BCD-230NJV型，蘇州三星電子公司）；平板凝集用玻璃片；移液器；滅菌牙簽；滅菌生理鹽水。

2.1.3 試驗方法

2.1.3.1 試驗日期

本試驗開始于2010年9月7日，最終于2011年4月11日結(jié)束。

2.1.3.2 飼養(yǎng)及免疫

免疫程序：3日齡新城疫弱毒苗滴眼；10日齡新城疫（禽流感二聯(lián)滅活苗頸部皮下注射）；12日齡法氏囊苗滴口，17日齡再重復(fù)1次；56日齡新城疫弱毒苗滴眼。

2.1.3.3 飼料

預(yù)混料選用帝斯曼飼料配制相應(yīng)全價料，按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼喂。

2.1.4 方法及步驟

2.1.4.1 試驗動物分組

共分兩組，分別為對照組和試驗組，每組40只。對照組正常飼養(yǎng)，不給予雙黃連藥劑，采取自由采食及飲水；試驗組按每天早晚100 g雙黃連粉劑兌400 kg水給藥，具體給藥方案見表2，同時也采取自由采食及飲水。

表2 試驗組給藥方案

2.1.4.2 試驗動物飼養(yǎng)觀察

每天觀察試驗組和對照組的飼養(yǎng)效果，注意呼吸道癥狀、發(fā)病率、康復(fù)時間、康復(fù)率等具體變化。

2.1.4.3 試驗步驟

對肉種雞實施翅下靜脈采血，并分離制作成待檢血清。

通過平板凝集試驗，對照組和試驗組的試驗動物分離制成的待檢血清進(jìn)行陰陽性對比，并記錄具體陰陽性雞只數(shù)。

通過計算得出兩組雞毒支原體和滑液支原體的陽性率，從而判定雙黃連粉劑對控制雞支原體病方面的實際效果。

根據(jù)以上判定標(biāo)準(zhǔn)，對實驗兩組肉種雞血清做平板凝集試驗，得出檢測結(jié)果見表3。

2.2 結(jié)果與分析

由表3可以看出，沒有給予雙黃連粉劑的對照組肉種雞在飼養(yǎng)過程中，雞毒支原體、滑液支原體的陽性率在8～11日齡分別為45%和50%，轉(zhuǎn)群期間12～65日齡分別為50%和60%，66～70日齡分別為50%和65%，106～111日齡分別為60%和80%，再次轉(zhuǎn)群后的112～142日齡分別為70%和80%，由此看出對照組肉種雞雞毒支原體、滑液支原體的陽性率隨日齡增加呈現(xiàn)上升的趨勢。而給予雙黃連粉劑的試驗組肉種雞雞毒支原體、滑液支原體的陽性率8～11日齡分別為40%和45%，轉(zhuǎn)群期間12～65日齡分別為30%和45%，66～70日齡分別為25%和40%，106～111日齡分別為10%和20%，再次轉(zhuǎn)群后的112～142日齡分別為0%和15%。由此看出給予雙黃連粉劑的試驗組肉種雞雞毒支原體、滑液支原體的陽性率隨日齡增加呈現(xiàn)下降的趨勢。

表3 雞支原體陽性率試驗數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

3.1 使用平板凝集試驗對肉種雞飼養(yǎng)場進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，試驗結(jié)果表明，29家規(guī)模飼養(yǎng)場的肉種雞雞毒支原體陽性感染率平均值33.38%，滑液囊支原體陽性感染率平均值50.69%，最高感染批次達(dá)100%，說明肉種雞群中的雞毒支原體和滑液囊支原體的陽性感染率均較高。

3.2 雙黃連粉劑可以有效的降低肉種雞雞毒支原體和滑液囊支原體的陽性率，對治療該病有良好的效果。