王 霞，王湘屏，徐 新

(1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院輸血科，湖南 衡陽 421001；2.衡陽市中心血站質(zhì)管科)

正確鑒定ABO血型對保障臨床輸血治療安全和療效有著極為重要的意義。ABO亞型約占總體人群的0.015％[1]，是ABO血型系統(tǒng)的特殊表現(xiàn)形式。主要是經(jīng)血型血清學(xué)試驗(yàn)證實(shí)ABO抗原性表達(dá)弱為主要特征的多種表型，是造成ABO血型鑒定正反定型不一致的重要原因之一。臨床實(shí)際工作中，對于ABO亞型的確診和臨床輸血相容性檢測更多地還是依靠血型血清學(xué)技術(shù)。因此，了解ABO血型系統(tǒng)中各種亞型血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)格局，有利于輸血技術(shù)人員正確判讀血型鑒定結(jié)果?，F(xiàn)將衡陽地區(qū)2006～2013年期間發(fā)現(xiàn)的Bx亞型伴抗-B產(chǎn)生病例的血型血清學(xué)特性與輸血治療方案進(jìn)行分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

2006～2013年本地區(qū)送衡陽市中心血站鑒定的，排除其他原因造成正反定型不符的血樣本2 261例。經(jīng)血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測，符合Bx亞型伴抗-B抗體產(chǎn)生反應(yīng)格局的患者標(biāo)本共5例。其中，產(chǎn)后大出血3例，年齡23～35歲；復(fù)合外傷1例，男性，53歲；消化道出血1例，男性，61歲。其中1例有輸血史，1例輸血史不祥，3例無輸血史。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑、抗-H單克隆抗體(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)。ABO、Rh(D)血型微柱凝膠檢測卡、抗人球蛋白檢測卡(長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)。4％ABO試劑紅細(xì)胞、不規(guī)則抗體篩查譜細(xì)胞(長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司)。

1.2.2 儀器 FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學(xué)專用離心機(jī)(長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司)。血型血清學(xué)離心機(jī)、水浴鍋等。

1.3 血型血清學(xué)檢測

1.3.1 微柱凝膠卡式法ABO血型正反定型 參照ABO、Rh(D)血型微柱凝膠檢測卡說明書進(jìn)行。

1.3.2 紅細(xì)胞ABH抗原及ABO血型系統(tǒng)抗體檢測(試管法) 取試管4支，分別標(biāo)記抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H并加入相應(yīng)血型試劑各1滴，然后加入患者3％～5％紅細(xì)胞懸液1滴；另取3支試管，分別用筆標(biāo)記A1c、Bc、Oc并加入患者血清各2滴和相應(yīng)4％ABO試劑紅細(xì)胞各1滴；分別置4℃和室溫下反應(yīng)后，放入離心機(jī)以1 000 rpm離心1 min，觀察結(jié)果。

1.3.3 不規(guī)則抗體篩查 將已標(biāo)記好的抗人球蛋白檢測卡分別加入被檢者血漿50 μL及0.8％不規(guī)則抗體篩查譜細(xì)胞各1滴，置37 ℃中孵育15 min，放入血型血清學(xué)專用離心機(jī)900 rpm，2 min后，1 500 rpm，3 min，離心觀察結(jié)果。

1.3.4 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 將患者經(jīng)3次洗滌后的壓積紅細(xì)胞用生理鹽水配置成0.8％的懸液，取50 μL加入抗人球蛋白檢測卡，放入血型血清學(xué)專用離心機(jī)900 rpm 2 min，1 500 rpm 3 min，離心后觀察結(jié)果。

1.3.5 吸收—放散試驗(yàn) 取2 mL受檢者壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水充分洗滌3次，棄去上清液。取等體積的抗-A、抗-B血型定型試劑與壓積紅細(xì)胞混合，置4 ℃冰箱吸收1 h，分離抗血清。將壓積紅細(xì)胞用足量的4 ℃生理鹽水充分洗滌5次，取最后一次洗液2滴分別加入4％ A1c、Bc各1滴，離心觀察，未出現(xiàn)凝集溶血反應(yīng)。將吸收后的壓積紅細(xì)胞加1 mL生理鹽水，于56 ℃水浴中放散10 min后(期間振蕩數(shù)次)，3 500 rpm離心1 min；取放散液各2滴，分別加入相應(yīng)的4 ％ A、B、O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴，振蕩混勻，1 000 rpm離心1 min，觀察結(jié)果。

1.3.6 唾液血型物質(zhì)凝集—抑制試驗(yàn) 將單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑和抗-H單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)化，以凝集強(qiáng)度(2+)為判定標(biāo)準(zhǔn)。取受檢者自然流出唾液5 mL，于3 500 rpm離心3 min，去雜質(zhì)后煮沸10 min，再3 500 rpm離心5 min，取上清液各1滴分別與標(biāo)化后的抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清和抗-H 1滴在室溫下進(jìn)行中和反應(yīng)10 min后，加入對應(yīng)的4％ A、B、O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴，振蕩混勻，1 000 rpm離心1 min觀察結(jié)果。

1.4 輸血治療

對血型鑒定正反定型不一致，經(jīng)血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測，符合Bx亞型伴抗-B抗體產(chǎn)生反應(yīng)格局的患者，在其進(jìn)行性大量失血合并失血性休克時(shí)，給予O型紅細(xì)胞、AB型血漿、AB型血小板配合性血液輸注治療。

2 結(jié) 果

2.1 血型血清學(xué)試驗(yàn)

本次研究對衡陽地區(qū)2006～2013年期間，2 261例ABO血型鑒定正反定型不符的血樣本，采用微柱凝膠卡式法和試管法進(jìn)行ABO、Rh(D)血型鑒定。其中ABO血型正反定型不符，正定型為O型；反定型A1c凝集4+，Bc不凝集或凝集±；Rh(D)陽性樣本共5例。不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)陰性。直接抗人球蛋白試驗(yàn)陰性。遂進(jìn)行吸收—放散試驗(yàn)、唾液ABH血型物質(zhì)測定等血型血清學(xué)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，具體結(jié)果見表1。

表1 血型血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

2.2 輸血策略和療效

2 261例血樣本經(jīng)血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測，發(fā)現(xiàn)符合Bx亞型伴抗-B抗體產(chǎn)生反應(yīng)格局的患者標(biāo)本共5例。根據(jù)臨床輸血指征，分別給予4～11單位O型紅細(xì)胞、300～2 100 mL AB型血漿和0～30單位AB型血小板配合性血液輸注治療，并在輸注血液制品后，進(jìn)行血紅蛋白、血小板、膽紅素和凝血功能等相關(guān)指標(biāo)監(jiān)測。各項(xiàng)檢測指標(biāo)顯示，患者輸血后血紅蛋白、血小板、纖維蛋白原均較輸血前有所提高，血清膽紅素未出現(xiàn)升高，凝血功能明顯改善，出血癥狀得到控制。

3 討 論

血型鑒定受到諸多因素干擾，包括疾病影響、臨床治療和生理因素、實(shí)驗(yàn)技術(shù)等原因[2]。ABO抗原的血型或變異型很多，常導(dǎo)致血型鑒定正反定型不一致，也給血型確認(rèn)工作帶來較大的困難。ABO亞型是指以遺傳為基礎(chǔ)，具有明確的血清學(xué)特點(diǎn)，將ABO血型系統(tǒng)進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)分的ABO血型。因年齡、疾病、妊娠等不可遺傳的因素造成的血型改變不能認(rèn)為是亞型；同樣，那些雖有基因改變，但并不影響血清學(xué)特點(diǎn)的ABO血型也不能稱為亞型[3]。根據(jù)抗原性表達(dá)強(qiáng)弱，在A抗原中主要為A1和A2，其他亞型不多見，B亞型一般分為B2、B3、BX、Bm、Bel。許志遠(yuǎn)等[4]研究結(jié)果顯示北京地區(qū)中國人群中B亞型高于A亞型，其中，ABO亞型中B亞型伴抗-B產(chǎn)生的比率為15.1％。本地區(qū)ABO亞型分布情況還有待于進(jìn)一步研究。

大多數(shù)ABO亞型均帶有不規(guī)則的ABO抗體，這些抗體通常很弱，并且多為冷抗體，很容易漏檢，可能被錯(cuò)誤定型。作為受血者，如果將亞型誤定為正常血型，同時(shí)又未能檢出這些抗體，很容易導(dǎo)致輸血反應(yīng)[5]。因此，臨床上血型鑒定出現(xiàn)正反定型不符或凝集強(qiáng)度不一致的現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)迅速查明原因。在排除試劑質(zhì)量、技術(shù)、藥物和人為因素后，正定型應(yīng)加做抗-H、抗-A1、抗-AB血清,反定型應(yīng)加做O細(xì)胞、A1細(xì)胞，同時(shí)進(jìn)行吸收—放散試驗(yàn)，檢測紅細(xì)胞弱A和弱B抗原,并進(jìn)行凝集—抑制試驗(yàn)檢測唾液中的血型物質(zhì)。

ABO血型亞型的常規(guī)分型鑒定，是基于以紅細(xì)胞表面抗原表位的多少及活性的強(qiáng)弱，以及該紅細(xì)胞對相應(yīng)抗體的吸收放散能力大小為理論依據(jù)的血型血清學(xué)方法。通常根據(jù)以下原則區(qū)分紅細(xì)胞ABO亞型：(1)紅細(xì)胞與抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB的凝集強(qiáng)度；(2)紅細(xì)胞上H物質(zhì)活性的強(qiáng)弱；(3)血清中是否存在抗-A1；(4)分泌型機(jī)體的唾液中ABH物質(zhì)[6]。Bx亞型血清學(xué)共同特點(diǎn)是：Bx紅細(xì)胞與抗-B呈弱凝集反應(yīng)，有時(shí)甚至可不凝；與抗-AB凝集反應(yīng)增強(qiáng)，有時(shí)強(qiáng)于抗-B；H抗原表達(dá)強(qiáng)度近似O型紅細(xì)胞；血清中常有不規(guī)則抗-B；分泌型個(gè)體的唾液中有時(shí)可缺乏B物質(zhì)，僅有H物質(zhì)。

本次分析的5例患者，鹽水試管法正定型受檢者紅細(xì)胞與抗-A、抗-B不凝集；與抗-AB反應(yīng)時(shí)，4例出現(xiàn)弱凝集，1例不凝集；與抗-H凝集4+；反定型與A1c凝集4+，Bc不凝集。唾液ABH血型物質(zhì)測定存在血型物質(zhì)H，血型血清學(xué)表現(xiàn)基本符合Bx亞型伴抗-B抗體產(chǎn)生血清學(xué)格局。4℃增強(qiáng)試驗(yàn)結(jié)果似乎是正反定型一致，但實(shí)際是B抗原減弱，同時(shí)產(chǎn)生低反應(yīng)活性抗-B，

容易使血型誤定為O型，同時(shí)也為輸血制造了困難。

由于患者存在進(jìn)行性大出血，并出現(xiàn)失血性休克，而ABO亞型血型鑒定時(shí)需要做的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目較多，洗滌紅細(xì)胞成分的時(shí)間較長。依據(jù)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》第十條規(guī)定的Rh(D)陰性和其他稀有血型輸血原則，應(yīng)采用自身輸血、同型輸血或配合性輸血。在衡陽市中心血站的指導(dǎo)下，對患者予以配合輸注O型紅細(xì)胞、AB型血漿、AB型機(jī)采血小板治療，未出現(xiàn)輸血不良反應(yīng)。輸血后，進(jìn)行血常規(guī)、血清膽紅素和凝血功能復(fù)檢，患者血紅蛋白、血小板、凝血功能板等相關(guān)指標(biāo)實(shí)際升高值與輸注血量理論提升值基本吻合，膽紅素值未出現(xiàn)升高，凝血功能得到明顯改善，無輸血不良反應(yīng)，治療效果良好，痊愈出院。據(jù)此，在緊急情況下，對Bx亞型伴抗-B抗體產(chǎn)生患者采取應(yīng)急方式，進(jìn)行配合性輸血治療為搶救患者生命爭取時(shí)間是可行的,這也符合臨床搶救原則。

[1]邵超鵬，莊乃寶.血型變異型與臨床輸血[J].中國輸血雜志，2009，22(7)：591.

[2]蘭炯采，中橋，陳靜嫻.輸血免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:132-133.

[3]向東.ABO亞型的檢測[J].中國輸血雜志，2010，23(8):577.

[4]許志遠(yuǎn)，王濤.北京地區(qū)獻(xiàn)血人群ABO亞型研究[J].北京醫(yī)學(xué)，2013，35(8)：712.

[5]向東，劉熙.上海地區(qū)中國人群中ABO亞型的研究[J].中國輸血雜志,2006,19(1):25-26.

[6]李志強(qiáng).簡明臨床輸血理論與實(shí)踐[M].上海：上海世界圖書出版公司，2010:253.