邱雪冰，趙瑾，徐江

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，石河子 832002）

多形性腺瘤是腮腺區(qū)最常見的良性腫瘤，該瘤生長較緩慢。極少發(fā)生遠處的轉(zhuǎn)移，但具有一定的侵襲性，其包膜不完整易復(fù)發(fā)，臨床手術(shù)成功治療病例仍然有2%-3%的復(fù)發(fā)率。多次復(fù)發(fā)或病程較長者可發(fā)生惡變并轉(zhuǎn)移[1]。

通過對CD44v6、E-cadherin和ki-67蛋白質(zhì)與腮腺多形性腺瘤的相關(guān)性研究，發(fā)展新的手段來檢測腫瘤的轉(zhuǎn)移，有助于腫瘤的診斷和判斷預(yù)后，也有助于為臨床上采用有效的治療方法提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

材料取自石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院頜面外科2007-2012年多形性腺瘤手術(shù)標(biāo)本50例，均經(jīng)病理證實。所有病例術(shù)前均未進行任何抗腫瘤治療?；颊吣挲g19～76歲，平均年齡44歲，其中男性21例，女性29例。取瘤旁非瘤組織為對照。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)SP法 （過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶素卵白素法）染色,鼠抗人CD44v6、E-cadherin、ki-67及二抗均購于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng) 10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個蠟塊切成4-5μm的切片，共切5張，1張HE染色，1張作為陰性對照，其余3張分別CD44v6、E-cadherin、ki-67染色。陽性對照用已知陽性片，陰性對照用PBS代替一抗。

數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，各組間CD44v6、E-cadherin和ki-67表達強度的比較均采用Mann-Whitney U 檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 CD44v6與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.1.1 CD44v6 的陽性表達

光鏡下觀察，CD44v6染色以胞膜呈黃色或棕黃色為陽性反應(yīng)，隨機選取10個高倍視野（×400），每個高倍視野計數(shù)100個細胞，染色結(jié)果結(jié)合陽性率和著色強度進行半定量分析，由兩項積分相乘進行評分。多形性腺瘤中瘤體侵及包膜中CD44v6強陽性表達（圖1）；多形性腺瘤中腫瘤呈多結(jié)節(jié)狀生長CD44v6強陽性表達（圖2）。

圖1 多形性腺瘤瘤體侵包膜中CD44v6陽性表達（×200）Fig.1 Pleomorphic adenoma CD44v6 positive expression in tumors invade coated（×200）

2.1.2 各組的CD44v6的表達及比較

由表1可見，多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達CD44v6陽性率達100%，強陽性率為80%，瘤周非瘤組織表達CD44v6陽性率達17.6%，較前者低（Z=-8.821，P＜0.001）。

多形性腺瘤惡變組CD44v6陽性率較瘤周非瘤組織組高，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-5.883，P＜0.001）。

多形性腺瘤組CD44v6陽性率也較瘤周非瘤組織組高，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-8.408，P＜0.000）。多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組與復(fù)發(fā)傾向組CD44v6陽性表達兩組差異不顯著。

多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間CD44v6陽性表達差異也不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖2 多形性腺腫瘤呈多結(jié)節(jié)狀生長CD44v6陽性表達（×200）Fig.2 Polymorphism in the multiple nodular gland tumor growth CD44v6 positive expression(×200)

表1 各組CD44v6的表達強度（×200）Tab.1 Each group of CD44v6 expression intensity（×200）

2.2 E-cadherin與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.2.1 E-cadherin 的陽性表達

光鏡下觀察，E-cadherin染色以胞膜呈黃色或棕黃色為陽性反應(yīng)，隨機選取10個高倍視野（×400），每個高倍視野計數(shù)100個細胞，染色結(jié)果結(jié)合陽性率和著色強度進行半定量分析，由兩項積分相乘進行評分。多形性腺瘤惡變中E-cadherin強陽性表達（圖3）；多形性腺瘤中多形性腺瘤瘤體侵包膜中E-cadherin強陽性表達（圖4）。

圖3 多形性腺瘤惡變中E-cadherin陽性表達（×200）Fig.3 E-cadherin positive expression in malignant pleomorphic adenoma（×200）

圖4 多形性腺瘤瘤體侵包膜中E-cadherin陽性表達（×200）Fig.4 Pleomorphic adenoma tumors invade coated in E-cadherin positive expresssion（×200）

2.2.2 各組的E-cadherin的表達及比較

多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達E-cadherin陽性率達96%，強陽性率為76%，瘤周非瘤組織E-cadherin陽性表達率82%。多形性腺瘤組E-cadherin表達陽性率高于瘤周非瘤組織組，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-6.495，P＜0.000）。多形性腺瘤惡變組E-cadherin表達陽性率較瘤周非瘤組織高，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-5.839，P＜0.001）。 多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組相比較，兩組差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義 （Z=-3.422，P=0.001）。 多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間兩組差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.316，P=0.021）。 結(jié)果見表2。

表2 各組E-cadherin的表達強度（×200）Tab.2 The expression of goup E-cadherin intensity（×200）

2.3 ki-67與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.3.1 ki-67 的陽性表達

光鏡下觀察，Ki-67染色以胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)，陽性細胞百分率以細胞增殖指數(shù)（Proliferating Index，PI）表示。 多形性腺瘤惡變中Ki-67強陽性表達（圖5）；多形性腺瘤中多形性腺瘤瘤體侵包膜中Ki-67強陽性表達（圖6）。

2.3.2 各組的ki-67表達及比較

多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達Ki-67陽性率達73.8%，強陽性率為26.2%。多形性腺瘤組Ki-67表達陽性率明顯高于瘤周非瘤組織組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （Z=-6.335，P＜0.000）。多形性腺瘤惡變組Ki-67表達陽性率較瘤周非瘤組織高，差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義 （Z=-6.905，P＜0.001）。 多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （Z=-2.539，P=0.011）。多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（-2.382，P=0.017）。 結(jié)果見表 3。

圖5 多形性腺瘤惡變中Ki-67陽性表達（×200）Fig.5 Ki-67 posityve expression in malignant pleororphic adenoma（×200）

圖6 多形性腺瘤瘤體侵包膜Ki-67陽性表達（×200）Fig.6 Pleomorphic adenoma tumors invade coated in the positive expression of Ki-67（×200）

表3 各組Ki-67的表達強度Tab.3 Groups of strength of the expression of Ki-67（×200）

3 討論

CD44v6分子是一類具有高度異質(zhì)性單鏈膜細胞表面跨膜糖蛋白，主要參與細胞與基質(zhì)間的粘附，與細胞的遷移有關(guān)，屬于未分類的黏附分子。CD44v6在腫瘤細胞表面通常呈現(xiàn)異常表達,與腫瘤的復(fù)發(fā)有著密切相關(guān),在腫瘤的侵襲 、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中起著重要的作用[2-4]。本研究結(jié)果顯示，腮腺多形性腺瘤惡變組、復(fù)發(fā)傾向組及非復(fù)發(fā)傾向組CD44v6的陽性及強陽性率較高，表明CD44v6的表達與腮腺多形性腺瘤的轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性，CD44v6陽性患者的預(yù)后顯著較差。CD44v6參與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，但它并不是腫瘤轉(zhuǎn)移的必然因素，在發(fā)揮作用時，必定還要受到體內(nèi)許多條件的制約，在細胞培養(yǎng)和動物實驗研究中已經(jīng)證實CD44v6是一種轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。

E-cadherin是Ⅰ型cadherin的原型,是一種依賴于鈣離子的細胞間黏附分子,幾乎表達于所有上皮組織,對細胞間的連接和相互作用具有關(guān)鍵作用,其通過其細胞外的Ig結(jié)構(gòu)域間形成黏結(jié)結(jié)合，參與細胞間的黏附，維持組織結(jié)構(gòu)完整性和極性,其表達的下降與腫瘤的發(fā)生、分化、侵襲轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后不良有著密切的關(guān)聯(lián)[5]，被認為是參與腫瘤惡變以及轉(zhuǎn)移的重要蛋白[6-7]。本研究結(jié)果顯示，E-cadherin在多形性腺瘤惡變組強陽性率較高，多形性腺瘤惡變易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，瘤旁非瘤組織組E-cadherin表達陽性，是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期表現(xiàn)。大量的研究結(jié)果表明，E-cadherin表達下降或喪失與腫瘤低分化、高侵襲、高轉(zhuǎn)移和高復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)，是預(yù)示腫瘤進展及患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

Ki-67作為與細胞核增殖相關(guān)的抗原,是近年來研究最多、最具有前途的細胞增生標(biāo)記之一。細胞增殖活性是判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)之一，可以判斷腫瘤惡性程度及評估腫瘤的生物學(xué)行為。ki-67的檢測是目前用于檢測腫瘤細胞增殖活性的方法之一。本研究表明ki-67表達在多形性腺瘤組明顯高于瘤旁非瘤組織，說明ki-67可作為多形性腺瘤早期癌變指標(biāo)。許多研究表明，在人體的多種惡性腫瘤中，如胃癌、乳腺癌、卵巢癌以及膀胱癌等，不管腫瘤的大小、浸潤的深度和組織學(xué)類型如何，即便是早期病變，轉(zhuǎn)移的發(fā)生伴隨著K-67陽性指數(shù)的增加而增加[8]。

E-cadherin和ki-67與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，其表達與腮腺多形性腺瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān),可作為新的腫瘤標(biāo)志物,其表達對判斷預(yù)后有一定的價值，而CD44v6在腮腺多形性腺瘤組與瘤周非瘤組織組、多形性腺瘤惡變組與瘤周非瘤組織組有生物學(xué)意義。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤轉(zhuǎn)移一直是腫瘤研究的一個熱點。本研究結(jié)果顯示E-cadherin、ki-67更敏感，更具特異性，對腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有更有意義，可作為新的腫瘤標(biāo)志物，二者均可用于評估多形性腺癌的預(yù)后，指導(dǎo)治療有一定的價值。

[1]邱蔚六,張震康,王大章.口腔頜面外科理論與實踐[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1998:728-730.

[2]張樹民.腮腺多形性腺瘤146例臨床總結(jié)[J].口腔頜面外科雜志,2008,18(2):120-121.

[3]黃敏嫻,馬大權(quán),俞光巖,等.復(fù)發(fā)性涎腺多形性腺瘤的臨床與病理分析[J].現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,22(1):1-4.

[4]Matin T A,Harrison G,Mansel R E,et al.The role of CD44/ezrin complex in cancer metastasis[J].Crit Rev Oncol Hematol,2003,46(2):165-186.

[5]Imhof B A,Vollmers H P,Goodman S L,et al.Cell-cell interaction and polarity of epithelial cells:specific perturbation using a monoclonal antibody[J].Cell,1983,35(32)∶667-675.

[6]Tepass U,Truong K,Godt D,et al.Cadherins in embryonic and neural morphogenesis[J].NatRev Mol Cell Bio,2000,1(2)∶91-100.

[7]Yilmaz M,Christofori G.EMT,the cytoskeleton,and cancer cell in vasi on[J].Cancer MetastRev,2009,28(1):15-33.

[8]何艷姣,劉朝霞，李洪利，等.E-cadherin和Ki-67在結(jié)直腸癌組織中的表達及意義[J].腫瘤防治研究，2007，34（9）：699-703.