【摘 要】制作和保存馬匹冷凍精液，可以充分發(fā)揮優(yōu)秀種公馬的利用率，而且不受時(shí)間和地域的限制，同時(shí)也建立了優(yōu)秀種公馬的精子基因庫，對優(yōu)良馬匹的保種具有非常重要的意義，在生產(chǎn)實(shí)踐中可同時(shí)為大量授配母馬進(jìn)行輸精。

【關(guān)鍵詞】汗血馬；阿拉伯馬；種公馬；凍精制作；精子活力

馬匹的精液冷凍保存技術(shù)，從20世紀(jì)50年代開始研究，目前用于生產(chǎn)效果不佳，因此在生產(chǎn)中沒有得到普及應(yīng)用。山丹馬場是全國最大的馬場，為了適應(yīng)馬匹市場的需求，山丹馬場在1997年至2000年連續(xù)四年與中國種畜進(jìn)出口公司阿拉伯馬場合作，在北京制作阿拉伯種公馬的凍精，對山丹馬進(jìn)行改良，由于當(dāng)時(shí)的凍精制作技術(shù)和解凍技術(shù)存在一定問題，解凍后精子活力為0.2—0.3，凍配情期受胎率只有36.8%，從而使山丹馬場的凍配改良工作停止。2010年山丹馬場已組成由阿丹、英丹、頓丹雜一代繁殖母馬群180匹、山丹母馬群150匹。為進(jìn)一步加大改良力度，在中牧公司的支持下，與華牧公司合作，在北京制作汗血馬和阿拉伯馬的凍精。這次制作凍精時(shí)，吸取以前的經(jīng)驗(yàn)，改變冷凍液和解凍液配方，制作汗血馬凍精顆粒320粒，制作阿拉伯馬凍精顆粒800粒，解凍后精子活力分別為0.6和0.5?，F(xiàn)將凍精制作、解凍過程及其應(yīng)用綜述如下：

1凍精的制作

1.1稀釋液的配制

100ml蒸餾水，11g蔗糖（分析純），充分溶解后進(jìn)行高壓滅菌消毒。

1.2 冷凍液的配制

100ml蒸餾水，11g蔗糖（分析純），16ml鮮卵黃（雞蛋），8ml甘油，3.4g脫脂無糖奶粉，10萬單位青霉素，10萬單位鏈霉素，將以上材料混合后攪拌均勻。

1.3 公馬精液的提取

采取臺馬假陰道采精法，將采集到的公馬精液用消毒過的紗布（4層）過濾到消毒過的燒杯中。

1.4 精液的稀釋

過濾后的精液與稀釋液在同等溫度下進(jìn)行1：1稀釋。

1.5 精液的分離

將稀釋后的精液分裝在離心管內(nèi)進(jìn)行離心，以2500r/min離心15min，離心后用吸管吸去上層精清，留用下層精子粥。

1.6 精子粥的二次稀釋

將離心后留用的精子粥與冷凍液按1：1進(jìn)行稀釋并用吸管混勻。

1.7 平衡

將兩次稀釋后的精液用吸管抽吸集中于1個(gè)離心管中，用等溫的棉花或6—8層紗布包好，放入7℃的冰箱內(nèi)平衡2h。

1.8 滴制顆粒凍精

將液氮倒入廣口液氮罐內(nèi)，液面距灌口1cm左右，放入20目的銅紗網(wǎng)扇于液氮內(nèi)，等待冷卻后，將網(wǎng)刪固定距液面1厘米處，將平衡后的精液用吸管以0.3ml左右為1粒，滴于網(wǎng)刪上，等待顆粒完全凝固后將網(wǎng)刪和顆粒一起沉入液氮中。

1.9 鏡檢與保存

將冷凍好的顆粒凍精取出1粒進(jìn)行解凍后鏡檢，精子活力達(dá)到0.3以上進(jìn)行裝袋，做好標(biāo)簽注明公馬品種、馬名或馬號、顆粒數(shù)、生產(chǎn)日期，然后將袋子置于液氮罐中保存待用。

2 凍精的解凍

2.1 解凍液的配制

100ml蒸餾水，將6g蔗糖（分析純）、3.4g脫脂無糖奶粉充分溶解后進(jìn)行高壓滅菌消毒。

2.2 解凍

將配制好的解凍液冷卻到42℃左右后，用吸管吸取15ml置于50ml燒杯中，再將燒杯放于45度恒溫水浴鍋內(nèi)的燒杯架上，2min后，燒杯內(nèi)解凍液溫度也恒定為45℃時(shí)，一次取出3個(gè)顆粒凍精，在燒杯口停留10～15s后，把3個(gè)顆粒凍精一次性放入燒杯中的解凍液內(nèi)，用手指捏住燒杯順時(shí)針搖晃，待顆粒完全溶解后，將燒杯放于工作臺上3～5min后進(jìn)行鏡檢待用。

3 凍精的應(yīng)用

3.1汗血馬凍精的應(yīng)用

2010年5月山丹馬場從北京華牧公司處取回汗血馬凍精50顆粒，對山丹馬和雜一代馬進(jìn)行凍配，配排7匹，受胎6匹，情期受胎率為85.8%，與鮮精配種的情期受胎率基本等同。

3.2阿拉伯馬凍精的應(yīng)用

2010年5月山丹馬場從北京華牧公司處取回阿拉伯馬凍精800顆粒，對山丹馬進(jìn)行雜交改良，對雜一代馬進(jìn)行三元雜交和級進(jìn)雜交，山丹馬凍配情期受胎率為73%，雜一代馬凍配情期受胎率為67.5%。

4 體會

2013年在制作凍精時(shí)，吸取以往的經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)行了一些調(diào)整：一是改變了冷凍液和解凍液配方。二是在制作冷凍液和解凍液配方所用的材料必須是同一品牌，冷凍液和解凍液配方所用的材料不同，對精蟲產(chǎn)生不同的滲透壓，嚴(yán)重影響解凍后精液的品質(zhì)、活力和存活時(shí)間，是造成凍配受胎率低下的主要原因。三是把握馬群配種的最佳時(shí)間，在山丹馬場的最佳配種時(shí)間是6～7月份，過早馬匹膘情差，過遲錯(cuò)過馬匹最佳發(fā)情時(shí)機(jī)，也是造成凍配受胎率低下的因素之一。四是掌握熟練的馬匹發(fā)情鑒定技術(shù)，正確判斷卵泡的發(fā)育時(shí)期，做到適時(shí)輸精。如果輸精過早勢必造成精液的浪費(fèi)，同時(shí)也增加了輸精次數(shù)，容易引起馬匹的子宮炎癥；如果輸精過晚，錯(cuò)過馬匹的發(fā)情時(shí)機(jī)，同樣也會造成受胎率低下。