[摘要] 目的 建立鼻咽清毒劑中龍膽苦苷的含量測定方法。 方法 采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水（25∶75）為流動相，檢測波長270nm。 結(jié)果 龍膽苦苷在0.0822～0.822μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999，平均回收率為98.7%，RSD為1.04%（n=6）。 結(jié)論 該方法簡單易行，專屬性和重視性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于其制劑的含量質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] HPLC法；鼻咽清毒劑；龍膽苦苷；含量測定

[中圖分類號] R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）20-39-03

鼻咽清毒劑（顆粒）系衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成分制劑第七冊收載品種，標(biāo)準(zhǔn)代號WS3-B-1453-93，由野菊花、蒼耳子、重樓、兩面針等八味藥材經(jīng)提取精制而成，具有清熱解毒，消炎散結(jié)功能，在臨床上用于鼻咽部慢性炎癥，咽喉腫痛以及鼻咽癌放射治療后分泌物增多等癥治療[1]。本品現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，無含量測定項目，為了有效控制該產(chǎn)品質(zhì)量，依據(jù)SFDA相關(guān)要求，在參考文獻(xiàn)[2-12]的基礎(chǔ)上，對其制劑龍膽苦苷含量進(jìn)行了研究測定，結(jié)果表明，該方法可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器

Hi-Tech高效液相色譜儀（美國SSI公司）；Phenomenex ODS色譜柱（5μm，250mm×4.6mm ID）；SSI P4000泵；HW2000數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)；Hi-Tech UV/Vis 500檢測器。

1.2 試藥

龍膽苦苷（批號0770-201006，供含量測定用），購自中國藥品生物制品檢定所。在選定色譜條件下分離，按歸一化法計算，含量為99.31%。甲醇為色譜純（上海陸中試劑廠）；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純。鼻咽清毒劑，自制。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex ODS柱（5μm，250mm×4.6mm ID）；流動相：甲醇-水（25∶75）；流速：1.0mL/min；檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：5μL；理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計算應(yīng)不低于3000。

1.3.2 對照品溶液的制備 取龍膽苦苷對照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1毫升含龍膽苦苷對照品0.02mg）。

1.3.3 供試品溶液的制備 取本品5袋，精密稱定，研細(xì)，取約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇100mL，放置24h，時時振搖。濾過，精密吸取10mL，蒸干，殘渣加流動相使溶解，移置10mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

1.3.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例和制劑工藝制備缺龍膽的陰性樣品，再按供試品溶液項下方法，制得龍膽苦苷陰性對照溶液。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液、對照品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果在龍膽苦苷吸收峰處，陰性對照無吸收，對測定結(jié)果無干擾，見圖1。

2.2 線性關(guān)系考察

取龍膽苦苷對照品溶液0.3288mg/mL，用甲醇分別配成濃度為0.01644、0.03288、0.06576、0.013152和0.1644mg/mL，

的龍膽苦苷對照品溶液，在上述色譜條件下，分別進(jìn)行測定，進(jìn)樣量5μL，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積值（A）對進(jìn)樣量（M）作圖，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=1443869.6M+7782.6，r=0.9999。結(jié)果表明，在0.0822～0.822μg范圍內(nèi)，龍膽苦苷峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗

取配制好的供試品溶液（批號20120301），按擬定的色譜條件測定，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積的RSD為0.93%，表明儀器精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗

取配制好的供試品溶液（批號20120301），按擬定色譜條件，分別在0、3、6、12和24h進(jìn)樣，測定峰面積值，結(jié)果RSD為1.08%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重現(xiàn)性試驗

按擬定的含量測定方法，取同一批樣品（批號20120301）分別制備5份供試品溶液，測定龍膽苦苷的含量，結(jié)果RSD為1.95%，表明本品重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號20120301，龍膽苦苷含量2.12mg/袋）研細(xì)，取6份，每份5g，精密稱定，置100mL量瓶中，分別加入濃度為0.3288mg/mL的龍膽苦苷對照品3、3、4、4、5和5mL，加甲醇至刻度，放置24h，時時振搖，濾過，精密量濾液10mL，蒸干，殘渣加流動相使溶解，移置10mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果RSD為1.04%，表明本方法加樣回收率良好。

2.7 樣品的測定

取10批樣品，按擬定方法測定龍膽苦苷的含量，測定結(jié)果為2.12、2.18、2.32、2.44、2.14、1.88、2.72、1.82、1.68和2.26mg/袋，平均含量為2.16mg/袋。

3 討論

3.1 提取完全性試驗

本文曾對供試品用甲醇超聲提取，結(jié)果樣品雜質(zhì)峰較多，龍膽苦苷峰分離度低。亦使用大孔吸附樹脂柱對供試品進(jìn)行分離，結(jié)果使龍膽苦苷含量降低。最后參考《中國藥典》2010年版一部龍膽項下的龍膽苦苷含量測定方法，所得龍膽苦苷峰分離度較好，雜質(zhì)峰相對較少，且含量較前兩種方法高，因此確定此法作為供試品溶液的處理方法。

3.2 靜置時間考察

取本品，研細(xì)，取四份，每份約10g，精密稱定，分別置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，放置6、12、24和36h，時時振搖，濾過，精密量取濾液10mL，蒸干，殘渣加流動相使溶解，移置10mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，計算，結(jié)果表明，靜置24h，含量趨于穩(wěn)定，故確定本品靜置時間為24h。

3.3 龍膽藥材中龍膽苦苷含量考察

為了控制和保證制劑的質(zhì)量，采用與制劑相同的測定方法，對三個不同產(chǎn)地龍膽中龍膽苦苷的含量進(jìn)行測定，結(jié)果三地龍膽的龍膽苦苷含量分別為1.08，1.25和1.19%，根據(jù)測定結(jié)果，考慮到藥材產(chǎn)地，加工炮制、貯藏等因素，暫定龍膽藥材中龍膽苦苷含量不低于1.0%。

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（收稿日期：2013-08-19）