【中圖分類號】R575.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-3783（2013）12-0120-01

【摘要】目的：研究狗肝菜多糖對二甲基亞硝胺（DMN）誘導的肝纖維化大鼠肝組織中瘦素（Leptin）及血管內(nèi)皮因子蛋白表達的影響。方法：用DMN誘導大鼠肝纖維化模型，不同濃度狗肝菜多糖干預(yù)后，肝臟常規(guī)取材、制片，免疫組織化學方法檢測各組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達的情況。結(jié)果：模型組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白染色強度和范圍明顯高于正常組，具有顯著性差異（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達明顯降低，具有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：狗肝菜多糖抗肝纖維化的作用機制可能通過降低Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白的表達而調(diào)控細胞外基質(zhì)的代謝有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】狗肝菜多糖；肝纖維化；免疫組織化學；瘦素；血管內(nèi)皮因子

瘦素（Leptin）及血管內(nèi)皮因子在代謝、炎癥、腫瘤中均發(fā)揮著重要作用，明顯加重肝纖維化的發(fā)展程度，可能是一個關(guān)鍵促纖維化因子。狗肝菜多糖是是爵床科華九頭獅子草屬，在抗炎抑菌、抗氧化、抗病毒中發(fā)揮重要作用。近年來通過其化學成分、藥理作用的研究，其藥用價值得到了進一步的肯定，尤其是在保肝護肝方面。因此，作者等通過免疫組化方法，觀察狗肝菜多糖干預(yù)的肝纖維化大鼠肝組織中Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達情況，探討狗肝菜多糖抗肝纖維化機制是否與降低Leptin及血管內(nèi)皮因子蛋白表達有關(guān)。

1材料與方法

1.1 SPF級SD大鼠72只，體重180-220g，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)2d，每組12只，隨機分為正常對照組、模型組、秋水仙堿組、狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組、狗肝菜多糖低劑量組。除正常對照組外，余60只造模。模型復制：每只動物按2ml.kg-1劑量，腹腔注射0.5% DMN，連續(xù)注射三天，停藥四天，造模時間為四周，共注射12次。第一周用2/3劑量，以后用全量。藥物處理：秋水仙堿組劑量為0.1mg.kg-1，狗肝菜多糖高、中、低劑量組分別為300mg.kg-1、200mg.kg-1、100mg.kg-1，除正常對照組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃外，各組均灌胃給藥，1次/d，連續(xù)4周。4周末，實驗結(jié)束時，取大鼠肝組織常規(guī)脫水、制片，蘇木素-伊紅染色（HE）染色，觀察各組大鼠肝組織形態(tài)改變；免疫組織化學方法檢測各組大鼠肝臟Leptin、血管內(nèi)皮因子表達情況。

免疫組化結(jié)果判定： 以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。先按染色強度打分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；再按陽性細胞所占百分比打分：0分為陰性，1分為<10%，2分為11%-50%，3分為51%-75%，4分為>75%。總分0-1分（-），2-3分（+），4-5分（++），6-7分（+++）。

1.2 用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件，進行Ridit分析，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Leptin表達情況

與正常組比較，模型組表達明顯升高（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高、中劑量組、秋水仙堿組瘦素蛋白表達明顯降低（P<0.05），狗肝菜多糖低劑量組瘦素蛋白表達無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；狗肝菜多糖高、中劑量組與秋水仙堿組比較，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

3討論

新近發(fā)現(xiàn)，瘦素（leptin）與轉(zhuǎn)化生長因子β1，血小板源性生長因子，腫瘤壞死因子，r干擾素、 缺氧誘導因子-1α等構(gòu)成相互促進或抑制的調(diào)解網(wǎng)絡(luò)，在肝纖維化形成中具有重要作用。作用機制為促進肝內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β1、血小板衍生生長因子等細胞因子的表達，增加膠原的表達，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1的表達，減少基質(zhì)金屬蛋白酶-1的形成，減少細胞外基質(zhì)的降解，并能上調(diào)促炎因子和促血管生成因子，從而促進纖維化發(fā)展[1]。在人肝星狀細胞細胞系（LX - 2） 、鼠肝星狀細胞細胞系（HSC - T6）和從正常鼠肝內(nèi)分離培養(yǎng)活化的肝星狀細胞內(nèi)均發(fā)現(xiàn)有Leptin受體的表達，Leptin能刺激基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑啟動子活性，激活絡(luò)氨酸激酶和信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子3，5酶活性，進而促進基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1的產(chǎn)生。Crepo J檢測135名慢性肝炎患者和75名正常對照者Leptin水平，并評價Leptin水平與肝纖維化程度的相關(guān)性，結(jié)果表明Leptin水平與肝纖維化程度正相關(guān)，隨著纖維化程度增加而升高。王曙強[2]認為，在非酒精性肝硬化中，Leptin水平與轉(zhuǎn)化生長因子β1水平呈正相關(guān)，Leptin在非酒精性肝硬化中是獨立的致病因素，Leptin可能通過轉(zhuǎn)化生長因子β1系統(tǒng)導致肝纖維化。

狗肝菜多糖作為一種民間藥物，有清熱解毒、消腫利濕的功效，常用來治療水腫、感冒發(fā)熱、蛇蟲咬傷等。近年來通過其化學成分、藥理作用的研究，其藥用價值得到了進一步的肯定。此次研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠肝組織Leptin及血管內(nèi)皮因子表達明顯高于正常組，證實Leptin及血管內(nèi)皮因子在肝纖維化中發(fā)揮了重要作用。狗肝菜多糖防治大鼠肝纖維化可能與其降低Leptin及血管內(nèi)皮因子表達，抑制肝星狀細胞增殖和降低肝內(nèi)轉(zhuǎn)化誘導因子β1等細胞因子表達，減輕肝臟炎性壞死程度，減少血管生成，從而抑制肝纖維化的啟動密切有關(guān)。同時，中醫(yī)藥與西醫(yī)治療比較，具有成本低廉、副作用小、多靶點、提取簡單等優(yōu)勢。我國又是傳統(tǒng)中醫(yī)藥大國，中藥資源豐富，因此，狗肝菜多糖防治肝纖維化研究具有廣闊的推廣前景。

參考文獻

[1]劉弋云，朱萱.瘦素在肝纖維化形成中的作用與地位[J].國際消化病雜志，2009，29（6）：384-386.

[2]王曙強.瘦素和轉(zhuǎn)化生長因子β1對非酒精性脂肪性肝炎患者肝纖維化的影響[ J ].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2009，8（8）：17-18.