摘要：目的 通過不同炮制時段來研究何首烏中蒽醌的含量變化情況。方法 何首烏分別采用黑豆汁拌蒸不同時段， 醋酸鎂比色法分別測定炮制飲片中游離蒽醌和總蒽醌的含量。結(jié)果 用黑豆汁拌蒸的何首烏飲片10h內(nèi)游離蒽醌含量逐漸升高， 總蒽醌含量沒有顯著性變化。結(jié)論 何首烏飲片的炮制時間對其藥性成分有影響，應統(tǒng)一規(guī)范其炮制時間。

關鍵詞： 何首烏； 高效液相色譜法； 醋酸鎂比色法

中圖分類號：R94 文獻標識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）8-122-02

何首烏為蓼科植物何首烏（P olygonum multif lorum Thunb）。 的干燥塊根， 為常用中藥。生品具有解毒、消癰、潤腸通便之功效。制首烏具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、增強免疫力、改善記憶障礙及抗衰老等功效[1]。何首烏中主要有效成分為蒽醌類和二苯乙烯化合物。結(jié)合蒽醌具有瀉下作用， 何首烏經(jīng)炮制后結(jié)合蒽醌逐漸轉(zhuǎn)為無瀉下作用的游離蒽醌[2] ?，F(xiàn)有的炮制方法有多種， 但各種方法均未規(guī)范其炮制時間。炮制時間的長短對其各個成分的含量影響較大，探明其在炮制前后主要成分變化是很有必要的。本實驗選擇5中國藥典6中規(guī)定的黑豆汁拌蒸法， 考察不同時間的黑豆汁拌蒸工藝對何首烏中蒽醌主要化學成分的影響。

1 器材

日本島津高效液相色譜儀， SPD-10VAP 型紫外檢測器；FA2004電子天平；UV-2201型紫外- 可見分光光度計（日本Sh-im adzu）， AS3120型超聲波清洗器（奧特賽思儀器有限公司）。何首烏藥材由吉林敖東藥業(yè)集團股份有限公司提供， 經(jīng)鑒定均為蓼科植物何首烏的干燥塊根。實驗樣品為實驗室自制的何首烏生飲片， 經(jīng)黑豆汁拌蒸0， 2， 4， 6， 8， 10 h的飲片。黑豆汁拌蒸法： 取黑豆適量（ 1 /10何首烏的量）， 加適量的水煎煮2次，用200目篩絹濾出， 合并濾液， 濃縮至約黑豆的2.5 倍。將黑豆汁加入何首烏飲片中，拌勻，浸潤24 h，取出浸潤后的何首烏適量作為0 h飲片單放， 其余的按2，4，6，8，10 h進行蒸制。乙腈為色譜純（美國F isher公司）； 水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)105e干燥至恒重的1，8- 二羥基蒽醌對照品5.1mg， 置25ml容量瓶中， 甲醇溶解并定容， 作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取各何首烏飲片粉末（ 過80目篩）0. 5 g， 精密稱定， 置50 m l容量瓶中， 加入氯仿40ml 超聲處理40min， 放冷， 用氯仿稀釋至刻度， 搖勻， 過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液[1]。另取各何首烏飲片粉末（過80目篩）0.5g， 精密稱定，置150ml錐形瓶中， 加30ml氯仿和30ml硫酸（ 2.5 mol# L- 1 ），水浴回流水解2 h， 放冷， 水解液置分液漏斗中， 分取氯仿層于50ml容量瓶中， 水層用氯仿洗滌（5m l@3）， 洗液并入容量瓶中， 并用氯仿稀釋至刻度， 搖勻， 過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液[2] 。

2.3 線性關系考察

精密吸取/2.1.10 項下的對照品溶液0.2， 0.4， 0.6， 0.8，1.0 ml置l0ml容量瓶中，置水浴上蒸干， 放冷，將殘渣用0.035 mol#L-1醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容， 以0.035 mol#L- 1醋酸鎂-甲醇溶液為空白，在510nm測定吸光度，以吸光度（ Y）為縱坐標，濃度（ X，Lg# ml-1）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為；Y= 0.049 9X+0.0036（ r= 0.9999 ），表明1， 8- 二羥基蒽醌在4.08～ 20. 40 Lg 范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4 精密度實驗

精密吸取/ 2. 1. 10項下的對照品溶液0.5ml 按醋酸鎂比色法測定5次， 測得吸光度的RSD為0.34%。

2.5 回收率實驗

精密稱取已知含量的樣品5份， 每份0.5g， 置50ml容量瓶中， 加入1ml對照品溶液， 再加入氯仿40ml超聲處理40m in。放冷， 氯仿定容，搖勻，過濾。精密吸取續(xù)濾液8 ml置l0ml容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得殘渣。按醋酸鎂比色法測定， 計算1， 8一二羥基蒽醌的回收率。結(jié)果其平均回收率為98.06% + 1.98%（n=5）。

2.6 測定方法與結(jié)果

精密吸取/ 2. 1. 20項下的供試品溶液[ 1] 8ml置10ml容量瓶中， 水浴蒸干， 放冷， 得殘渣。按醋酸鎂比色法在510nm 測定吸光度， 計算游離蒽醌的含量， 結(jié)果見表1。精密吸取/ 2. 1. 20項下的供試品溶液[ 2] 4 m l置10ml容量瓶中， 蒸干， 放冷， 得殘渣。按醋酸鎂比色法在510nm 測定吸光度，計算樣品中總蒽醌的含量。由此， 總蒽醌含量減去游離蒽醌含量， 即得結(jié)合蒽醌含量。結(jié)果見表1。

3 討論

關于炮制后何首烏中有效成分含量變化已有報道[4]，但均是以制后結(jié)合蒽醌幾乎轉(zhuǎn)變成游離蒽醌為炮制目的， 所以選定的炮制時間長（一般大于12 h）， 且時間間隔也很大。本文首次已2 h為間隔時間探討了黑豆汁拌蒸10 h之內(nèi)的有效成分含量的變化。本實驗結(jié)果顯示，用黑豆汁拌蒸不同時間蒽醌含量有差異，蒸制2～ 10 h，游離蒽醌的含量隨炮制時間的延長逐漸升高，但總蒽醌含量只略有下降，無顯著性差異，說明結(jié)合蒽醌在炮制過程中逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌。經(jīng)多次（ n = 6）實驗測得黑豆汁拌蒸10h時已有46.5%的結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌。實驗中發(fā)現(xiàn)蒸制時間的長短與其顏色也有著重要的關系，蒸制時間短，顏色暗淡無光澤；蒸制時間越長，其顏色逐漸烏黑發(fā)亮。實驗中也意外地發(fā)現(xiàn)，黑豆汁浸潤24 h的何首烏（即0 h 樣品）中游離蒽醌的含量特別高，其原因有待進一步研究。

參考文獻：

[1] 鄭虎占. 中藥現(xiàn)代研究與應用， 第3 卷[M ] . 北京： 學苑出版社， 1998.

[2] 王孝濤， 曹 暉， 劉玉萍. 中藥采制與炮制技術(shù)[M ] . 北京： 華夏出版社， 2000： 23.

[3] 國家藥典委員會. 中國藥典， ? 部[ S ] . 北京： 化學工業(yè)出版社，2005： 123.

[4] 劉振麗， 宋志前， 張 玲. 不同炮制工藝對何首烏中成分含量的影響[ J] . 中國中藥雜志， 2005， 30（ 5 ） ： 336.