摘要：目的：主要對托瑞米芬的抗腫瘤作用機制以及其與順鉑的聯(lián)合應用對癌細胞的治療效應進行研究，探索治療肺癌的新方向。方法：通過MTT的顯色法對托瑞米芬以及其與順鉑聯(lián)合之后在A549細胞上產(chǎn)生的毒性作用，將吸光度值測定出來。對DNA的含量用流式細胞儀進行檢測，對p21蛋白表達的檢測運用Western blot法。結(jié)果：托瑞米芬可以A549細胞的生長起到直接抑制的作用，5μmol/L以上的托米瑞芬可以將順鉑對細胞的毒性作用顯著增強[1]。運用托瑞米芬可以明顯增強順鉑對于M期、G2期、以及S期細胞的作用，兩者聯(lián)合運用之后可以增加p21蛋白表達。結(jié)論：5μmol/L以上的托米瑞芬和順鉑聯(lián)用在A549細胞上可以起到顯著協(xié)同的抗腫瘤的效應。

關(guān)鍵詞：托瑞米芬；抗腫瘤作用機制；肺癌；研究分析

中圖分類號：R563 文獻標識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）8-120-02

順鉑是在肺癌治療中非常重要的一種化療藥物，然而因為在化療過程中會形成耐藥性，就會較大限制順鉑的作用。我們通過運用托瑞米芬與順鉑聯(lián)合作用對人體中的肺腺癌A549細胞生長產(chǎn)生的抑制作用的觀察，對其可能機制進行明確，在綜合治療肺癌方面提供新的發(fā)展方向[2]。

1資料與方法

1.1運用的材料和方法

1.1.1試劑和藥品 芬蘭的奧立安藥廠生產(chǎn)的托瑞米芬、昆明的三戍藥廠生產(chǎn)的順鉑，美國的Hyclone公司的RPMI-1640的培養(yǎng)基，華美公司的MTT，美國Sigma公司的胰蛋白酶和二甲基亞砜（DM-SO），美國的Callbiochem公司的p21wafl抗體，美國的Santa Cluz公司的抗鼠辣根過氧化物酶[3]，美國的PIERCE公司生產(chǎn)的T-PERTM的組織蛋白提取劑，美國的Bio-RAD公司生產(chǎn)的Micro-Plate Reader Model550型酶聯(lián)免疫的檢測儀，美國的Becton-Dickinson公司生產(chǎn)的Facscalibur型的流式細胞儀。

1.1.2細胞系的培養(yǎng) 人體的肺腺癌細胞是A549來自中國科學院的上海生物細胞研究所，在含有5%的二氧化碳，溫度為37攝氏度的溫箱中進行培養(yǎng)，RPMI-1640作為培養(yǎng)液[4]。肺癌細胞是貼壁生長的，在兩到三天之后用0.25%的胰蛋白酶進行消化和傳代。

1.1.3實驗的分組 主要設置加入100μl培養(yǎng)基的空白組和加入100μl單細胞懸液的對照組以及加入處理因素和100μl單細胞懸液的實驗組。其中實驗組還分為聯(lián)合用藥組、化療藥物組、托瑞米芬組[5]。

1.2治療的方法 通過MTT的顯色法對托瑞米芬以及其與順鉑聯(lián)合之后在A549細胞上產(chǎn)生的毒性作用，將吸光度值測定出來。對DNA的含量用流式細胞儀進行檢測。提取培養(yǎng)出來的細胞總蛋白，與Western blot的印記進行雜交，對p21wafl蛋白表達的水平進行檢測[6]。具體的操作步驟為：在六孔板中把A549的細胞株進行接種，RPMI-1640作為培養(yǎng)液，在其中分別加入順鉑、托瑞米芬和兩者的結(jié)合物，將空白的對照設置出來，在經(jīng)過二十四小時的培養(yǎng)之后將培養(yǎng)液倒掉，用PBS液沖洗三次，在其中加入T-PERTM的組織蛋白提取劑，對細胞進行溶解和裂解，將蛋白提取出來。在沸水中把樣品加熱十分鐘，用每分鐘10000r進行十分鐘離心，對上清進行吸取。進行SDS的凝膠電泳，通過電轉(zhuǎn)移的方法把蛋白移至硝酸纖維的素膜上，在運用50g/L的脫脂奶粉封閉之后再在其中加入p21wafl的單克隆抗體，兩個小時之后，運用PBS液沖洗三次，再將二抗加入，兩個半小時之后，再將化學發(fā)光劑加入，將暗盒放入、壓片，十分鐘之后，顯影、定影[7]。

1.3統(tǒng)計學的處理 采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，p<0.05說明具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

托瑞米芬對于A549的細胞生長產(chǎn)生了一定的抑制作用，如表一所示，5μmol/L以上的托米瑞芬可以將順鉑對細胞的毒性作用顯著增強，存在的差異具有明顯的統(tǒng)計學意義（p<0.05）。運用托瑞米芬可以明顯增強順鉑對于M期、G2期、以及S期細胞的作用，兩者聯(lián)合運用之后可以增加p21蛋白表達。具體的情況見表一、表二。

3討論

通過研究表明，在單獨運用托瑞米芬的時候可以對A549細胞的生長起到一定的抑制作用，抑制的作用會隨著濃度的增加而逐漸增強。然而如果僅僅靠藥物的劑量并不能達到將抑制的效應提高到理想的效果，有時還會適得其反，會有一些毒副作用產(chǎn)生[8]。托瑞米芬與順鉑聯(lián)合所產(chǎn)生的協(xié)同作用是非常顯著的，盡管各自的藥量都降低了，但是其對癌細胞所產(chǎn)生的毒性作用依然大于這兩種藥物單獨使用。根據(jù)目前的研究的情況來看，托瑞米芬在對癌細胞增殖產(chǎn)生的抑制作用和與化療藥物協(xié)同的作用機制還不是非常明顯。根據(jù)流式細胞儀的檢測不難發(fā)現(xiàn)，托瑞米芬與順鉑聯(lián)合之后，細胞周期阻斷的時期產(chǎn)生變化了，G2和S期的比例下降了[9]，G1期的細胞運動受到了阻滯，這就說明了托瑞米芬在癌細胞的DNA合成以及合成后期和有絲分裂期的作用，會阻斷整個繁殖的周期，對細胞的生長起到一定的抑制作用。

參考文獻：

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