摘要：滅菌效果及滅菌周期的驗證對于小容量注射劑的滅菌生產(chǎn)具有十分重要的意義，它是小容量之際生產(chǎn)安全的重要保障。本文首先對小容量注射劑臭氧滅菌的基本概念，以及滅菌的目的進行了明確，在此基礎(chǔ)上對臭氧滅菌的具體實施進行了討論。文章最后提出，盡管整個滅菌方法及目的非常明確，但是很多細節(jié)的工作必須進行嚴格把握，才能保證滅菌對于整個小容量之際生產(chǎn)的意義。

關(guān)鍵詞：小容量注射劑，臭氧滅菌，滅菌效果，滅菌周期

中圖分類號：R953 文獻標識碼：A 文章編號：1005-0515（2013）8-028-01

1 引言

滅菌是小容量注射劑生產(chǎn)過程中的重要環(huán)節(jié)，對于保證小容量注射劑的生產(chǎn)質(zhì)量具有十分重要的意義。小容量注射劑滅菌方法有很多種，當前最為常用的是臭氧滅菌方法。在實際生產(chǎn)過程中，要保證臭氧滅菌的質(zhì)量，需要對滅菌效果以及滅菌周期進行嚴格驗證，從而保證將注射劑中的微生物含量控制在一定的范圍內(nèi)。當前很多企業(yè)在小容量注射劑臭氧滅菌環(huán)節(jié)中存在一些問題，這些問題對于小容量注射劑的生產(chǎn)質(zhì)量產(chǎn)生一定的影響，因此，本文將針對這一生產(chǎn)環(huán)節(jié)進行詳細分析，為實際的小容量注射劑生產(chǎn)提供一定的參考。

2 小容量注射劑臭氧滅菌方法及滅菌驗證目的

從滅菌方式上劃分，臭氧滅菌屬于化學滅菌方法。它是利用臭氧的基本的物理化學性質(zhì)，破壞微生物的基本組織結(jié)構(gòu)，從而達到滅菌的效果。具體而言，臭氧具有較強的氧化能力，這一點在其它行業(yè)中已經(jīng)被廣泛的認識，同時，在常溫以及常壓下臭氧的基本結(jié)構(gòu)并不穩(wěn)定，可以分解為氧（O2）和單個氧原子（O），而后者具有很強的活性，對于細菌等微生物具有極強的氧化作用。在實際的滅菌生產(chǎn)中，主要利用O的這種特性，將細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞細菌的細胞膜，將其殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為氧分子（O2），不存在任何有毒殘留物，為無污染消毒劑，因此，不會對小容量注射劑生產(chǎn)產(chǎn)生任何的污染。

在工業(yè)生產(chǎn)中，臭氧滅菌的驗證目的非常明確，主要包含兩個方面的內(nèi)容。第一，測試滅菌室內(nèi)臭氧的濃度，在此基礎(chǔ)上驗證規(guī)定的時間內(nèi)小容量注射劑車間潔凈區(qū)各潔凈間內(nèi)臭氧濃度是否達到標準規(guī)定；第二，通過微生物挑戰(zhàn)性試驗，確定在一定時間內(nèi)臭氧對小容量注射劑車間潔凈室的滅菌效果，并按規(guī)定周期（每日）進行沉降菌和表面污染試驗測定，確定消毒周期。通過這兩個方面內(nèi)容的驗證，確定了室內(nèi)濃度要求以及滅菌周期，而這兩個方面恰恰是滅菌工業(yè)生產(chǎn)過程中最為直接、重要的生產(chǎn)要素。

3 小容量注射劑臭氧滅菌效果及周期的驗證內(nèi)容

在實際的工業(yè)生產(chǎn)過程中，滅菌效果及滅菌周期的驗證過程較為復雜，它需要首先規(guī)劃驗證項目，并且按照要求設(shè)立標準，在此基礎(chǔ)上進行一系列的滅菌實驗。

3.1 驗證項目及標準設(shè)立

小容量注射劑的種類有很多，但是，其滅菌驗證項目以及其標準的設(shè)立基本相同。一般而言，滅菌效果以及周期的驗證項目主要包括臭氧濃度、微生物挑戰(zhàn)、沉降菌數(shù)量以及表面污染性等四個項目，具體內(nèi)容如表1所示。

從表中的接受標準可以看出，不同潔凈區(qū)域?qū)τ诔两稻臄?shù)量及濃度要求不同，因此，在實際工業(yè)生產(chǎn)中，應(yīng)當首先劃分好潔凈區(qū)域，在此基礎(chǔ)上進行一定的項目驗證。

3.2 具體內(nèi)容的驗證

在確定了具體的驗證項目以及可接受標準之后，就可以按照實際的驗證方法開展工作。由于沉降菌以及表面污染試驗具有明確的操作規(guī)程，因此，不在贅述，下文主要對臭氧濃度的驗證以及微生物挑戰(zhàn)試驗兩個方面進行討論。

（1）臭氧濃度的驗證

臭氧濃度的驗證是整個驗證過程的前提和基礎(chǔ)，也是其他項目驗證可靠性的保障。其整個驗證過程可以分為三個步驟。首先，對生產(chǎn)車間內(nèi)各個潔凈區(qū)按照規(guī)定滅菌之后，在遠離送風口處測定臭氧濃度；其次，在錐形瓶中依次加入100ml純化水、20ml20%KI溶液、250ml純化水。利用采樣器采取2L左右的臭氧化氣，并且與混合容易進行充分均勻；最后，在混合液中加入5ml密度為1.000mol/L的H2SO4溶液，混勻后放置10min后加0.5%淀粉指示液1ml，混勻。待反應(yīng)至淺黃色時，用硫代硫酸鈉滴定液（0.0010mol/L）滴定至無色。

那么利用臭氧滅菌的基本原理，整個滅菌區(qū)的臭氧濃度可以計算為：

H=（M×V×48×1000×1000）/（2×2×1000×1.963）

其中，M表示Na2S2O3克分子濃度；V為Na2S2O3消耗的體積，ML。

（2）微生物挑戰(zhàn)試驗

微生物挑戰(zhàn)性試驗，是確定滅菌周期的重要依據(jù)，在實際的工業(yè)生產(chǎn)中，整個驗證過程主要分為四個步驟。第一，在平皿蓋上用油性筆記錄滅菌日期及位置，按潔凈室環(huán)境微生物監(jiān)測確定的位置和數(shù)量要求，在指定位置放置要求數(shù)量的生物指示劑。按本車間滅菌工藝要求同時滅菌；第二，在滅菌結(jié)束后回收生物指示劑，并在2小時內(nèi)將載體投入胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，進行無菌培養(yǎng)試驗；第三，裝有生物指示劑的培養(yǎng)管在35±2℃的溫度下培養(yǎng)3天，逐日觀察細菌是否被殺滅，若沒有細菌生長，即培養(yǎng)液澄清、顏色不變?yōu)殛幮?，則為滅菌合格；若培養(yǎng)液變渾濁，則判為陽性，滅菌不合格；第四，微生物挑戰(zhàn)性試驗的同時作陽性對照和陰性對照，監(jiān)測結(jié)果只有在陽性對照的生物指示劑有菌生長、陰性對照無菌生長的情況下才有效。

4 結(jié)語

通過文章的分析可以看出，小容量注射劑臭氧滅菌方法是一種操作方便，并且目標明確的滅菌方式。但是，在整個操作過程中，很多細節(jié)問題必須注意，例如所添加的溶液濃度及體積，細菌培養(yǎng)時間等，對于整體驗證的可靠性影響較大，因此，在實際的生產(chǎn)過程中必須特別注意。

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