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        P16在腦血管畸形中的表達(dá)及其意義

        2013-12-31 00:00:00劉鏡魏茂富邱小靈
        中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2013年19期

        【摘要】 目的:探討P16基因在腦血管畸形(CVM)及正常腦組織中的表達(dá)情況,討論其臨床病理意義。方法:收集腦血管畸形標(biāo)本,利用免疫組化方法測定P16蛋白在正常腦組織及腦血管畸形中的表達(dá)情況。結(jié)果:在腦血管畸形標(biāo)本及正常腦組織標(biāo)本中P16蛋白陽性表達(dá)率分別為32.1%(18/56)及7.4%(2/27),兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達(dá)率高于動(dòng)靜脈畸形中的表達(dá),兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:P16基因在腦血管畸形(CVM)的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。

        【關(guān)鍵詞】 P16; 基因; 腦血管畸形; 免疫組織化學(xué)

        在炎癥、腫瘤等情況下,可以引起血管生成(angiogenesis),血管生成生成的過程中有多種因素參與,包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及細(xì)胞周期控制蛋白等[1-2]。目前腦血管畸形的形成過程尚不明確,但是血內(nèi)皮細(xì)胞的增殖在腦血管畸形的形成過程中起著重要的作用[3]。

        筆者應(yīng)用免疫組化方法檢測P16蛋白在腦血管畸形患者標(biāo)本及正常腦組織中的表達(dá)情況,并分析其臨床病理意義。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 收集東莞市虎門醫(yī)院及延大附院病理科1995年1月-2012年12月期間進(jìn)行手術(shù)的腦血管畸形患者標(biāo)本(56例),男女比例(32:34),平均年齡27.2歲(18~42歲),其中動(dòng)靜脈畸形37例,海綿狀血管瘤19例。對(duì)照組為27例正常腦組織進(jìn)行顱內(nèi)減壓的患者,。

        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及免疫組織化學(xué)方法 P16單克隆抗體(即用型)及二抗檢測試劑盒均購自邁新公司。所有標(biāo)本取材厚度為3 mm,取材后采用10%中性福爾馬林固定,固定時(shí)間為12 h,常規(guī)脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋,3 μm連續(xù)切片,烤片1 h(70 ℃),烤片后采用二甲苯脫蠟,所有切片應(yīng)用檸檬酸進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)處理,加一抗后保濕盒內(nèi)常溫孵育1 h,PBS緩沖液沖洗,二抗常溫孵育0.5 h,DAB顯色,蘇木素復(fù)染細(xì)胞核,中性樹膠封片。每批切片實(shí)驗(yàn)均設(shè)立明確的陽性對(duì)照及陰性對(duì)照。

        1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) (1)病理醫(yī)生在奧林帕斯BX50顯微鏡下進(jìn)行評(píng)估所有免疫組化玻片。(2)P16蛋白主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核,細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃色、黃色或棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。(3)隨機(jī)選取10個(gè)40×10高倍視野,進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。(4)評(píng)估陽性細(xì)胞百分率及陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度。Ⅰ:陽性細(xì)胞百分率:<5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。Ⅱ:染色強(qiáng)度:不著色為0分,淺黃色為1分,黃色為2分及黃褐色3分。Ⅰ×Ⅱ≥3分為陽性,<3分為陰性[4]。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        在55例腦血管畸形患者免疫組化切片中P16蛋白的陽性表達(dá)為18例(32.1%)高于在27例正常腦組織免疫組化切片中的表達(dá)2例(7.4%),表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( 字2=6.09,P=0.014);在腦血管畸形的患者中P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達(dá)高于在動(dòng)靜脈畸形中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        3 討論

        近年來發(fā)現(xiàn)一個(gè)與P53同樣重要的P16抑癌基因,它的突變或缺失參與了多種腫瘤的形成[5-7]。血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖在腦血管畸形的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用[8]。細(xì)胞的增殖周期受相關(guān)基因及其表達(dá)產(chǎn)物的調(diào)控,如果細(xì)胞周期調(diào)控出現(xiàn)異常,細(xì)胞的增殖狀態(tài)也將進(jìn)入異常。Pl6基因是參與細(xì)胞周期調(diào)控的基因之一,它是細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控蛋白,可以阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期[9]。P16基因通過突變、缺失及甲基化的形式失活,從而喪失對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控的作用[10]。P16基因的失活意味著P16的低表達(dá),但是在許多研究中卻發(fā)現(xiàn):存在甲基化的P16基因失活,與P16蛋白的表達(dá)明顯相關(guān),其機(jī)制可能增殖失控的細(xì)胞反饋性提高P16蛋白的表達(dá)[11]。筆者的研究結(jié)果與之類似:在56例腦血管畸形患者免疫組化切片中P16蛋白的陽性表達(dá)率為32.1%(18/56)高于在27例正常腦組織免疫組化切片中的表達(dá)率為7.4%(2/27),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);同時(shí),在腦血管畸形的患者中P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達(dá)高于在動(dòng)靜脈畸形中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明:P16基因參與了腦血管畸形的發(fā)生發(fā)展過程,P16蛋白的表達(dá)與血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖正相關(guān),在海綿狀血管瘤中的表達(dá)率高于動(dòng)靜脈畸形中的表達(dá)率,其機(jī)制可能是增殖失控的血管內(nèi)皮細(xì)胞負(fù)反饋提高了P16蛋白的表達(dá)。

        參考文獻(xiàn)

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        (收稿日期:2013-02-19) (本文編輯:連勝利)

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