【摘 要】目的：研究橙皮苷對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的感染性腦損傷小鼠開場行為的干預(yù)作用。方法：將45只3周齡ICR小鼠隨機(jī)平均分為三組，即生理鹽水組（Saline）、脂多糖組（LPS）、脂多糖+橙皮苷組（Hesp），每組15只，以ZH-ZFT型聯(lián)合開場實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)考察各組小鼠活動路程和穿格線次數(shù)的情況。結(jié)果：相對于Saline組，LPS組小鼠的活動路程明顯縮短，穿格線次數(shù)顯著減少（P<0.05）；相對于LPS組，Hesp組小鼠的活動路程明顯延長，穿格線次數(shù)顯著增加（P<0.05）。結(jié)論：橙皮苷能夠顯著增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)的感染性腦損傷小鼠在開場環(huán)境中的活動能力。

【關(guān)鍵詞】感染性腦損傷；橙皮苷；開場行為

橙皮苷（4′-methoxy-7-O-rutinosyl-3′，5-dihydroxyflavanone，Hesperidin）在柑桔類水果中大量存在，為多效藥物，研究表明它安全無毒[1]，有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗癌[2]及神經(jīng)保護(hù)作用[3]，然而橙皮苷能否調(diào)控感染性腦損傷引起小鼠的開場行為學(xué)指標(biāo)，迄今未見報(bào)道。

因細(xì)菌或病毒感染導(dǎo)致受感染的神經(jīng)細(xì)胞損傷，是幼兒腦損傷的一個原因，腦損傷后可發(fā)生認(rèn)知行為障礙，甚至腦癱。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是內(nèi)毒素，為脂質(zhì)和多糖的復(fù)合物、革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，可用于構(gòu)建幼年小鼠感染性腦損傷模型。

在開場環(huán)境中可以觀察研究實(shí)驗(yàn)動物神經(jīng)和精神變化，對其進(jìn)行觀察研究，可獲知感染性腦損傷是否導(dǎo)致行為變化，為感染性腦損傷的診斷提供幫助，為其康復(fù)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)可初步篩選藥物。作為心血管類藥物的橙皮苷，是否對感染性腦損傷有作用，目前未見報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑 LPS購自sigma公司。Hesperidin購自鄭州荔諾生物科技有限公司。開場實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)為淮北正華公司的ZH-ZFT型聯(lián)合開場實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)，活動箱大小為500mm×500mm×300mm，記錄分析軟件采用Stoelting公司的Any-maze system 4.72版。

1.2動物及分組

三周齡健康雄性ICR小鼠45只，體重為8～11g，由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。將小鼠隨機(jī)均分為三組，每組15只：生理鹽水（Saline）組，腹腔注射生理鹽水；脂多糖（LPS）組，腹腔注射LPS；橙皮苷（Hesp）組，即先用LPS處理，再用橙皮苷治療。

1.3 方法

1.3.1 動物模型制備

對LPS組小鼠，腹腔注射LPS的生理鹽水溶液，劑量為5mg/kg；Saline組，腹腔注射生理鹽水（與LPS組的LPS等體積）；Hesp組，先腹腔注射LPS（5mg/kg），半小時(shí)后用橙皮苷（劑量為200mg/kg，混懸于0.5%羥甲基纖維素鈉溶液）灌胃。6小時(shí)后置于開場環(huán)境觀察小鼠行為。

1.3.2 開場行為研究

應(yīng)用ZH-ZFT型聯(lián)合開場實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)記錄與分析各組小鼠的行為。用Any-maze system軟件將活動箱空間劃分為九塊（3×3）區(qū)域，即分別為四邊、四角和中央?yún)^(qū)域，首先將小鼠置于活動箱中適應(yīng)2分鐘，再取出，由活動箱中央?yún)^(qū)域重新置入，記錄5分鐘的行為，分析活動指標(biāo)包括觀察時(shí)間、總路程（總活動度）、活動軌跡、區(qū)域分布指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)包括活動總路程和穿格次數(shù)。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件。所得數(shù)據(jù)以s表示。組間比較采用方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Saline組、LPS組與Hesp組小鼠在開場環(huán)境的活動箱中活動軌跡不同

Saline組小鼠活動軌跡最復(fù)雜，活動路線多處于四角和四邊格中，中央格相對較少；LPS組小鼠的活動軌跡最簡單，基本沒有進(jìn)入中央格；Hesp組小鼠活動軌跡的復(fù)雜程度居于前二者之間，活動軌跡的分布特點(diǎn)依然是四角和四邊多，中央格少。

2.2 各組活動路程和穿格線次數(shù)的比較

LPS組與Saline組的比較：在開場環(huán)境中，LPS組小鼠的活動總路程相對于Saline組顯著減少，同時(shí)穿格線次數(shù)也顯著減少（P<0.05）。Hesp組與LPS組的比較：Hesp組小鼠在開場環(huán)境中的活動總路程比LPS組顯著增加，穿格線次數(shù)也顯著增多（P<0.05）。

3 討論

小兒因感染而致腦損傷是目前的醫(yī)學(xué)難題。感染性腦損傷的診斷通常采用影像學(xué)和腦電生理方法，準(zhǔn)確性有待提高，治療方面沒有令人滿意的藥物，其康復(fù)依靠物理方法和視聽功能訓(xùn)練，效果不佳[4]。因此，尋找可用的診斷和康復(fù)指標(biāo)、篩選療效更好的藥物尤為迫切。本研究從感染性腦損傷的開場環(huán)境行為學(xué)方面對此進(jìn)行了探討。

動物的血腦屏障（blood brain barrier， BBB）可維持腦內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，起保護(hù)作用[5]。對于幼年小鼠，由于其BBB不完善，所以LPS可透過BBB，導(dǎo)致小鼠的腦損傷[6]，采用LPS可建立小鼠感染性腦損傷模型。

神經(jīng)精神類疾病的研究中，考察實(shí)驗(yàn)動物的學(xué)習(xí)記憶、自主活動等行為變化是一個重要方面，開場行為實(shí)驗(yàn)可以提供動物自主活動的變化和探究行為的信息[7]。本研究發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)的感染性腦損傷小鼠在開場行為實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)受到顯著影響?？梢钥吹叫∈笤谒慕?、四邊區(qū)域的運(yùn)動較頻繁，軌跡較多在出現(xiàn)在活動箱子的邊緣，而出現(xiàn)在四周的軌跡次之，出于探索周圍環(huán)境的本能，小鼠會向中央?yún)^(qū)域運(yùn)動，但在中央?yún)^(qū)域的活動軌跡相對而言是最少的。LPS處理后，小鼠在開場環(huán)境中行為學(xué)發(fā)生改變，活動總路程的明顯縮短且穿格次數(shù)顯著減少?？偮烦堂黠@縮短表明小鼠的自主性活動大幅減少，而穿格次數(shù)減少則說明小鼠的探索行為被顯著抑制。

很多的藥物會通過對動物腦的作用而影響動物的行為。作為心血管疾病的藥物，橙皮苷可使感染性腦損傷小鼠的自主活動顯著增加、探索行為增多，表明小鼠腦損傷有所緩解。本研究揭示，橙皮苷對小鼠感染性腦損傷有一定的治療和康復(fù)作用，其具體的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)室將進(jìn)一步研究。

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[責(zé)任編輯：楊玉潔]