尿碘水平現(xiàn)已成為國家防治IDD最重要的監(jiān)測(cè)指標(biāo),它能更為直觀反映出地方居民碘營養(yǎng)狀況,因此尿碘結(jié)果準(zhǔn)確性直接影響當(dāng)?shù)氐馊狈Σ》揽卣遊1]。近兩年,我市加大尿碘監(jiān)測(cè)力度,采用尿碘快速定量檢測(cè)試劑盒法測(cè)定了5萬余份尿樣標(biāo)本(孕婦兒童為主)。由于時(shí)間緊,工作量大,有些尿碘檢測(cè)結(jié)果誤差較大,部分尿碘結(jié)果不是很理想,返工率高達(dá)11.7%。通過實(shí)驗(yàn)過程得到一些體會(huì),與同行們交流。
1試驗(yàn)
1.1 方法原理:
尿碘檢測(cè)采用碘催化砷鈰反應(yīng)的原理,使用指示劑指示反應(yīng)終點(diǎn),根據(jù)尿碘含量與反應(yīng)時(shí)間成冪函數(shù)的定量關(guān)系計(jì)算尿碘濃度。
1.2試劑:
尿碘定量檢測(cè)試劑盒AR型,由武漢眾生生化技術(shù)有限公司提供。
1.3 分析方法:
11.7%的尿樣結(jié)果不理想,通過尿樣復(fù)查,來分析試驗(yàn)失敗的可能原因。
2結(jié)果與討論
2.1 尿樣的采集與送檢對(duì)尿碘結(jié)果的影響:
尿樣的采集與送檢一般都是地方防保人員完成,實(shí)驗(yàn)室人員基本不參與。由于沒有經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)和指導(dǎo),要完全做到試劑說明書中的規(guī)范要求要求非常難。據(jù)現(xiàn)場調(diào)查了解,有的工作人員采樣很隨意,將尿瓶直接發(fā)給居民自行采集,不作任何說明,這樣就不能保證采樣規(guī)范,甚至有人將自來水裝入尿瓶中,因此每次都發(fā)現(xiàn),少部分尿碘結(jié)果嚴(yán)重偏低,脫離實(shí)際,給結(jié)果判定帶來困難。標(biāo)本采集后,不能保證標(biāo)本及時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室內(nèi),也不放入低溫冰箱內(nèi),夏天對(duì)尿碘結(jié)果影響特別大。實(shí)驗(yàn)證明,很多重新采集的尿樣標(biāo)本復(fù)做結(jié)果很理想,更能反應(yīng)出尿樣采集不規(guī)范。建議對(duì)采樣要求有個(gè)規(guī)范說明,并分發(fā)到每一位采樣人員。
2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與器皿對(duì)尿碘結(jié)果的影響:
砷鈰反應(yīng)是在試管中進(jìn)行,這就要求試管對(duì)實(shí)驗(yàn)不能有任何干擾作用。試管在不損壞的情況下,都是重復(fù)使用,試管必須潔凈,不能殘留上一次試驗(yàn)帶來的碘污染。使用過的試管應(yīng)先用自來水沖洗干凈,浸泡于10%鹽酸溶液中24小時(shí),取出后再用自來水沖洗干凈,最后用蒸餾水或去離子水反復(fù)沖洗數(shù)次,晾干使用。由于本中心暫時(shí)沒有專門用于尿碘測(cè)定的實(shí)驗(yàn)室,試管的洗刷經(jīng)常與其他實(shí)驗(yàn)器皿一起進(jìn)行,而且一次清洗試管數(shù)量很多,要達(dá)到以上清洗要求較難,和同行交流,發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室都存在這種情況。使用的加樣器要定期校準(zhǔn)檢定,吸頭若出現(xiàn)掛珠現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)更換。實(shí)驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)使用電熱干燥箱消解效果要好于恒溫消解儀。
2.3 操作細(xì)節(jié)對(duì)尿碘結(jié)果的影響
2.3.1 試液消化完畢后,一定要冷卻至室溫再加入還原劑,不能因?yàn)闃?biāo)本量多而忽視本步驟,影響測(cè)定結(jié)果。指示劑在溶液中時(shí)間過長易鈍化,一次加入管數(shù)不要過多,以20管為宜。但實(shí)際操作中,由于標(biāo)本數(shù)量較多,此點(diǎn)要求很難做到,只能依靠加快操作速度來減少此步驟帶來的誤差。
2.3.2 本方法采用碘催化砷鈰反應(yīng)的原理,因此反應(yīng)速度與溫度關(guān)系密切,反應(yīng)時(shí)間對(duì)室溫很敏感,要求實(shí)驗(yàn)室必須配有空調(diào)設(shè)施,保證實(shí)驗(yàn)過程中,室溫保持一致。本方法最佳測(cè)定溫度范圍是15—25℃。
2.3.3 反應(yīng)終點(diǎn)觀察是本實(shí)驗(yàn)成敗與否的關(guān)鍵,理想情況下,突變點(diǎn)的確定應(yīng)由一人完成,才能將主觀因素帶來的誤差降至最低。大批量檢測(cè)過程中,要做到這一點(diǎn)很難。這就要求實(shí)驗(yàn)人員多溝通,多交流,在突變點(diǎn)確定上達(dá)成一致,形成統(tǒng)一判定標(biāo)準(zhǔn),盡量減少主觀誤差。
2.3.4 由于本實(shí)驗(yàn)要求較高,實(shí)驗(yàn)溫度和環(huán)境對(duì)結(jié)果測(cè)定影響較大,因此每批樣品測(cè)定都應(yīng)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值>0.995),同時(shí)加入高、中、低標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度[2]。若用回歸方程計(jì)算尿碘含量比較繁瑣,一般采用試劑廠家提供的計(jì)算程序進(jìn)行結(jié)果計(jì)算,操作方便快捷,適合大批量檢測(cè)。
以上幾點(diǎn)是近年尿碘檢測(cè)過程中,造成尿碘結(jié)果不理想的主要原因,任何一點(diǎn)控制不好,都會(huì)使實(shí)驗(yàn)失敗。雖然此方法是目前尿碘檢測(cè)中最快速便捷的實(shí)驗(yàn)方法,但是此方法并不太適合大批量尿碘檢測(cè)。一旦尿樣數(shù)量巨大,實(shí)驗(yàn)中幾點(diǎn)主要影響因素很難控制,影響實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。在此建議,若開展尿碘檢測(cè),最少要有兩名專業(yè)尿碘檢測(cè)人員和專門尿碘檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室;尿樣送檢要有計(jì)劃,盡量避免集中大批量送檢,確保每天尿樣檢測(cè)量不要超過200份,最好控制在100份左右,這樣才能保證檢測(cè)質(zhì)量。在此,我們更期待尿碘自動(dòng)化測(cè)定儀研制上市和普及[3],它將極大減少大批量檢測(cè)帶來的不便與誤差,更好服務(wù)于碘缺乏病的防控工作。
參考文獻(xiàn)
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[2] 萬琛,龔燕.宋振威.快速定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定尿碘的方法驗(yàn)證[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,19(9):2002-2003.
[3] 劉玉文, 楊巖.全自動(dòng)生化分析儀尿碘測(cè)定方法研究[J]. 首都公共衛(wèi)生, 2011, 5(3): 106-109.