摘 要:采用分光光度法測(cè)定乳粉中左旋肉堿的含量,從溫度和時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響進(jìn)行分析研究,
關(guān)鍵詞:分光光度法;左旋肉堿;反應(yīng)溫度;反應(yīng)時(shí)間
中圖分類號(hào):TS252.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A 文章編號(hào):1001-4942(2013)11-0120-03
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑
1.1.1 試驗(yàn)材料 兩種乳粉,標(biāo)記為樣品1和樣品2。
1.1.2 儀器
1.2 試驗(yàn)原理
試樣經(jīng)過(guò)水提取,用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后過(guò)濾,濾液經(jīng)堿皂化后使其中結(jié)合態(tài)的左旋肉堿游離出來(lái);左旋肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶的催化下反應(yīng)生成乙酰肉堿和游離的輔酶A;
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 樣品處理
1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置 2 結(jié)果與分析
2.1 加入顯色劑和乙酰輔酶A后反應(yīng)溫度和時(shí)間的確定
吸光度隨時(shí)間的變化
2.2 加入乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶后反應(yīng)溫度和時(shí)間的確定
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及樣品測(cè)定將分光光度計(jì)的波長(zhǎng)調(diào)為412 nm。準(zhǔn)確吸取2 ml不同濃度左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品處理液至具塞比色皿中,加入0.8 ml顯色劑和100 μl乙酰輔酶A溶液,混合均勻后放入分光光度計(jì)中并計(jì)時(shí), 6 min后歸零;迅速加入100 μl乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液,混合均勻后放入分光光度計(jì)中,反應(yīng)6 min后記錄吸光度(表1)。以左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程相關(guān)系數(shù)R=1,由此計(jì)算出樣品1乳粉中左旋肉堿的含量為25.8 mg/100g,樣品2為24.2 mg/100g。
表1 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液的吸光度
3 小結(jié)
在加入顯色劑和乙酰輔酶A后,試劑會(huì)產(chǎn)生一個(gè)本底值吸光度,所以在測(cè)量中要扣除該吸光度。溫度對(duì)反應(yīng)的影響比較顯著,在比較高的溫度(29℃)下反應(yīng)時(shí)間縮短,但不宜控制,故選用室溫24℃并保持實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溫度恒定,在此條件下,加入顯色劑和乙酰輔酶A 6 min后歸零,再加入乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)6 min。如果環(huán)境溫度較低,可以適當(dāng)延長(zhǎng)歸零時(shí)間和反應(yīng)時(shí)間至10 min。
參 考 文 獻(xiàn):
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