張蕊 張葳葳

(黑龍江省計(jì)量檢定測試院 黑龍江哈爾濱 150036)

尿素血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于生化分析儀的檢定校準(zhǔn)[1]及日常質(zhì)控,為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠,我們選取人血清作為全自動生化分析儀的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),就很好的解決了規(guī)程中提及的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)試劑作為全自動生化分析儀標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不適用的問題。同時,為了保證制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的可溯性,筆者采用分光光度法對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。按照國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范要求[2,3],制備出尿素(UREA)血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),并對其定值不確定度進(jìn)行了評定。

1 血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備

收集健康人的新鮮血清,要求肝功能正常,HBsAg陰性,外觀清澈透明,無溶血和黃疸,置低溫冰箱數(shù)天,制備前移放于4℃冰箱緩慢溶化,人血清基體作勻質(zhì)處理,然后離心沉淀兩次,透析出約1/3水分,再加入1/3的乙二醇混勻,分裝于棕色小瓶中貯存于低溫冰箱,以備進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)。

2 定值、均勻性及穩(wěn)定性檢驗(yàn)

2.1 定值

測定原理[4](酶偶聯(lián)法):尿素被尿酶分解成二氧化碳和氨,在堿性條件下,亞硝酸鐵氰化鈉作催化劉,氨與苯酚(顯色劑П)和次氯酸鈉(顯色劑I)反應(yīng)生成藍(lán)色的吲哚酚,筆者采用高精度分光光度測量裝置(吸光度參數(shù)采用絕對法標(biāo)定),在620nm波長下,測定吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線確定其濃度含量。

2.2 均勻性和穩(wěn)定性檢驗(yàn)[5]

在配制的同一批樣品中,均勻性檢驗(yàn)取5瓶樣品,分別檢測5次,測量數(shù)據(jù)(表1)經(jīng)方差分析法檢驗(yàn),驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品均勻性一致。穩(wěn)定性考察是定期取5個相同樣品進(jìn)行檢測,測量數(shù)據(jù)(表2)經(jīng)統(tǒng)計(jì)法的t檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn),驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品在24個月期間內(nèi)是穩(wěn)定的。

3 定值結(jié)果不確定度的評定

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度來源為:尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程引入的不確定度;尿素標(biāo)準(zhǔn)工作液曲線校準(zhǔn)引入的不確定度;移液器取樣引入的不確定度;定值儀器測量引入的不確定度。

試劑空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 樣品管 工作試劑（ml） 1.5 1.5 1.5 標(biāo)準(zhǔn)液（ul） 50 樣品（ul） 50 充分混合，37水浴10分鐘 顯色劑1（ml） 1 1 1 顯色劑2（ml） 1 1 1 充分混合，37水浴5分鐘，各管加15ml蒸餾水，混勻，上機(jī)測定

表1

3.1 尿素標(biāo)準(zhǔn)工作配制過程引入的不確定度 )( 0cu

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100mmol/L)的配制,準(zhǔn)確稱取GBW06501尿素中N成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.2858g,加去離子水溶于100ml容量瓶中。

m:國家標(biāo)物GBW06501尿素質(zhì)量 M:尿素摩爾質(zhì)量P : 尿素的純度 V:尿素體積

f1:尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液至尿素標(biāo)準(zhǔn)系列工作的稀釋倍數(shù)

3.2 工作液標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)生產(chǎn)的不確定度 )(Yu

尿素標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的配制,移取100mmol/L尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5ml、5ml、7.5ml、10ml于100ml容量瓶中,加水定容,溶液度為2.5mmol/L、5mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L。

(1)擬合過程,采用4個濃度水平的尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液,用分光光度法分別測定,得到相應(yīng)得吸光度值,用最小二乘法進(jìn)行擬合,得到直線方程和相關(guān)系數(shù)。

(2)由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合帶來的不確定度:

3.3 移液器取樣引入的不確定度 )( 05.0Vu

3.4 高精度分光光度計(jì)測量引入的不確定度 )(Au

3.5 不確定度的合成

UREA血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

尿素血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度可表示為(5.32±0.16)mmol/L。

4 結(jié)語

我們以健康人的血清作為基體制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)經(jīng)監(jiān)測,能穩(wěn)定的給出被標(biāo)值的量,貼近儀器的正常工作狀態(tài),均勻性良好,把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期定為1～2年是非?？尚械摹Ｍㄟ^對制備定值過程不確定度進(jìn)行綜合評定,不確定度為。此標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制,為實(shí)驗(yàn)室檢測量值溯源,保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)基礎(chǔ)。

[1]YY/T0654-2008《全自動生化分析儀行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》.

[2]JJF1218-2009 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制報(bào)告編寫規(guī)則.

[3]JJG1006-1994 一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范.

[4]自動分析法—臨床化學(xué)常用項(xiàng)目.遼寧科學(xué)技術(shù)出版社.

[5]標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)用指南.全國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理委員會編.中國計(jì)量出版社.