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(1 青島市市立醫(yī)院干部保健二科，山東 青島 266071； 2 齊魯石化醫(yī)院集團(tuán)勝利醫(yī)院)

慢性胃炎(CG)是臨床上一種常見的消化系統(tǒng)疾病，該病嚴(yán)重者可以影響人們的生活質(zhì)量。在引起CG的眾多致病因素中幽門螺桿菌(Hp)的作用不容忽視，Hp可以引起強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)，同時(shí)刺激免疫細(xì)胞引起黏膜一系列免疫炎癥反應(yīng)。白細(xì)胞介素(IL)-17是一種新型促炎癥細(xì)胞因子，IL-6和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)不僅參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)也是Th17細(xì)胞重要的分化調(diào)節(jié)因子[1]。目前3種細(xì)胞因子在CG進(jìn)展中的作用尚不十分清楚，本文通過檢測IL-17、IL-6、TGF-β1在炎癥程度不同以及有無Hp感染的CG病人血清及胃黏膜組織中的表達(dá)，探討三者在CG發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的作用?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 對象與分組

于青島市市立醫(yī)院消化內(nèi)科、普外科門診及病房選取CG病人141例，男95例，女46例，平均年齡(54.67±10.81)歲。均經(jīng)胃鏡活檢證實(shí)為慢性淺表性胃炎(CSG)或慢性萎縮性胃炎(CAG)。CSG者91例，輕中度51例，重度40例；CAG者50例，輕中度36例，重度 14例。按有無Hp感染CSG病人分為Hp(+)組39例和Hp(-)組52例；CAG病人分為Hp(+)組21例和Hp(-)組29例。所有病人在入選前3個(gè)月內(nèi)均未服用非甾體抗炎藥、抗生素、鉍劑及大量飲酒。對照組50例為我院體檢中心健康查體者，男22例，女28例，平均年齡(55.86±9.10)歲，經(jīng)胃鏡活檢證實(shí)無明顯炎癥、潰瘍及惡性病變，Hp均為陰性。選取其中26例作為組織學(xué)對照，男14例，女12例，平均年齡(47.75±13.59)歲。本研究參與者均知情，并簽署知情同意書，方案經(jīng)青島市市立醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1標(biāo)本采集 各組受檢者均于清晨空腹采集靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心15 min，取血清置于-70 ℃保存待檢。胃黏膜組織標(biāo)本均來自內(nèi)鏡活檢組織，所有受檢者在內(nèi)鏡下于胃竇處獲取組織2～3塊。標(biāo)本采集后經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定、石蠟包埋，送病理組織學(xué)檢查。

1.2.2Hp檢測 采用組織切片染色方法和胃黏膜組織快速尿素酶試驗(yàn)來判定有無Hp感染，兩者任一陽性即認(rèn)為存在Hp現(xiàn)癥感染。組織切片采用改良Giemsa染色，高倍鏡下觀察，切片中任一視野下可見Hp即判為Hp陽性。

1.2.3血清中IL-17、IL-6和TGF-β1檢測 采用ELISA法，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，試劑盒購于晶美生物工程有限公司。

1.2.4IL-17、IL-6、TGF-β1的免疫組化檢測 石蠟包埋的組織標(biāo)本以5 μm厚度連續(xù)切片，脫臘、梯度乙醇水化，用檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)微波修復(fù)15 min，體積分?jǐn)?shù)0.03過氧化氫封閉10 min，PBS洗滌，一抗室溫孵育1 h，PBS洗滌，加入通用型超敏二抗室溫孵育15 min，PBS洗滌，DAB顯色沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水、透明并樹膠封片。結(jié)果判定：IL-17、IL-6、TGF-β1陽性顆粒呈深棕色或黃褐色，主要定位于淋巴細(xì)胞的胞漿和(或)胞膜。按細(xì)胞染色深淺計(jì)分：無顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野中1 000個(gè)炎性細(xì)胞，按染色細(xì)胞陽性率計(jì)分：陰性為0分，陽性細(xì)胞率<25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。兩項(xiàng)計(jì)分相加，0分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性()，6～7分為強(qiáng)陽性()。

2 結(jié) 果

2.1 CG病人血清中IL-17、IL-6、TGF-β1的濃度

各種細(xì)胞因子的濃度CG重度組病人均顯著高于對照組和CG輕中度組，CG輕中度組除IL-6外均顯著高于對照組(F=10.47～25.64，q=3.14～10.04，P<0.05)。CG Hp(+)組病人血清IL-17、TGF-β1、IL-6的濃度均顯著高于Hp(-)組病人(t=4.45～7.00，P<0.05)。見表1～4。

表1 不同程度CSG病人和對照組血清中IL-17、IL-6、TGF-β1濃度的比較

3組比較，F(xiàn)=10.47～25.64，P<0.05。

表2 不同程度CAG病人和對照組血清中IL-17、IL-6、TGF-β1濃度的比較

3組比較，F(xiàn)=11.84～23.69，P<0.05。

表3 Hp(+)和Hp(-)CSG病人血清中IL-17、IL-6、TGF-β1濃度的比較

與Hp(-)組比較，*t=4.45～5.04，P<0.05。

表4 Hp(+)和Hp(-)CAG病人血清中IL-17、IL-6、TGF-β1濃度的比較

與Hp(-)組比較，*t=4.78～7.00，P<0.05。

2.2 CG組織中IL-17、IL-6、TGF-β1的表達(dá)

IL-17、IL-6、TGF-β1表達(dá)于CG組織的淋巴細(xì)胞細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿中，少量中性粒細(xì)胞中也可見三者的表達(dá)，胃黏膜上皮細(xì)胞中未見三者的表達(dá)。對照組胃黏膜上皮細(xì)胞中未見IL-17、IL-6、TGF-β1的表達(dá)，僅在少量炎癥細(xì)胞中見三者呈弱陽性表達(dá)。IL-17、IL-6、TGF-β1的表達(dá)水平CG輕中度組和重度組均高于對照組，重度組均高于輕中度組(χ2=20.03～35.35，P<0.01)。CG Hp(+)組胃黏膜組織中IL-17、IL-6、TGF-β1的表達(dá)水平顯著高于Hp(-)組(χ2=14.29～22.41，P<0.01)。見表5～8。

表5 CSG組織中IL-17、IL-6、TGF-β1表達(dá)水平的比較(例)

3組比較，χ2=29.09～35.35，P<0.01。

表6 CAG組織中IL-17、IL-6、TGF-β1表達(dá)水平的比較(例)

3組比較，χ2=20.34～24.02，P<0.01。

表7 Hp(+)和Hp(-)CSG組織中IL-17、IL-6、TGF-β1表達(dá)水平的比較(例)

與Hp(-)組比較，χ2=14.29～20.12，P<0.01。

表8 Hp(+)和Hp(-)CAG組織中IL-17、IL-6、TGF-β1表達(dá)水平的比較(例)

與Hp(-)組比較，χ2=14.90～22.41，P<0.01。

2.3 CG病人血清和胃黏膜組織中IL-17與IL-6、TGF-β1表達(dá)的相關(guān)性

CSG和CAG病人血清中IL-17與IL-6、TGF-β1的表達(dá)無明顯相關(guān)性(r=0.102～0.237，P>0.05)。胃黏膜組織中IL-17與IL-6、TGF-β1的表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.417～0.691，P<0.01)。

3 討 論

本文結(jié)果顯示，CG病人血清和胃黏膜組織中IL-17、IL-6、TGF-β1的表達(dá)均較正常對照組增強(qiáng)，并且IL-17、TGF-β1在血清和胃黏膜組織中的表達(dá)均與炎癥程度呈正相關(guān)，IL-6在胃黏膜組織中的表達(dá)與炎癥程度呈正相關(guān)。此外，三者在Hp(+)組血清和胃黏膜組織中的表達(dá)均較Hp(-)組增強(qiáng)。IL-17是一種促進(jìn)炎癥發(fā)生的重要的可溶性因子，是由輔助性Th17細(xì)胞分泌并介導(dǎo)先天性免疫和獲得性免疫的關(guān)鍵細(xì)胞因子，存在于多種慢性炎性疾病中[2]。IL-17能促進(jìn)機(jī)體局部產(chǎn)生趨化因子，從而有利于炎癥細(xì)胞迅速聚集，增強(qiáng)局部炎癥反應(yīng)。Hp感染者胃黏膜組織IL-17的mRNA及蛋白水平均明顯升高，根除Hp后IL-17水平明顯下降。IL-6是一種具有強(qiáng)大生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，參與機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)以及造血調(diào)控等生理功能，由激活的巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞及淋巴細(xì)胞分泌，可作用于多種效應(yīng)細(xì)胞，還可影響特異性抗原抗體免疫反應(yīng)，并具有免疫增強(qiáng)作用[3-4]。ELSEWEIDY等[5]研究顯示，被Hp感染的實(shí)驗(yàn)鼠血清IL-6水平顯著升高。TGF-β1是一種免疫調(diào)節(jié)因子，能夠抑制免疫活性細(xì)胞的增殖與分化。有研究結(jié)果顯示，根除Hp治療后可以使消化性潰瘍病人胃黏膜組織TGF-β1水平顯著下降[6]。因此，推測3種細(xì)胞因子可能在CG的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮促進(jìn)作用，同時(shí)也可能參與Hp的致病過程。

目前研究認(rèn)為，IL-6和TGF-β1是誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子，在兩者共存的狀態(tài)下，通過激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活子(STAT3)通路并誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt受體的表達(dá)，促使初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，最終導(dǎo)致IL-17的生成增加[7]。本研究顯示，CG病人血清中IL-17 的濃度與IL-6和TGF-β1的濃度無明顯相關(guān)性，然而在病變組織中，IL-17與IL-6和TGF-β1的表達(dá)呈正相關(guān)。推測在CG病變組織中，IL-6和TGF-β1表達(dá)增加可能是IL-17生成的促進(jìn)因素，三者在CG發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮協(xié)同作用。ZHANG等[8]的研究顯示，外周血與原發(fā)性肝癌組織中的Th17細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)。循環(huán)中的Th17細(xì)胞可通過其表面表達(dá)的趨化因子受體與組織局部的趨化因子結(jié)合，如CCL20/CCR6，進(jìn)而在局部組織聚集發(fā)揮作用。因此，推測Th17細(xì)胞在外周血和組織中的分布差異可能導(dǎo)致了外周血與組織中這種相關(guān)性的差異，但其確切機(jī)制還需大量資料進(jìn)一步研究。

總之，在CG發(fā)生與發(fā)展過程中存在多種致病因素，炎癥釋放多種細(xì)胞因子，并產(chǎn)生免疫反應(yīng)，這些細(xì)胞因子之間相互制衡或相互促進(jìn)，以致感染持續(xù)存在。了解細(xì)胞因子在疾病中的作用機(jī)制，可以為治療并預(yù)防疾病提供一定的理論依據(jù)。

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