，，，，

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 青島 266003 1 消化內(nèi)科； 2 普外科； 3 病理科)

胃癌是目前世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，而大多數(shù)胃癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于晚期，因此早期診斷、早期治療一直是胃癌研究的重點(diǎn)。腫瘤的發(fā)生發(fā)展有賴于腫瘤新生血管的生成，因此抑制腫瘤新生血管形成成為治療惡性腫瘤的靶向目標(biāo)。Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是一種細(xì)胞間信號(hào)通路，已有研究表明，Notch信號(hào)通路重要配體DLL4在腫瘤血管新生中發(fā)揮重要作用[1-2]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前已知的作用最強(qiáng)的血管形成刺激因子之一，它是評(píng)價(jià)新生血管的有效指標(biāo)[3],其中VEGF-C被認(rèn)為參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展[4]。本研究旨在聯(lián)合檢測(cè)胃癌病人血清DLL4、VEGF水平的變化，探討兩者在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其對(duì)胃癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2011年3月—2012年5月收診的初治胃癌病人62例(胃癌組)，其中男37例，女25例；年齡35～72歲，平均(52.4±7.6)歲，均經(jīng)病理檢查證實(shí)，未行放化療。胃腺瘤病人34例(胃腺瘤組)，其中男20例，女14例；年齡為28～67歲，平均(46.6±5.8)歲。另收集健康查體者30例(對(duì)照組)，其中男18例，女12例；年齡25～58歲，平均(36.2±7.6)歲。

1.2 標(biāo)本收集與儲(chǔ)存

所有受檢者均于未治療前采集清晨空腹靜脈血4 mL,以4 000 r/min離心分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆茫唤?jīng)手術(shù)治療的癌癥病人于術(shù)后2周同法收集血清冷存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

血清DLL4、VEGF水平應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA法)進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，在波長(zhǎng)450 nm處讀取吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算血清DLL4、VEGF水平。人DLL4的ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司，人VEGF的ELISA試劑盒購(gòu)自上海越研生物科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

胃癌病人術(shù)前血清DLL4和VEGF水平均顯著高于胃腺瘤組和對(duì)照組(F=811.84、831.83,q=41.30～50.14,P<0.01)。見(jiàn)表1。兩者在胃癌術(shù)前血清中的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)(t=2.27～6.87,P<0.05)，而與病人的性別、年齡、腫瘤大小、Borrmann分型無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2。胃癌組術(shù)后2周血清DLL4和VEGF水平均較手術(shù)前顯著下降(t=82.11、184.66,P<0.01)。見(jiàn)表3。胃癌組DLL4和VEGF的表達(dá)水平呈明顯的正相關(guān)(r=0.870,P<0.01)。

3 討 論

腫瘤的生長(zhǎng)總是伴隨著其周圍血管的形成，1971年FOLKMAN[5]提出“腫瘤血管形成依賴學(xué)說(shuō)”，使人們對(duì)腫瘤生長(zhǎng)與血管發(fā)生有了更為深刻的認(rèn)識(shí)。Notch信號(hào)通路是細(xì)胞間一種重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在腫瘤新生血管形成中起重要作用。DLL4是Notch信號(hào)通路中的重要配體，主要表達(dá)于新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)和造血組織中。近年來(lái)研究表明，DLL4-Notch受體通路廣泛參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等，并且與腫瘤血管形成有關(guān)[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，胃癌病人血清DLL4表達(dá)明顯高于正常人，且DLL4的血清學(xué)表達(dá)水平與胃癌的組織學(xué)分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)，與張安華[7]等報(bào)道的DLL4蛋白在胃癌組織中的表達(dá)結(jié)果相一致，提示DLL4可能參與了胃癌的發(fā)生。這可能與DLL4-Notch信號(hào)通路對(duì)腫瘤的血管發(fā)生有關(guān)，提示DLL4有可能成為判斷胃癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的一個(gè)新的血清學(xué)指標(biāo)。

表1 各組術(shù)前血清DLL4和VEGF水平比較

與其他組比較，F(xiàn)=811.84、831.83,*q=41.30、50.14,P<0.01。

表2 胃癌組術(shù)前血清DLL4和VEGF水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3 胃癌組術(shù)前與術(shù)后血清DLL4和VEGF水平變化

與術(shù)前比較，*t=82.11、184.66,P<0.01。

VEGF是參與腫瘤血管形成的重要因素之一，它可以通過(guò)調(diào)節(jié)血管和淋巴管生成，增加其通透性而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。有研究證實(shí)其參與了宮頸癌等腫瘤的形成過(guò)程[8]。本研究結(jié)果顯示，胃癌病人血清VEGF水平明顯升高，與王海莉等[9]的研究結(jié)果相符，提示VEGF可能參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞分泌大量VEGF，而VEGF又能促進(jìn)腫瘤血管形成[10],從而提供腫瘤生成所需要的氧和營(yíng)養(yǎng)成份。表明VEGF是判斷胃癌預(yù)后的不良指標(biāo)之一。

本研究結(jié)果還顯示，DLL4和VEGF在胃癌血清中的表達(dá)呈顯著正相關(guān),隨著VEGF水平表達(dá)的升高，DLL4表達(dá)也相應(yīng)升高。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)還證實(shí)手術(shù)后胃癌病人血清DLL4與VEGF水平較術(shù)前明顯降低，這些均表明了DLL4-Notch信號(hào)通路與VEGF共同參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。體外研究結(jié)果顯示，DLL4可能是VEGF的一個(gè)下游基因，與VEGF之間存在負(fù)反饋機(jī)制，即VEGF上調(diào)DLL4的表達(dá)，而DLL4又通過(guò)某種途徑影響 VEGF的表達(dá)[11]?？梢?jiàn)，兩者相互作用共同調(diào)節(jié)腫瘤的血管發(fā)生，這與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果相一致。

目前，抗腫瘤血管發(fā)生是一種全新的治療策略，DLL4-Notch信號(hào)通路與VEGF共同作用對(duì)腫瘤血管發(fā)生發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究表明，阻斷DLL4-Notch通路與抗VEGF聯(lián)合治療能有效抑制小鼠實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)。迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有關(guān)DLL4與VEGF在胃癌血清中表達(dá)關(guān)系的報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)胃癌血清中兩者相關(guān)性分析顯示，兩者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，說(shuō)明兩者共同參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。DLL4與VEGF聯(lián)合檢測(cè)可以作為胃癌早期診斷與判斷胃癌預(yù)后的新指標(biāo)，阻斷DLL4-Notch受體通路有可能成為胃癌抗血管形成治療的新的靶向目標(biāo)。

[1] SCEHNET J S, JIANG W, KUMAR S R, et al. Inhibition of DLL4 mediated signaling induces pmliforation of immature vessels and results in poor tissue perfusion[J]. Blood, 2007,109(11):4753-4760.

[2] RIDGWAY J, ZHANG G, WU Y, et al. Inhibition of DLL4 signalling inhibits tumour growth by deregulating angiogenesis[J]. Nature, 2006,444(7122):1083-1087.

[3] BROOKS P C, MONTGOMERY A M, CHERESH D A. Use of the 10-day-old chick embryo model for studying angioge-nesis[J]. Methods Mol Biol, 1999,129:257-269.

[4] 趙光兵,宋修岐,孫少杰. 胃癌組織Survivin和VEGF-C的表達(dá)及意義[J]. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009,45(5):465-467.

[5] FOLKMAN J. Tumor angiogenesis therapeutic implication[J]. J Invest Dermatal, 1972,59:40-43.

[6] LESLIE J D, ARIZA-MCNAUGHTON L, BERMANGE A L, et al. Endothelial signalling by the notch ligand delta-like 4 restricts angiogenesis [J]. Development, 2007,134(5):839-844.

[7] 張安華,孫華文,蘇錦松,等. Notch1/DLL4信號(hào)通路與VEGF在胃癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)性[J]. 中國(guó)普外科雜志, 2010,19(4):375-378.

[8] 榮曉云,王言奎. 宮頸癌及癌前病變組織Fox-M1與VEGF表達(dá)及相關(guān)性[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2011,26(4):471-473.

[9] 王海莉,崔凱,張雪峰,等. 胃癌病人血清VEGF水平和癌組織VEGF表達(dá)的關(guān)系及臨床意義[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 2009,16(2):77-78.

[10] FERRARA N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress[J]. Endocr Rev, 2004,25(4):581-611.

[11] WILLIAMS C K, LI J L, MURGA M, et al. Upregulation of the Notch ligand delta-like 4 inhibits VEGF-induced endothelial cell function[J]. Blood, 2006,107:931-939.