薛仰全，倪興軍，余四九

同期發(fā)情是胚胎移植的關(guān)鍵技術(shù)，母牛的發(fā)情周期由多種激素相互調(diào)節(jié)控制，利用外源激素同期發(fā)情可以大大提高母牛繁殖力，縮短產(chǎn)犢間隔，節(jié)約人力、物力、時間，方便集約化生產(chǎn)管理，促進(jìn)人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用以及提高胚胎移植效率，在生產(chǎn)上有著重要的實(shí)用價值。本試驗(yàn)通過對比PRID＋PGF2α法和PGF2α＋PGF2α法誘導(dǎo)母牛同期發(fā)情效果，為酒泉本地胚胎移植選擇高效的同期發(fā)情方法。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選擇酒泉當(dāng)?shù)赝岭s牛、西雜牛和黑白花奶牛為同期發(fā)情受體牛。要求具備：直檢無繁殖機(jī)能障礙、生殖器官疾病和傳染病，個體大，體型結(jié)構(gòu)良好，骨盆較寬大，膘情中等水平；年齡在3～6歲之間，無流產(chǎn)史。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)

甘肅祁牧乳業(yè)有限責(zé)任公司、酒泉市雄鵬乳業(yè)有限責(zé)任公司、酒泉市旺達(dá)養(yǎng)殖專業(yè)合作社和酒泉市肅州區(qū)清水鎮(zhèn)東三村養(yǎng)殖小區(qū)。

1.3 試驗(yàn)時間

2011年3月至2011年7月。

1.4 試驗(yàn)藥品

PGF2α（氯前列烯醇：0.2mg／2mL／瓶、批號000513）：上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所；PRID（Y型牛孕酮緩釋陰道栓，1.9g／枚）：上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所。

1.5 同期發(fā)情處理方法

方法Ⅰ：PRID＋PGF2α法：不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天給受體牛放入PRID，此時定為0d。在放入PRID的第9d，肌肉注射PGF2α0.4mg。在第11d取出PRID，然后觀察發(fā)情。

方法Ⅱ：PGF2α＋PGF2α法：不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天每頭受體牛肌注PGF2α0.6mg／次，并把該天記做第0d，第11d再肌注PGF2α0.4mg。

1.6 發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)

從觀察受體牛發(fā)情之日起，以穩(wěn)定站立接受爬跨，發(fā)情旺盛期從陰門流出大量透明黏液，作為發(fā)情判斷標(biāo)準(zhǔn)，并確定為發(fā)情時間。同期發(fā)情率為取出PRID或二次注射PGF2α后12～48h內(nèi)發(fā)情的百分率，黃體合格為A、B級。以發(fā)情當(dāng)日為第0d計(jì)算，第7d人工授精或移植胚胎，70d直檢確定受胎率。

1.7 飼養(yǎng)管理方式

按飼養(yǎng)企業(yè)的正常飼養(yǎng)方案飼養(yǎng)管理。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS Statistics17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)意義分析。

2 結(jié)果

2.1 不同處理方法同期發(fā)情率的比較

在本試驗(yàn)結(jié)果表明，如表1所示。三個試驗(yàn)區(qū)域平均同期發(fā)情率：PGF2α＋PGF2α法為74.29%，PRID＋PGF2α法為76.92%，兩者差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.792＞0.05），但PRID＋PGF2α法處理的受體牛平均同期發(fā)情率高于PGF2α＋PGF2α法受體牛的平均同期發(fā)情率。

2.2 不同同期發(fā)情方法胚移妊娠率的比較

在試驗(yàn)同期發(fā)情率比較研究的基礎(chǔ)上，將甘肅祁牧乳業(yè)有限責(zé)任公司從加拿大愛德現(xiàn)代牛業(yè)（中國）有限公司購買的40枚荷斯坦奶牛胚胎移植。結(jié)果如下：

由表2可知，PRID＋PGF2α處理的受體牛移植妊娠率為66.67%，用 PGF2α＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率為63.14%，兩者差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.816＞0.05）。但PRID＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率略高于用PGF2α＋PGF2α法處理的受體牛移植妊娠率。

表1 不同同期發(fā)情處理方法發(fā)情率比較表

表2 不同同期發(fā)情方法對受體牛移植妊娠率的影響

3 討論

3.1 不同處理方法對同期發(fā)情效果的影響

同期發(fā)情技術(shù)是通過溶黃體或撤除外源性激素使外周血液中孕酮或孕激素含量迅速下降，以達(dá)到同期發(fā)情的目的（Roche J，1981）。牛同期發(fā)情處理主要采用3種制劑：抑制卵泡發(fā)育的制劑，如孕激素；溶解黃體的制劑，如前列腺素；促進(jìn)卵泡發(fā)育的制劑，如促性腺激素［1］。

在整個母牛的發(fā)情周期中，黃體期約占70%。而黃體分泌的孕酮能對卵泡的發(fā)育成熟產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，只有當(dāng)黃體消退后，孕酮含量下降，卵泡才能發(fā)育至成熟，母牛才能進(jìn)入發(fā)情。因此，控制黃體的消長，就是控制母牛發(fā)情的關(guān)鍵［2］。目前，可通過制造人為的黃體期和消除黃體來控制黃體的消長。制造人為的黃體期就是用孕激素處理，使黃體自然消退。消除黃體最有效、便捷的方法是肌肉注射PGF2α及其類似物，促進(jìn)黃體溶解使孕酮水平下降，卵泡發(fā)育趨向一致，從而導(dǎo)致同期發(fā)情［3］。

本試驗(yàn)三個區(qū)域平均同期發(fā)情率PGF2α＋PGF2α法為74.29%，PRID＋PGF2α法為76.92%，兩者差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＝0.792＞0.05），說明這2種方法均可以得到較高的同期發(fā)情率。PRID＋PGF2α法處理的受體牛同期發(fā)情率高于PGF2α＋PGF2α法受體牛的同期發(fā)情率，與 Hansel W（1979）和SmithR.D（1984）的結(jié)果一致［4］，這可能是由于孕酮長時間處理的結(jié)果。

3.2 不同同期發(fā)情方法對移植妊娠率的影響

放置PRID栓使母牛的生殖系統(tǒng)環(huán)境中始終維持較高濃度的孕酮水平，撤栓后孕酮水平急劇下降，在4d之內(nèi)卵巢就會有卵泡發(fā)育成熟排卵，氯前列烯醇的使用選擇在第9d卵巢黃體即將完全退化、卵泡開始發(fā)育的結(jié)合時間注射，高水平孕酮的存在，不僅使氯前列烯醇徹底溶解黃體，還使其本身的副作用有所降低，兩者具有很好的協(xié)同作用。前列腺素處理法只有當(dāng)母牛在周期第5～18d（有功能黃體時期）才能產(chǎn)生發(fā)情反應(yīng)。對于周期第5d以前的黃體，前列腺素并無溶解作用。第一次處理后，經(jīng)10～12d后，再對牛進(jìn)行第二次處理，這時所有的母牛均處于周期第5～18d之內(nèi)，連續(xù)二次處理母牛同期發(fā)情率就顯著提高［5］。

不同發(fā)情方法對受體牛胚胎移植妊娠率有一定影響。目前在國內(nèi)應(yīng)用較普遍，并且也比較認(rèn)可的同期發(fā)情方法主要有兩種。一種是不考慮受體牛的發(fā)情周期，在周期的任意一天給受體牛放入CIRD，此時定為0d，在放入CIRD的第9d，肌肉注射氯前列烯醇0.5mg。在第11d取出，然后觀察發(fā)情；另一種是在受體牛發(fā)情周期中的任何一天肌肉注射氯前列烯醇0.5mg，此時定為0d，48h后不用觀察受體牛發(fā)情，在第9～11d時同樣肌肉注射氯前列烯醇0.5mg，48h以后觀察發(fā)情［2］。相對于后者來說前者的發(fā)情效果要好，并且最終的發(fā)情可用率也較高。據(jù)張立等報(bào)道一次發(fā)情率可以達(dá)到77.5%，可用率為90.7%，這對于胚胎移植實(shí)踐是有效的同期發(fā)情方法［6］。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示：受體牛用PRID＋PGF2α法同期發(fā)情后的胚胎移植妊娠率高于用PGF2α二次注射法處理的奶牛受體妊娠率，兩者差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），與李波、張立等的報(bào)道相似。

3.3 發(fā)情藥物的成本和操作程度比較

在相同的環(huán)境下，從經(jīng)濟(jì)實(shí)用角度看，選擇PGF2α二次注射法比PRID＋PGF 2α法作同期發(fā)情處理好。主要表現(xiàn)在：一是成本低。兩種處理方法相比，PGF2α二次注射法不需支出PRID所需要的費(fèi)用，PRID＋PGF2α法成本（500.00元／1.9g×10枚＋50.00 元／0.2mg×10支 ＝55 元）比 PGF2α＋PGF2α法（50.00元／0.2mg×10支＋50.00元／0.2mg×10支＝10元）成本高約4～5倍。二是操作方便、省工省時。PGF2α二次注射法不用埋栓、拔栓等，1～4d牛即可發(fā)情，而PRID＋PGF2α法第10～13d牛才發(fā)情。

4 小結(jié)

4.1 同情發(fā)情率的差異

用PRID＋PGF2α法和PGF2α＋PGF2α法分別處理受體牛，同期發(fā)情率之間差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。用PRID＋PGF2α法處理受體牛同期發(fā)情率（76.92%）高于用PGF2α＋PGF2α法處理的同期發(fā)情率（74.29%）。

4.2 妊娠率的差異

用PRID＋PGF2α法處理黑白花受體牛移植妊娠率（66.67%）高于用PGF2α＋PGF2α法處理黑白花受體牛移植妊娠率（63.14%），兩種不同同期發(fā)情方法對受體牛移植妊娠率差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。在奶牛胚胎移植中可優(yōu)選PRID＋PGF2α法處理受體牛。

4.3 經(jīng)濟(jì)效益差異

在相同的環(huán)境下，從經(jīng)濟(jì)實(shí)用角度看，PRID＋PGF2α法成本比PGF2α＋PGF2α法成本高約4～5倍，而PGF2α＋PGF2α法成本低、操作方便、省工省時。

［1］李俊生，桑潤滋，馬亞賓.生殖激素提高母牛繁殖率的研究進(jìn)展［J］.河北畜牧獸醫(yī)，2000，16（5）：14.

［2］高慶華，宮長海，韓春梅.奶牛誘導(dǎo)發(fā)情試驗(yàn)［J］.中國草食動物，2001，21（3）：32.

［3］高慶華，何良軍，馬賓祥.不同方法對受體母牛誘導(dǎo)同期發(fā)情效果的比較［J］.中國草食動物，2006，26（1）：16.

［4］武曉英，曹貴東.牛同期發(fā)情技術(shù)的研究［J］.繁殖技術(shù)，2009，37（8）：12－14.

［5］滕 勇.GnRH、PGF2α誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情效果的比較［J］.黃牛雜志，2002，28（5）：1－2.

［6］張 震，吳奇喜，王利寧.影響受體牛同期發(fā)情效果的因素分析［J］.中國牛業(yè)科學(xué)，2007，33（3）：65－66.