俞 奇 蔡春芳

中山市博愛醫(yī)院，廣東中山 528400

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS) 是育齡期婦女的常見病和多發(fā)病,其發(fā)生機(jī)制至今尚不清楚，近年來許多研究表明[1]人體免疫系統(tǒng)的異常和EMS 的發(fā)病有關(guān),細(xì)胞免疫可能參與EMS 的發(fā)生發(fā)展。腫瘤壞死因子-α(TNF-α) 和白介素-6（IL-6）是由單核巨噬細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等分泌,具有多種生物活性功能的細(xì)胞因子,TNF-α和IL-6 具有調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能,并參與多種生理免疫和病理過程。視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4) 是新近發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，與炎癥反應(yīng)等方面關(guān)系密切[2]。因此，該研究選取2009年1月—2012年4月該院婦產(chǎn)科收治的經(jīng)腹腔鏡檢查和(或) 開腹手術(shù)后并經(jīng)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜異位癥 (EMS 組)56例。目的是檢測(cè)EMS患者血清及腹腔液中的RBP4、TNF-α和IL-6水平，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院婦產(chǎn)科收治的經(jīng)腹腔鏡檢查和(或) 開腹手術(shù)后并經(jīng)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜異位癥(EMS 組)56例，年齡(34.6±6.8)歲。采用美國生育學(xué)會(huì)修訂的EMS 分期標(biāo)準(zhǔn)(rAFS)進(jìn)行分期，32例Ⅰ～Ⅱ期患者，24例Ⅲ～Ⅳ期患者。對(duì)照組30例為同期因良性卵巢囊腫或者漿膜下子宮肌瘤或腹腔鏡檢查正常的病人住院手術(shù)的患者，平均年齡(34.5±5.2)歲。兩組均符合:①生育年齡的婦女，月經(jīng)周期正常；②至少3個(gè)月未接受激素類藥物治療；③無自身免疫性疾病、糖尿病、肝臟疾病或者惡性腫瘤；④同時(shí)排除了生殖器官發(fā)育不良，腹腔鏡或開腹后檢查證實(shí)無急性炎癥及其他盆腔改變。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

兩組患者全部在麻醉前取血，取血后5000 r/min 離心10 min(離心半徑為15 cm)，分離血清，于-70℃保存待測(cè)。兩組患者全部于腹腔鏡檢查或者手術(shù)時(shí)直視下經(jīng)穿刺針吸取子宮膀胱陷凹和子宮直腸陷凹腹腔液，上訴方法離心，取上清液，置-70℃冰箱凍存待測(cè)，有血液污染者則棄置不用。

1.3 檢測(cè)方法

采用酶聯(lián)免疫法ELISA 測(cè)定血清和腹腔液的RBP4 水平，RBP4 試劑購自美國Phoenix 公司；腹腔液和血清中TNF-α和IL-6的水平同樣采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 檢測(cè)，試劑盒為進(jìn)口分裝產(chǎn)品(美國R&D 試劑公司)；操作方法按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清及腹腔液中RBP4、TNF-α和IL-6水平的比較

EMS 組腹腔液RBP4 及TNF-α、IL-6 的含量均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；EM組血清中RBP4 及TNF-α、IL-6 的水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。EMS 組患者腹腔液中RBP4 含量明顯高于血清中含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而同樣腹腔液中TNF-α和IL-6 的含量明顯高于血清中含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 EMS 組與對(duì)照組患者腹腔液及血清中RBP4及TNF-α、IL-6 變化的比較(±s)

表1 EMS 組與對(duì)照組患者腹腔液及血清中RBP4及TNF-α、IL-6 變化的比較(±s)

注：▲P<0.05,與對(duì)照組血清比較；*P<0.05,與EMS 組血清比較。

內(nèi)容 EMS 組血清 腹腔液對(duì)照組血清 腹腔液RBP4(ug/mL)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)54.7±11.2▲87.9±23.4▲45.6±9.6▲66.3±11.9*103.6±25.8*89.6±16.7*36.2±9.9 56.7±16.8 33.7±6.8 40.2±6.8 67.8±11.9 54.9±10.1

2.2 EMS患者組RBP4 與TNF-α、IL-6 相關(guān)性研究

EMS 組患者血清和腹腔液中RBP4 與TNF-α 的水平之間存在正相關(guān)(r 分別為0.567 和0.618，P＜0.05)；EMS 組患者血清和腹腔液中RBP4 與IL-6 的水平之間存在正相關(guān)(r 分別為0.442 和0.465，P＜0.05)。

表2 EMS患者組RBP4 與TNF-α、IL-6 相關(guān)性研究

2.3 不同期別EMS患者腹腔液及血清中RBP4 及TNF-α、IL-6水平變化

Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中RBP4 及TNF-α、IL-6 含量均較Ⅰ～Ⅱ期患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Ⅲ～Ⅳ期患者血清中RBP4 及TNF-α、IL-6 含量均較Ⅰ～Ⅱ期患者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 不同期別EMS患者腹腔液及血清中RBP4 及TNF-α、IL-6水平變化(±s)

表3 不同期別EMS患者腹腔液及血清中RBP4 及TNF-α、IL-6水平變化(±s)

注：*P<0.05,與Ⅰ～Ⅱ期比較。

組別血清RBP4(ug/mL)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)腹腔液RBP4(ug/mL)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)Ⅰ-Ⅱ期Ⅲ-Ⅳ期48.9±9.6 61.2±12.8*70.5±13.2 108.4±30.9*35.7±6.9 57.9±10.2*56.3±8.9 73.6±15.3*87.9±16.5 122.5±34.5*98.4±21.8 70.2±14.4*

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥(EMS) 是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì)) 出現(xiàn)在子宮以外的身體其他部位并種植生長而產(chǎn)生的病變。目前發(fā)病機(jī)制仍然不清楚，目前的研究表明，免疫機(jī)制在異位內(nèi)膜的種植、定位和生長增殖過程中均起重要作用，提出EMS 是一種自身免疫性疾病[3]。正常腹腔液中存在大量免疫活性細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、T、B 細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞,其中巨噬細(xì)胞占90%以上。當(dāng)機(jī)體發(fā)生EMS后,異位的子宮內(nèi)膜作為抗原刺激患者的免疫系統(tǒng),誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答,導(dǎo)致其腹腔液中巨噬細(xì)胞數(shù)量與活化程度,以及外周血液中淋巴細(xì)胞的活性均顯著增加并釋放各類炎癥因子和細(xì)胞因子[4]。為了證實(shí)這一理論，該研究收集了EMS患者和對(duì)照組患者的腹腔液和血清檢測(cè)得出EMS患者的血清和腹腔液的TNF-α和IL-6水平明顯高于對(duì)照組，且EMS 組Ⅲ～Ⅳ期的TNF-α和IL-6 明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，說明與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，TNF-α和IL-6 在EMS的發(fā)病過程中起著一定的作用。EMS患者有腹腔環(huán)境的變更,即存在腹膜組織與其周圍腹腔液的相互作用,腹膜發(fā)生EMS 病灶的形成、維持和轉(zhuǎn)化。免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及促炎性反應(yīng)的作用形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致惡性循環(huán)，改變了腹腔內(nèi)環(huán)境，有利于炎性細(xì)胞在EMS 病灶的積聚、炎性反應(yīng)和粘連形成，從而在EMS 發(fā)病過程中起重要作用[5]。

視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，主要由肝臟分泌，近年來發(fā)現(xiàn)它也是由脂肪細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì)，編碼RBP4 基因位于10q，能將維生素A(VitA)從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)至靶組織以及實(shí)現(xiàn)VitA 的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的特異的運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白[6]；但研究發(fā)現(xiàn)RBP4 與一點(diǎn)胰島素抵抗的發(fā)展有關(guān)[7]。該研究在EMS患者中研究了RBP-4 的水平變化，發(fā)現(xiàn)EMS患者血清和腹腔液中的RBP4 明顯均高于正常組，且隨著病情的分期程度嚴(yán)重程度Ⅲ～Ⅳ期比Ⅰ～Ⅱ期水平更高，說明RBP4 的水平可以反應(yīng)疾病嚴(yán)重程度。進(jìn)而我們?cè)诜治隽薘BP4 與炎癥因子TNF-α和IL-6 相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)EMS患者的RBP4 與炎癥因子TNF-α和IL-6 均呈正相關(guān)性。說明RBP4 在EMS 中也參與了炎癥的調(diào)節(jié)。EMS 中RBP4 的升高機(jī)制可能是異位內(nèi)膜的種植和生長過程中，刺激機(jī)體產(chǎn)生了大量的炎癥因子，炎癥介質(zhì)過量釋放導(dǎo)致RBP4 的表達(dá)迅速增加。但其具體作用途徑及方式尚不清楚。

綜上所述，子宮內(nèi)膜異位癥患者中血清和腹腔的RBP-4和TNF-α、IL-6水平明顯增高，且隨著病情嚴(yán)重程度呈逐漸升高趨勢(shì)；且RBP-4 與TNF-α、IL-6 呈明顯正相關(guān)性，說明RBP-4在EMS 中有參與炎癥反應(yīng)可能。

[1]Slater M,Cooper M,Murphy CR.Human growth hormone and interleukin-6 upregulated in endometriosis and endometriod adencarcinoma[J].Acta Histochem,2006，108(1):3203-3210.

[2]Yao-BorengasserA，Varma V，Bodles AM，et al.Retinol binding protein 4 expression in humans:relationship to insulin resistance，inflammation，and response to pioglitazone[J].J Clin Endocrinol Metab，2007，92(7):2590-2597.

[3]Hever A，Roth RB，Hevezi P,et al.Human endometriosis is associated with plasma cells and overexpression of B lymphocyte stimulator[J].PNAS，2007，104(30):12451-12456.

[4]Dunselman GA,Hendr ix MG,Bouckaet PX,et al.Functional aspects of peritoneal macrophages in endometriosis of women[J].J Rep rod Fertil，1988，82(4):707-710.

[5]Kayisli UA，Mahutte N G，Arici A.Uterine chemokines in reproductive physiologyand pathology[J].Am J Reprod Immunol，2002，47(4):213-221.

[6]Seo JA，Kim NH，Park SY,et al.Serum retinol-binding protein 4 levels are elevated in non-alcoholic fatty liver disease[J].Clin Endocrinol，2008，68(4):555-560.

[7]Perseghin G，Lattuada G，De C,et al.Serum retinol-binding protein-4，leptin and adiponectin concentrations are related to ectopic fat accumulation[J].J Clin Endocrinol Metab，2007，92(12):4883-4888.